Приготовление парафиновых блоков

Для работы на микротоме из «парафиновых пряников» готовят парафиновые блоки, которые укрепляют на деревянных держа­телях. Держатели устанавливают в объектодержателе микро­тома. Блок режут на определенную толщину.

В лабораторной практике деревянные держатели иначе назы­вают кубиками. Их готовят из древесины дуба, бука, березы размером 1,5х2х2,5 см и перед употреблением пропитывают расплавленным парафином. На боковую сторону держателя приклеивают этикетку.

Готовят блоки двумя способами. В первом случае из «пря­ника» бритвой вырезают кусочки парафина с объектом и рас­плавленным парафином прикрепляют их к деревянному держа­телю. В таких блоках материал должен быть ориентирован определенным образом и окружен со всех сторон слоем пара­фина толщиной 1-2 мм. Обычно так готовят блоки, содержащие крупные эмбриологические объекты. Лезвием острой бритвы придают блоку форму параллелепипеда, грани которого парал­лельны граням держателя.

Во втором случае используют метод закапывания по С. Г. Навашину. Он более кропотлив, чем первый, но дает надежные ре­зультаты при заливке корней и мелких бутонов. Необходимо заранее приготовить для работы спиртовку, глазной зонд или серебряную проволочку, парафиновые палочки, этикетки, лезвие безопасной бритвы, скальпель, деревянные держатели и «пара­финовый пряник» с материалом.

Парафиновые палочки делают из парафина с такой же тем­пературой плавления, какую имел парафин, использованный для пропитывания материала в термостате. В парафин добав­ляют 5% воска. Расплавленный и отфильтрованный парафин заливают в коробочки из пергамента длиной 15 см, шириной 30 мм и толщиной 5-8 мм. Коробочки быстро охлаждают в во­де, снимают бумагу, а палочки хранят в пустых эксикаторах или картонных коробках.

Правильно залитый блок должен быть однородным. Это уда­ется, когда новые капли парафина наносят на иезастывшую поверхность блока. Закапывание продолжают до тех пор, пока объекты не окажутся внутри прозрачной капли, из которой при остывании не должны выступать кончики корней.

Блок вместе с держателем опускают в холодную воду. После остывания лезвием безопасной бритвы ему придают форму пра­вильного параллелепипеда или усеченной пирамиды. Обрезку парафинового блока начинают с верхней поверхности. Осторож­но снимают лишний парафин, оставляя над объектом слой 2 мм. Затем обрезают блок с боковых сторон, добиваясь, чтобы грани его были параллельны граням деревянного держателя.

Таким образом, объекты заключены в парафиновый блок определенной формы, который можно резать на микротоме.

Получение микротомных срезов

Лабораторный прибор, предназначенный для получения тонких срезов у различных объектов, называют, микротомом. Тонкие срезы с объектов, залитых в парафиновые блоки, готовят на мик­ротомах двух типов: салазочном, или санном, и ротационном (рис. 30, А, Б).

Наиболее распространен салазочный микротом, у которого нож свободно перемещается на салазках, а деревянный держа­тель с парафиновым блоком прочно укреплен в объектодержателе, который может подниматься на определенную высоту при помощи микрометрического винта или перемещаться но наклон­ной плоскости вверх.

Рис. 30. Микротомы: А - ротационный; Б - салазочный (А, В - по Прозиной, 1960); В - замораживающий; 1 - станина; 2 - ножедержатель; 3 - нож; 4 - замораживающий столик; 5 - игольчатый клапан; 6 - микрометрический винт.

В ротационном микротоме нож укреплен неподвижно острием вверх, а объект движется по вер­тикали при помощи специально­го подающего механизма, снаб­женного колесом или рукояткой. Кроме рассмотренных двух, существует еще микротом замо­раживающего типа (рис. 30, В), на котором режут объекты в за­мороженном состоянии. На сто­лик такого микротома в каплю воды помещают объект и подают к нему угольную кислоту под давлением. Столик охлаждается, объект становится неподвиж­ным в капле, после чего его можно резать. В некоторых случаях охлаждают .не только столик, но и нож. Метод замораживания применяют при диагностических, гистохимических, анатомиче­ских и других исследованиях. Здесь трудно получить тонкие сре­зы, а также непрерывную серию срезов, но зато он прост и тре­бует немного времени.

Рис. 31. Схематическое изображение правильного (А) и неправильного (Б, В) наклонов ножа. По Ромейсу.

Важнейшая составная часть микротомов - ножи (бритвы). Микротомные ножи делят на две группы: с плосковогнутой и плоской с двух сторон формой. Первые используют для резки объектов, залитых в парафин, а вторые - для резки замороженных и труднорежущихся объектов. Микротомный нож требует тщательного ухода и бережного отношения. Небольшой удар или прикосновение лезвием к плотному предмету портит его. После работы нож вытирают насухо и хранят в футляре. Его необхо­димо своевременно точить и править. От этих операций зависит качество срезов. При точке влажный нож ведут по камню (из песчаника или карборунда) против лезвия в том и другом на­правлениях, оборачивая его вокруг обушка на конечных пунк­тах движения. Перед резкой на микротоме нож правят на ремне для шлифовки фасеток и придания грани большей работоспо­собности. Нож ведут обушком вперед поперек ремня по всей его длине, используя в работе нижнюю сторону ремня. При правке нож смачивают водой.

Качество срезов на салазочном микротоме зависит от уста­новки наклона ножа, определяемого углом, который образует нижняя поверхность ножа с плоскостью среза объекта. Этот угол должен составлять 2-5°. Допустимо положение, при котором сетка параллельна плоскости резания (рис.31).