18.Современные методы клинического исследования крови. Сравнительная характеристика и клиническое значение микроскопии мазка и исследования крови в гематологическом анализаторе.

При заболеваниях кроветворной системы используют следующие специальные методы исследования: общий клинический анализ крови, исследование пунктатов костного мозга, лимфатического узла, селезенки. Используют гистологические, цитохимические, цитогенетические, рентгенологические, ультразвуковые, радиоизотопные методы исследования.

При общем анализе крови определяют содержание гемоглобина, число эритроцитов, другие показатели, часто лейкоцитов, тромбоцитов, подсчитывают лейкоцитарную формулу, определяют СОЭ. Этот анализ может быть дополнен определением числа ретикулоцитов.

Важно определять соотношение между объемом эритроцитов и объемом плазмы - этот показатель получил название гематокритного числа, или гематокрита. Созданы специальные центрифуги, в которые помещают гематокритную трубку. В результате исследования определяют, какую часть крови составляют эритроциты. Электронно-автоматическим методом с помощью аппаратов «Культер» и «Целлоскоп» гематокрит измеряется одновременно с подсчетом среднего объема эритроцита и общего объема эритроцитов, после чего, зная объем крови, определяется гематокрит. При сгущении крови (при рвоте, поносе, других ситуациях с большой потерей жидкости) объем эритроцитов увеличивается за счет уменьшения объема плазмы.

Цитохимическое исследование лейкоцитов используется для идентификации, в частности, опухолевых поражений крови. Особое значение имеют различия гранул в некоторых типах грануло-цитов на разных этапах их дифференцировки, что особенно эффективно выявляется с помощью моноклональных антител к белкам мембран, которые позволяют легче различить субпопуляции лимфоцитов. Исследуют кровь больных на содержание в лейкоцитах пероксидазы, щелочной фосфатазы, эстераз и ряда других ферментов.

Цитогенетическое исследование проводится для выявления аномалии количества и морфологии хрососом клеток. Так, хорошо известно появление филадельфийской хромосомы при хроническом мйелолейкозе.

Преимуществами автоматического анализа крови являются: • Высокая производительность • Небольшой объем крови • Оценка более 20 показателей, вместо 10-12 при обычном анализе крови • Высокая точность исследования, так как подсчету подвергаются более 10 тысяч клеток из одной пробы.

Недостатки современных гематологических анализаторов: • Невозможна точная дифференцировка и подсчет незрелых форм гранулоцитов (промиелоциты, миелоциты, метамиелоциты, палочкоядерные) • Невозможность подсчёта бластных клеток • При оценке лейкоцитарного ростка анализаторы не позволяют выявлять изменения ядер и цитоплазмы клеток, появления атипичных клеток (например, атипичные мононуклеары), патологическая зернистость, патологические включения и т.п. • Анализаторы не оценивают морфологию эритроцитарного ростка (изменение формы, патологические формы, патологические включения и т.п.) • Современный анализатор не может полностью заменить микроскоп и исследование мазка крови, т.к. гематологический контроль гематологических, инфекционно-воспалительных заболеваний должен включать в себя и микроскопию мазков крови.

Пока не появились автоматические анализаторы, каждый раз, когда выполнялся общий анализ крови, проводилось микроскопическое исследование мазка крови, так как определить процентное соотношение различных форм лейкоцитов (лейкоцитарную формулу) по-другому было нельзя. В современных анализаторах подсчет лейкоцитарной формулы осуществляется автоматически. Однако при подозрении на наличие патологических форменных элементов крови микроскопия мазка крови опытным врачом по-прежнему является лучшим способом выявления и оценки атипичных и незрелых клеток. Исследование мазка крови проводят, чтобы определить нарушения формы и размера, а также изменения количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, различные типы лейкоцитов (включая незрелые формы) и их процентное соотношение. Для диагнстики различных заболеваний, которые связаны с нарушениями образования, функции или с избыточным разрушением форменных элементов крови. Чтобы отслеживать образование клеток крови и степень их зрелости при лейкозах, после химио- или лучевой терапии, а также при нарушениях образования гемоглобина.

19.Микроскопическая оценка патологических изменений в эритроцитах, клиническое значение. Методы окраски мазка для исследования ретикулоцитов. Цитологические характеристики ретикулоцитов, клиническое значение их исследования.

О морфологии эритроцитов судят при исследовании окрашенных мазков крови с помощью иммерсионной системы микроскопа.

Изменения размера

Микроцитоз — преобладание в мазках крови эритроцитов с диаметром 5,0—6,5 мкм — наблюдается при наследственном сфероцитозе, железодефицитной анемии, талассемии. Все эти клетки имеют уменьшенный объем и меньшее количествогемоглобина. В основе изменений размеров эритроцитов лежит нарушение синтеза гемоглобина.

Макроцитоз — присутствие в мазках крови эритроцитов диаметром >9,0 мкм — выявляют при макроцитарных анемиях, заболеваниях печени, дефиците витамина B12 и фолиевой кислоты, анемии беременных, злокачественных образованиях, гипотиреозе, лей козах.

Мегалоцитоз — появление в мазках крови эритроцитов диаметром 11,0—12,0 мкм, гиперхромных, без просветления в центре, овальной формы. Наличие мегалоцитов в мазках крови характерно для анемий, обусловленных дефицитом витамина В12 и фолиевой кислоты, а также для анемии при глистных инвазиях.

Анизоцитоз — присутствие в мазках крови эритроцитов, различающихся по размеру: с преобладанием эритроцитов малого диаметра (микроанизоцитоз) и большого диаметра (макроанизоцитоз). Анизоцитоз — ранний признак анемии, изолированно, без других морфологических изменений в эритроцитах развивается при легких формах анемии.

