Методические указания к практическому занятию № 32/2 (для студентов)

Факультеты: педиатрический

Курс: 2

1. Тема занятия: Биохимия молока и лактации.

2. Учебная цель занятия: Изучить нейроэндокринную регуляцию развития молочных желез и лактации; механизмы образования молока, химический состав и питательную ценность в различные сроки лактации.

3. Задачи занятия:

1. Ознакомиться со структурой, биохимической ролью и метаболизмом гормонов, регулирующих развитие и лактацию молочных желез.

2. Изучить в сравнительном аспекте физико-химические свойства, качественный и количественный химический состав, питательную ценность различных видов женского молока и зрелого коровьего.

3. Научиться определять в молоке содержание химических веществ, проводить специфическую реакцию Умикова с целью отличия женского молока от коровьего.

4. Продолжительность занятия: 3 акад. Часа.

5. Задание студентам:

1. Получение осадка казеина и его открытие.

2. Открытие альбуминов и глобулинов в молоке биуретовой реакцией.

3. Отделение альбуминов и глобулинов.

4. Открытие в безказеиновом фильтрате молока кальция, неорганического фосфора, лактозы, аминокислот, витаминов А, В₂.

5. Проведение специфической реакции Умикова.

6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии. Работа № 1. Осаждение казеиногена.

В пробирку отмеривают 2 мл 0,1 н СН₃СООН и 2 мл 0,1 н CH₃COONa. Полученный раствор представляет буферную смесь с рН=4,7, соответствующим изоэлектрической точке казеиногена. Добавляют в пробирку 20 капель молока, раствор взбалтывают, казеиноген выпадает в осадок. Через 5—7 минут жидкость отфильтровывают от осадка казеиногена через двойной бумажный фильтр. Если фильтрат получается мутным, повторяют фильтрование. Фильтрат и осадок казеиногена сохраняют для дальнейших исследований.

На фильтр с осадком казеиногена наливают 10—12 капель 0,1 н Na₂CO₃. Казеиноген растворяется в соде и раствор его проходит через фильтр. Открывают казеиноген в растворе биуретовой реакцией, прибавляя к нему 5 капель 10% NaOH и 2 капли 2% CuSО₄.

Работа № 2. Отделение альбуминов и глобулинов.

К 1 мл фильтрата после осаждения казеиногена добавляют 1 мл насыщенного раствора сернокислого аммония и оставляют стоять 10 минут. Жидкость мутнеет вследствие выпадения в осадок глобулинов. Отфильтровывают осадок глобулинов через бумажный фильтр. К полученному фильтрату добавляют кристаллический сернокислый аммоний до полного насыщения— выпадает осадок альбуминов.

Работа № 3. Открытие кальция, фосфора, лактозы, аминокислот.

Открытие кальция. Отмеривают в пробирку 10 капель фильтрата после осаждения казеиногена и добавляют 10 капель раствора щавелевокислого аммония. Раствор мутнеет вследствие образования осадка щавелевокислого кальция.

Открытие фосфора. К 10 каплям фильтрата после осаждения казеиногена добавляют 5 капель раствора молибденово-кислого аммония, 5 капель 1% гидрохинона и через 5 минут 10 капель карбонатсульфита. Развивается синее окрашивание.

Открытие лактозы. Остаток фильтра после осаждения казеиногена нагревают в пробирке до кипения и в кипящую жидкость по каплям прибавляют 0,1 н Na₂CO₃ до полного осаждения (выпадения в виде хлопьев) альбуминов и глобулинов. Добавление Na₂CO₃ производят с целью довести реакцию среды до рН, соответствующего изоэлектрической точке этих белков. Жидкость охлаждают до комнатной температуры, осадок отфильтровывают через бумажный фильтр. Полученный фильтрат делят на 2 части. В одной из них открывают присутствие лактозы реакцией Фелинга. Для этого к фильтрату добавляют по 10 капель реактивов Фелинга I и II нагревают до кипения.

Открытие аминокислот. Ко второй части фильтрата добавляют 5 капель 0,1 н СН₃СООН, 3 капли 1% водного раствора нингидрина и кипятят 1—2 минуты. Развивается фиолетовое окрашивание.

Работа № 4. Реакция Умикова на отличие женского молока от коровьего.

В одну пробирку отмеривают 2 мл женского молока, в другую — 2 мл коровьего. В обе пробирки прибавляют по 2 мл 15% раствора аммиака и помещают их на 10 минут в водяную баню при 60° С. В пробирке с женским молоком развивается буро-фиолетовое окрашивание. Окраска коровьего молока не меняется.

Работа № 5. Определение витамина А.

Работа № 6. Определение витамина B₂ (рибофлавин).

Реакция основана на способности витамина В₂ легко восстанавливаться. Раствор витамина В₂, имеющий желтый цвет, при восстановлении приобретает сначала розовый цвет за счет образования промежуточных соединений, а затем обесцвечивается. Восстановленная форма рибофлавина бесцветна.

В пробирку наливают 10 капель 0,025% раствора витамина В₂, добавляют 5 капель концентрированной НСl и опускают зернышко металлического цинка. Сразу же начинается выделение пузырьков водорода. Жидкость сначала розовеет, затем обесцвечивается.