Последовательность работы на санном мик­ротоме.

1. Микротом очищают от пыли и парафиновых стружек, а движущиеся части смазывают вазелиновым маслом. В камеру с микротомом, изготовленную из фанеры или плексигласа (размеры ее зависят от размеров микротома), ставят лампу для подогревания ножа и блока в холодное время.

2. Подготовленный острый нож плосковогнутого типа устанавливают под определенным углом так, чтобы фасетка лезвия была параллельна граням парафинового блока и перпендикулярна направлению движения. Во время работы нож вытирают тряпочкой, смоченной в ксилоле.

3. Закрепляют деревянный держатель с парафиновым блоком в объектодержателе так, чтобы получить поперечные или продольные срезы. Нож и верхнюю поверхность парафинового блока осторожно сближают.

4. Устанавливают микрометрическим винтом необходимую толщину срезов в микрометрах. Она зависит от объекта и цели исследования. Так, для наблюдения митохондрий толщина срезов - до 5 мкм, для подсчета числа хромосом в корнях – 10-15, а при эмбриологических исследованиях – 15-25 мкм.

5. Приступают к резке парафинового блока. Для этого при заднем положении ножа подают объектодержатель на толщину среза, например на 12 мкм. В результате парафиновый блок поднимается вверх к фасетке ножа на это же расстояние. Затем перемещают салазки с ножом к себе и срезают слой парафинового блока толщиной 12 мкм. Отодвинув назад салазки с ножом, снова подают объект при помощи микрометрического винта и передвигают салазки с ножом к себе. Так делают второй срез и т. д. В результате получается непрерывная лента срезов. Если нож во время работы стучит, следовательно, его наклон недостаточен.

6. Срезы в виде ленты снимают с ножа мягкой кисточкой и укладывают в определенной последовательности на черную поверхность дна длинной, но неглубокой коробки, в которую помещают этикетку. Верхняя и нижняя поверхности ленты неодинаковы по внешнему виду: первая матовая, вторая блестящая. Ленту укладывают в коробку, не переворачивая ее, т. е. блестящей стороной вниз. После этого приступают к наклеиванию срезов па предметные стекла. Микротом после работы необходимо очистить от стружек и поместить в футляр.

Неудачи при изготовлении срезов.

1. Срезы мнутся и прилипают к ножу. Это может быть вызвано высокой температурой в камере с микротомом или тем, что взятый для заливки парафин оказался слишком мягким. Указанные причины можно устранить изменением температуры в камере и перезаливкой материала в более твердый парафин.

2. Срезы крошатся. Это происходит из-за низкой температуры в камере или оттого, что парафин слишком твердый и медленно охлаждается во время заливки блока. Обе причины также устранимы.

3. Срезы полосатые, раскалываются вдоль. Объясняются по­добные дефекты тем, что нож имеет зазубрины. В таком слу­чае его передвигают.

4. Срезы сдергиваются с ножа при его обратном ходе. Это значит, что нож грязный с нижней стороны и его необходимо вычистить.

5. Лента искривляется. Часто такое явление наблюдается потому, что передний и задний края блока не параллельны лезвию ножа. Для его устранения осторожно обрезают парафиновый блок, придав ему правильную форму. Микротом делает «пропуски» или срезы получаются неодинаковой толщины. Следовательно, нож стоит слишком полого и необходимо изменить его наклон.

6. Срезы получаются волнистые (гофрированные). Чаще всего это объясняется плохой заливкой блока, и необходимо залить блок снова.

7. Объект выпадает из блока во время резки на микротоме. Это явление может быть вызвано плохим пропитыванием материала, что не всегда удается устранить. Другая причина его может заключаться в том, что материал пропитывался в термостате более мягким парафином, чем тот, которым закапывался блок. Необходимо также проверить, не затупился ли нож.