Изменения формы

Пойкилоцитоз — изменения формы эритроцитов различной степени выраженности, которые отличаются от дисковидной. Пойкилоцитоз — важнейший признак патологического изменения эритроцитов. В отличие от анизоцитоза он развивается при сильно выраженных анемиях и является более неблагоприятным признаком.

Лишь немногие типы форм эритроцитов оказываются специфичными для конкретных патологий. К ним относятся микросфероциты — специфические клетки для наследственно го микросфероцитоза — болезни Минковского—Шоффара; серповидные клетки — характерные для серповидно-клеточной анемии. Другие изменения формы эритроцитов — мишеневидные клетки, акантоциты, стоматоциты, эллиптоциты, дакриоциты и др., могут появляться при различных патологических состояниях.

Изменения окраски

Среди изменений окраски эритроцитов наиболее часто встречается бледная окраска эритроцитов с более широкой неокрашенной центральной частью — гипохромия эритроцитов, которая обусловлена низким насыщением эритроцита гемоглобином.Гипохромия эритроцитов — характерный признак железодефицитных анемий, при этом гипохромия, как правило, сочетается с микроцитозом. Гипохромия возможна при отравлениях свинцом, талассемии и других наследственных повреждениях эритроцитов.

Усиленная окраска эритроцитов — гиперхромия — связана с повышенным насыщением эритроцитов гемоглобином. Она встречается значительно реже, сочетается с макро- и мегалоцитозом. Эти изменения характерны для больных с дефицитом витамина В12 и фолиевой кислоты, могут наблюдаться при анемии Аддисона—Бирмера, дифиллоботриозе, злокачественных опухолях желудка, кишечника, алкоголизме.

Изменение окраски эритроцитов в виде полихроматофилии (эритроциты сероватого цвета) обусловлено окраской кислыми и основными красителями. В норме встречаются единичные полихроматофильные эритроциты. Их количество повышается при усиленном эритропоэзе (постгеморрагические анемии, гемолитические анемии после криза).

Включения в эритроцитах

Включения являются элементами патологической регенерации.

Кольца Кебота — остатки ядерной оболочки мегалобласта, имеют вид колечка, восьмерки, окрашиваются в красный цвет. Кольца Кебота обнаруживают при дизэритропоэзе, в частности при мегалобластных анемиях (В12 и фолиеводефицитные), талассемии, остром эритромиелозе.

Тельца Жолли — мелкие фиолетово-красные включения, встречаются по 2—3 в одном эритроците, являются остатками ядра мегалобласта. В норме тельца Жолли выявляют только в крови новорожденных. Их постоянно находят в мазках крови после спленэктомии. Тельца Жолли можно обнаружить при отравлениях гемолитическими ядами, анемиях различного генеза.

Базофильная зернистость — агрегированная базофильная субстанция в виде синих гранул, лучше выявляется при окраске метиленовым синим. Появление базофильной зернистости в эритроцитах характерно для свинцового отравления (образована агрегатами рибосом и железосодержащих митохондрий), но может встречаться при сидеро- и мегалобластной анемиях, талассемии.

Тельца Гейнца—Эрлиха — единичные или множественные включения, образованные из денатурированного гемоглобина, выявляют при окраске метиловым фиолетовым. Тельца Гейнца—Эрлиха — первый признак наступающего гемолиза, их находят при отравлениях гемолитическими ядами, анемиях, вызванных дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, глутатионредуктазы.

Ядросодержащие клетки эритроцитарного ряда

При различных патологических состояниях в периферической крови можно выявить базофильные, полихроматофильные и оксифильные нормобласты (нормоциты). Большое количество нормобластов характерно для гемолитических анемий. Они могут появляться в мазках крови при постгеморрагических анемиях, анемии Аддисона—Бирмера (в стадии ремиссии), острых лейкозах (иногда), метастазах новообразований в костный мозг, лейкемоидных реакциях при злокачественных новообразованиях, после спленэктомии, при тяжелой сердечной недостаточности.

Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие в цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции, представляющей агрегированные рибосомы и митохондрии. Эта субстанция выявляется при специальном методе окраски — суправитальном, т. е. без предварительной фиксации клеток. Зернисто-нитчатая субстанция в различных ретикулоцитах отличается полиморфизмом: чем клетка моложе, тем субстанция более обильная. У самых молодых ретикулоцитов она имеет форму густого клубка, у более зрелых клеток выявляется в виде сеточки, отдельных нитей и затем отдельных зерен. В мазках, окрашенных обычными гематологическими методами, ретикулоциты серовато-розового цвета — полихроматофильны, т. е. окрашены разными красителями.

Принцип.Суправитальная окраска красителями, выявляющими зернисто-нитчатую субстанцию ретикулоцитов.Реактивы. Можно использовать один из следующих красителей.1.Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте.2.Раствор азура I. 3.Раствор азура II .

Лучшая окраска ретикулоцитов достигается способом Гель Мейера: в пробирке Видаля смешивают несколько капель крови с равным объемом 1%-ного раствора бриллиантового крезилового синего в изотоническом растворе хлорида натрия. Закрывают пробкой и оставляют в пробирке на 1 ч, затем из смеси делают мазок на предметном стекле.

При любом способе окраски подсчет ретикулоцитов производится на 1000 эритроцитов (в норме содержание ретикулоцитов в крови в среднем составляет 0,7%, пределы нормальных параметров — от 0,2 до 1,2%). Уровень ретикулоцитов пропорционален активности эритропоэза. Ретикулоцитоз (6—10%) сопровождают острое кровотечение (возникает на 3—4-й день после геморрагии), гемолитические анемии.