Методические указания к практическому занятию № 3 (для студентов)

Факультеты: лечебно-профилактический, медико-профилактический, педиатрический

Курс: 2

1. Тема занятия: Механизм действия ферментов.

2. Учебная цель занятия: изучить механизм действия ферментов, особенности протекания ферментативных реакций.

3. Задачи занятия:

1. Изучить общие принципы действия катализаторов и особенности ферментативного катализа.

2. Получить представления о механизме действия ферментов.

3. Получить представления об основах химической кинетики ферментативных реакций: влияния различных факторов на скорость реакции.

4. Получить представления о константе Михаэлиса и ее использовании в клинико-диагностических целях.

5. Получить представления о видах ингибирования активности ферментов, о классификации ферментов.

6. В ходе выполнения практической работы закрепить теоретические представления, изучив специфичность α-амилазы слюны, исследовав влияние рН, температуры, солей тяжелых металлов на ее активность.

4. Продолжительность занятия: 3 акад. Часа.

5. Задание студентам:

1. Изучить специфичность фермента α-амилазы.

2. Изучить влияние рН на активность α-амилазы.

3. Исследовать влияние температуры на активность α-амилазы.

4. Изучить влияние активаторов и ингибиторов на активность α-амилазы.

6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии. Работа № 1. Специфичность фермента α-амилазы.

Принцип метода: Специфичностью действия ферментов называется их способность катализировать только определенные химические реакции. Например, α-амилаза ускоряет гидролиз крахмала, но не виляет на скорость гидролиза сахарозы.

Ход работы:

1. В две пробирки вносят по 5-10 капель слюны, разведенной в 10 раз.

2. В одну из пробирок добавляют 10 капель крахмала, в другую – 10 капель раствора сахарозы.

3. Обе пробирки помещают на 10 мин в термостат при 40°С.

4. Затем содержимое первой пробирки разливают пополам и проделывают в одной пробирке реакцию с йодом, а в другой – с реактивом Фелинга. Отмечают результат.

5. В пробирку с раствором сахарозы добавляют реактив Селиванова и нагревают содержимое, в пламени спиртовки. Если сахароза не гидролизовалась, качественная реакция на фруктозу будет отрицательной.

Рекомендации по оформлению результатов работы и написанию выводов

Полученные результаты оформите в виде таблицы № 1.

Таблица 1

Определение специфичности действия α-амилазы

Субстрат	Контрольные реакции
	Йод-крахмальная проба	Реакция с реактивом Фелинга	Реакция Селиванова
Крахмал
Сахароза

В выводах отметить, почему α-амилаза расщепляет крахмал, но не действует на сахарозу.

Изобразить фрагмент макромолекулы амилопектина, указать тип гидролизуемой связи.

Работа № 2. Влияние рН на активность ферментов.

Принцип метода: Оптимум рН α-амилазы слюны, при котором она обладает максимальной каталитической активностью – 6,6-6,8, что соответствует значению рН в ротовой полости. Сдвиг рН в кислую или щелочную сторону приводит к инактивации фермента.

Об изменении активности слюнной α-амилазы судят качественно по уменьшению интенсивности окраски раствора после добавления йода в инкубационную среду.

Ход работы:

1. Получают слюну, разведенную в 10 раз.

2. В три пронумерованные пробирки наливают из бюреток по 1 мл буферного раствора со значением рН соответственно 4,0; 7,0; 10,0.

3. Добавляют в каждую из пробирок последовательно по 2 мл 0,1% раствора крахмала и по 1 мл слюны.

4. Пробирки помещают в термостат с температурой 45°С на 15 мин.

5. После инкубации в каждую из пробирок добавляют по 1 капле раствора йода. Отмечают результат.