Ускоренный метод приготовления давленых препаратов

Фиксируют материал по Дайеру в смеси этилового спирта, уксус­ной кислоты, хлороформа и формалина (10:2:2:1) в течение 5 мин.

Мацерацию проводят в растворе 1 н. НС1 при 60°С в течение нескольких минут в зависимости от объекта. Окрашивают объект 2-3 мин в смеси орсеина, молочной и пропионовой кислот. Для этого 2 г орсеина растворяют в 100 мл смеси, состоящей из рав­ных частей молочной и пропионовой кислот, добавив до 45% воды.

Приготовление препаратов из стеблевой меристемы

У злаков корни трудно раздавливаются, а цитоплазма клеток не­редко сильно окрашивается ацетокармином. В таких случаях изучение митозов и хромосом можно проводить на стеблевой ме­ристеме.

Колеоптиле (до 1 см) проросшего семени твердой пшеницы обрабатывают по методике Маккья не менее 3 ч 0,3%-м раство­ром колхицина и насыщенным раствором парадихлорбензола. Фиксируют проростки в уксусном алкоголе (3:1). Затем матери­ал проводят через серию растворов спирта (80, 50, 30%-й), про­мывают в воде и красят реактивом Шиффа (см. с. 101).

При изучении действия мутагенов на пшеницу в Институте химической физики АН СССР было предложено проводить иссле­дования во время первых митозов в конусе нарастания стебля в фазе колеоптиле.

Порядок работы следующий. Зерновки пшеницы замачивают и ставят в термостат при 25 °С. Через 36-40 ч колеоптиле с щит­ком семени фиксируют в уксусном алкоголе в течение 12 ч. Мате­риал хранят в 70%-м растворе спирта со следами цитрата желе­за. Окрашивают в ацетокармине. Материал можно оставлять на ночь в красителе или .нагревать в нем в течение 5-6 мин до лег­кого вскипания. В 45%-м растворе уксусной кислоты отделяют конус нарастания и раздавливают его под покровным стеклом'. Метод используют для изучения хромосомных перестроек в ана­фазе и митотической активности клеток под действием мутаге­нов.

Приготовление препаратов из молодых листочков

Фиксируют молодые листочки в фазе наиболее сильного роста. В качестве фиксатора используют уксусный алкоголь. Промыва­ют и сохраняют материал в 70%-м растворе спирта. Для окраши­вания листочки помещают в краситель (ацетокармин, ацетоорсеин или ацетолакмоид) и доводят до кипения несколько раз. За­тем их переносят в 45%-й раствор уксусной кислоты па предмет­ное стекло. От листочка отделяют основание, так как здесь чаще встречаются митозы, а остальную часть удаляют. Основание листочка разрезают на стекле, накрывают объект покровным стеклом и постукивают спичкой сверху. Метод используют в ра­боте со злаками и картофелем. Можно обрабатывать листочки перед фиксацией 0,2%-м раствором колхицина в течение 1-2 ч.

Для изучения хромосом перед фиксацией молодые листочки помещают в насыщенный раствор эскулииа на 15-24 ч при 10-12°С, а затем фиксируют в уксусном алкоголе от 3 до 24 ч.

Для окраски и мацерации объекты помещают в смесь 2%-го раствора ацетоорсеииа с 1 н. НС1 (9:1), подогревают на спир­товке 3-4 с и оставляют в смеси на 30 мин при 30°С. После это­го объекты .переносят в 1%-й раствор ацетоорсеина на предмет­ное стекло и раздавливают под покровным стеклом.