Тема 3. Лабораторна діагностика лістеріозу

Збудник лістеріозу – Listeria monocytogenes викликає інфекційне захворювання багатьох видів тварин в тому числі диких, гризунів, птахів та людини, яке характеризується ураженням центральної нервової системи (парези та паралічі, світлобоязнь, судоми), статевих органів (аборти), молочної залози (мастити) і явищами септицемії (підвищення температури тіла, пригнічення).

Патологічним матеріалом є трупи дрібних тварин, паренхі-матозні органи (печінка, селезінка, нирки, уражені ділянки легень), мозок, оболонки плода, виділення з родових шляхів, молоко з ураженої частини вим’я. Для серологічної діагностики надсилають кров хворих тварин.

Мікроскопія. В препаратах фарбованих за Грамом, лістерії мають вигляд грампозитивних поліморфних розміром 0,5–2 мкм паличок, розміщених поодиноко, у вигляді римської цифри п’ять (V), коротких ланцюжків та паралельно. Збудник спор та капсул не утворює, рухомий в молодій (6–12 год) бульйонній культурі.

Культуральні властивості. З патологічного матеріалу роблять посіви на звичайний або печінковий агар та бульйон з додаванням 1% глюкози та 2–3% гліцерину. Крім того, посіви роблять на 5%-й кров’яний агар та елективні середовища: МПА з телуритом калію й сироваткою крові, МПА з телуритом калію і поліміксином.

При дослідженні абортованих плодів посіви роблять з вмісту шлунка та внутрішніх органів. Культивують у мікроаерофільних умовах (5–10% СО₂). При відсутності росту збудника посіви витримують у термостаті протягом двох тижнів. При наявності збудника МПБ через 12–24 год робиться каламутним. На МПА утворюються дрібні колонії-росинки. На кров’яному агарі з’являються ознаки бета-гемолізу.

Біохімічні властивості вивчають у культур, що мають типову для лістерій морфологію. Лістерії розщеплюють з утворенням кислоти без газу – глюкозу, мальтозу, саліцин. Виділяють каталазу. Володіють редукуючими властивостями, а саме знебарвлюють середовища з лакмусом, метиленовою синькою (через 3–6 год).

Серологічну ідентифікацію проводять крапельним методом РА на склі. З цією метою спочатку використовують полівалентну лістеріозну сироватку, аглютинуючу усі сероваріанти лістерій. Після ідентифікації на рівні виду ставлять РА з серогруповими сироватками, що дозволяє віднести виділену культуру лістерій до певного серотипу (серогрупи). Антиген, для крапельної РА з полівалентною сироваткою, використовують 24–30-годинну агарову культуру вирощену при 18–26⁰С. При визначенні серотипу антигеном служить 18–24-годинна агарова культура, вирощена при 37⁰С. Врахування результатів реакції проводять через 3 хв: утворення пластівців в краплі суміші антиген–сироватка і відсутність їх у контролі (фізрозчин з антигеном) оцінюють як позитивний результат РА.

Біопробу ставлять на білих дорослих мишах, краще мишенятах 5-6-денного віку. При наявності збудника мишенята гинуть через 18–40 год, а дорослі миші – на другу–четверту добу.

З метою диференціації збудників лістеріозу і бешихи свиней добовою культурою заражають морських свинок і кролів. На морських свинках ставлять кон’юнктивальну пробу. Матеріал наносять на кон’юнктиву ока тварини. Через дві–чотири доби лістерія зумовлює розвиток ознак гнійно-катарального кератокон’юнктивіту.

Шкірна проба ставиться на кролях. При введенні 0,3–0,5 мл культури підшкірно збудник зумовлює некроз шкіри, який спостерігають через одну-дві доби після введення.

Серологічна діагностика. У лабораторію надсилають кров (сироватку крові), відібрану від хворих тварин або при підозрі на захворювання. Ставлять РА, РЗК загальноприйнятими методами.

Результат серологічної діагностики позитивним вважають тоді, коли виявляють специфічні аглютиніни (РА не нижче як у два плюси) у розведеннях крові 1 : 200 і вище (вівці, кози, свині), 1 : 400 і вище (коні, велика рогата худоба).

Виявлення комплементзв’язуючих антитіл у сироватці, розведеній 1 : 10, свідчить про позитивний (три–чотири плюси) або сумнівний (один–два плюси) результат серологічної діагностики.

Експрес-діагностику лістеріозу здійснюють за допомогою РІФ. Реакцію ставлять прямим методом. При виявленні у мазках з патологічного матеріалу типових бактерій і специфічної люмінісцен-ції (на три-чотири плюси) діагноз вважають встановленим.