Работа 3. Определение коэффициента ретракции кровяного сгустка

Кровь после свертывания обладает способностью сжиматься, с высвобождением сыворотки.

Ретракция – стягивание, сжатие кровяного сгустка с выделением сыворотки. Эта реакция и скорость ее определяется наличием в крови тромбоцитов, фибриногена, кальция и других солей в плазме, а также объемом крови и температурой окружающей среды. Для выполнения этой работы у животного в про­бирку с делениями набирают кровь, которая у лошадей и собак через 1…2 часа после свертывания начинает выделять сыворотку. Через сутки сыворотку отсасывают, определяют ее объем, отношение которого к взятой крови будет называться коэффициентом ретракции, он в среднем равен 0.3…0.4:

К_{ретракции} = V_{сыворотки} / V_{взятой крови}

1

2

3

4

Рис. 10. Получение кристаллов гемина.

1 - аморфные, неправильной формы, окрашенные комочки не распавшегося гемоглобина; 2 - бесцветные, прозрачные, в форме снежинок кристаллы уксусно-кислого натрия; 3 - бесцветные, прозрачные, кубической формы кристаллы поваренной соли; 4 - окрашенные, призматической формы кристаллы Тейхмана-Гемина.

ВОПРОСЫ:

1. На чем основан метод определения общего белка в сыворотке крови.

2. Каково количество общего белка в плазме крови животных?

3. Как можно получить кристаллы гемина и каково его применение на практике?

ЗАНЯТИЕ 5. ПОДСЧЕТ КОЛИЧЕСТВА ЭРИТРОЦИТОВ

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Овладеть методикой подсчета эритроцитов и определить их количество, изучить основные функций эритроцитов.

Работа 1. Подсчёт количества эритроцитов

Устройство смесителя для красных телец

Меланжер или смеситель для эритроцитов имеет форму капилляра, который в верхней трети имеет шарообразное расширение. Выше это расширение опять переходит в капилляр с меткой 101, на который одевается резиновая трубочка. На длинном отрезке капилляра имеются метки 0,5 и 1. Кровь надо набрать до метки 0,5, а разбавляющую жидкость (физиологический раствор) до метки 101, кровь разбавляется в 200 раз (рис. 11).

Рис. 11. Камера для подсчета форменных элементов крови и смеситель для разбавления крови.

А — смеситель, Б — счетная камера (вид сверху), В — вид камеры сбоку, Д — распределение эритроцитов на сетке счетной камеры под микроскопом.

Устройство счетной камеры

Счетная камера Горяева состоит из толстого предметного стекла с желобками, образующими три поперечно расположенные плоские площадки. Средняя из них разделена желобком на две части. По обе стороны от желобка на стекле нанесены сетки. Сетка состоит из 100 больших не деленных квадратов и 25 больших, деленных на 16 маленьких квадратов.

Взятие крови и разбавление

Кровь для подсчета эритроцитов берется у животного путем прокола ушной вены. Место прокола дезинфицируется. Первая выступившая капля насухо удаляется, а для набирания крови в смеситель надо образовать большую каплю. Перед уколом заранее приготавливают 0,9% раствор поваренной соли в небольшом стаканчике. На смеситель надо надеть резиновую трубочку, насосать точно до метки 0,5, ваткой удалить кровь с поверхности капилляра, из стаканчика, держа смеситель вер­тикально, набрать физиологический раствор до метки 101. Набрать кровь в смеситель до метки 0,5, а затем насосать физиологический раствор до метки 101, кровь разбавили в 200 раз. Снять трубку со смесителя, оба конца смесителя закрыть пальцами и смеситель стряхивать 2…3 минуты.

Пробирочный метод разбавления

В маленькую пробирку набрать пипеткой и вылить 4 мл физиологического раствора. Туда же добавить 0,02 мл крови. Хорошо перемешать.

Счисление эритроцитов

К камере Горяева притирают покровное стекло до появления радужных колец. Под малым увеличением микроскопа рассматривает сетку, и находят 5 больших квадратов, деленных на 16 маленьких квадратов по диагонали сетки. Из смесителя выпустить первые 2 капли на ватку, а третьей каплей заправить сетку, касаясь края притертого покровного стекла.

Подсчет эритроцитов производить при малом увеличении (окуляр 15х, объектив 20х), конденсор опустить. Найдя левый верхний угол сетки, установить в поле зрения большой квадрат, деленный на 16 маленьких, и начинать считать. Считают все эритроциты, которые находятся внутри квадрата и лежащие на верхнем и левом ребре данного квадрата. Эритроциты, лежащие на других гранях этого квадрата не считают, они войдут в счет при переходе на соседние квадраты. Так сосчитать все эритроциты, находящиеся в 16 маленьких квадратах, Затем передвинуть камеру, чтобы в поле зрения был следующий большой квадрат, и так все 5 квадратов, деленных на 16 маленьких.

К полученной сумме эритроцитов приписать 4 нуля, что будет соответствовать количеству эритроцитов в 1 мм³ крови, в миллионах.

По международной системе измерения общую сумму эритроцитов умножить на 10¹⁰, что будет соответствовать количеству эритроцитов в 1 л крови. Пример: в 80 малых квадратах подсчитали 700 эритроцитов, в 1 мм³ крови их будет 7000000, а в 1 л крови - 7 * I0¹² (СИ).

В среднем у крупного рогатого скота в 1 л крови содержится 5...7 * 10¹² эритроцитов. Коэффициент 10¹² называется «тера», и общий вид записи следующий: 5...7 Т/л (читается: тера на литр). У свиней в крови содержится 5...8 Т/л эритроцитов. У коз до 14 Т/л. У коз большое количество эритроцитов обусловлено тем, что они очень маленького размера, поэтому объем всех эритроцитов у коз такой же, как у других животных.

Содержание эритроцитов в крови лошадей зависит от их породы и хозяйственного использования (у лошадей шаговых пород - 6...8 Т/л, у рысистых - 8...10, а у верховых - до 11 Т/л).

У высокопродуктивных молочных коров уровень эритроцитов соответствует верхней границе нормы, у низкопродуктивных - нижней. У новорожденных животных количество эритроцитов в крови всегда больше, чем у взрослых. Так, у телят 1...6-месячного возраста содержание эритроцитов доходит до 8...10 Т/л и стабилизируется на уровне, свойственном взрослым животным, к 5...6 годам. У самцов в крови содержится больше эритроцитов, чем у самок.

ВОПРОСЫ:

1. Как разбавить кровь для подсчета эритроцитов.

2. Как и в каких квадратах сетки Горяева ведут счисление эритроцитов?

3. Каково содержание эритроцитов в крови различных видов сельскохозяйственных животных?

4. Перечислите и объясните функции эритроцитов в крови животных.

ЗАНЯТИЕ 6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ГЕМОГЛОБИНА И ЭРИТРОЦИТОВ ЭРИТРОГЕМОМЕТРОМ. ВЫЧИСЛЕНИЕ ЦВЕТНОГО ПОКАЗАТЕЛЯ И СОДЕРЖАНИЯ ГЕМОГЛОБИНА В ОДНОМ ЭРИТРОЦИТЕ

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Овладеть методикой определения эритроцитов с помощью эритрогемометра, определить содержание гемоглобина и эритроцитов с помощью эритрогемометра, овладеть методикой вычисления цветного показателя и содержания гемоглобина в одном эритроците.

Работа 1. Определение количества гемоглобина эритрогемометром