Вопрос 67. Задачи клинической микробиологии.

1) Оценить природу возбудителя и как можно быстрее идентифицировать его. уметь отличить возбудителя заболевания от представителя нормальной микрофлоры. 2) Правильно выбрать орган и место, откуда необходимо брать материал у больного на исследование. Напр.,Salmonella typhi, сначала находится в тонком кишечнике, с 10-го дня начала инфекционного процесса персистирует в крови, а на 5-й неделе снова попадает в тонкий кишечник.

3) Соблюдать правила взятия и транспортировки клинического материала от больного. Например, при подозрении на менингит и коклюш материал берут из верхних дыхательных путей тампоном на проволочке, который загнут под углом 45°. менингит – вверх, коклюш – вниз

4)Правильный выбор условий выращивания возбудителя заболевания. Главная цель - получение чистой культуры. Нужно подобрать состав питательной среды и условия выращивания (температуру и аэрацию).

5) Выбор соответствующей антимикробной терапии. Желательно еще до получения окончательных результатов лабораторных исследований. На основании: - предварительных микроскопических исследований узнать тип строения клеточной стенки (Гр+ или Гр-), -при выявлении чувствительности микроорганизмов к АМП в процессе выращивания

6)Правильная интерпретация результатов лабораторных исследований с учетом и во взаимосвязи со всем комплексом клинической информации о больном .

Вопрос 68. Методы клинической микробиологии.

Клинич. микробиология – научная дисциплина, изучающая характер взаимоотношений между макро- и МО в норме и, главным образом, в динамике патологического процесса с учетом проводимой антимикробной терапии. Все методы клинической микробиологии и иммунологии можно разделить на 4 группы: 1. Микробиологические методы.: Методы микроскопические. Основаны на применение микроскопа различной модификации. Световая, люминесцентная, электронная, конфокальная микроскопия. Преимущество перед другими методами быстрота (30-60 мин.). Методы культуральные. Выделение чистой культуры. Идентификация выделенной чистой культуры по совокупности морфологических, биохимических, серологических и других признаков. Определение чувствительности МО к антимикробным препаратам. Агар Мак-Конки. Выращивают Гр- МО. Окраска в розовый цвет выделяет лактозопозитивные МО (Escherichia coli). Все микробиологические исследования наиболее информативны и достоверны, особенно если они подтверждены дополнительными серологическими данными (выявление антител к выявленному возбудителю или возбудителям). 2. Иммунологич. методы. Методы поиска АГ возбудителей инфекционных заболеваний с помощью уже имеющихся антител. Методы поиска АТ. Выявление иммунного ответа по нарастанию титра АТ (используем АГ). Иммунологические методы включают серодиагностику, аллергодиагностику, методы оценки клеточного (Т-системы) и гуморального (В-системы) иммунитета. Серодиагностика основана на обнаружении специфических антител в сыворотке крови больного человека и определении накопления их в процессе заболевания. В последнем случае сроки исследования значительно удлиняются и ответ может быть получен из серологической лаборатории в период реконвалесценции, что придает данному методу ретроспективный характер. Кожно-аллергические пробы применяются для выявления гиперчувствительности к различного рода антигенам (аллергенам) при диагностике ряда инфекционных заболеваний (туберкулез, бруцеллез, туляремия и др.), а также атопий и других неинфекционных аллергических состояний. Методы оценки иммунологического состояния организма человека включают ряд тестов, по которым судят о количестве и функциональной активности Т- и В - лимфоцитов. Для серодиагностики используем иммунологические реакции: Реакция нейтрализации, Реакция связывания комплемента, Реакция иммунофлюоресценции, Реакция непрямой гемагглютинации, Иммуноферментный анализ, Иммунная электронная микроскомия. Диагностич. критерии: 1. Диагностические титры (D-титры). 2. Нарастание титра антител. Эти титры оценивают иммунологические реакции. 3. Молекулярно-биолоические методы. -Методы выявления ДНК или РНК возбудителя. Это реакции ПЦР, - Методы определения структуры 16S рРНК малой субъединицы бактериальной хромосомы (методы риботипирования). 4. Неспецифические лабораторные тесты. Направлены на разные цели. Обнаружение в исследуемом материале не самих бактерий, а их продуктов метаболизма (токсины при ботулизме, например). Тесты, по характеру отклонения которых можно узнать о наличии патологических отклонений и изменений, специфических для инфекционного процесса определенной этиологии (например, рост активности трансаминазы). Полная лабораторная диагностика включает: 1) Берут клинический материал, красят по Гр, микроскопия, выявление специфических признаков. Обнаружение кокков, палочек, спор, цист и др. 2) Исследование биохимических свойств. O/F тест на D-глюкозу (образуется кислота и газ). Реакции “пестрого ряда” – исследование ферментативных способностей в отношении ряда различных углеводов на способность окислять или ферментировать лактозу, маннозу, галактозу. 3) Выявлении каталаза +/– ; оксидаза +/– ; выявляют нитрат-редуктазную активность. Определение семейства. 4) Определение рода по исследованию ферментативных признаков. 5) Исследование до вида, серогруппа, серотипа и серовара. Проводят серотипирование с набором серологических диагностических сывороток. Проводят фаготипирование с набором диагностических фагов (специальные реакции по рецепторам). Бактериоцинотипирование на бактериоцины. Исследование антибиотикограмм. Биопробы основаны на неодинаковой чувствительности разных лабораторных животных к определенным микроорганизмам. Данный метод заключается в выражении животных определенного вида, возраста и массы тела чистым культурам микробов или исследуемым материалам.