2.Неполные (блокирующие) антитела и их определение в реакции торможения связывания комплемента, сущность, техника, особенности учета.

Различают три вида антител: полные, неполные агглютинирующие и неполные блокирующие.

Полные антитела агглютинируют эритроциты в физиологическом растворе (отсюда их другое название - солевые).

Неполные антитела не агглютинируют эритроциты в физиологическом растворе, но фиксируются на эритроцитах при наличии на них соответствующего антигена. Среди неполных антител различают: а) неполные антитела, агглютинирующие эритроциты в коллоидных средах (альбумин, желатин); б) неполные блокирующие антитела, которые не агглютинируют эритроциты даже в коллоидной среде, а выявляются только в антиглобулиновом тесте после специальной обработки эритроцитов.

Неполные агглютинирующие и блокирующие антитела (класс G, А) агглютинируют эритроциты в коллоидной среде, в сыворотке, в альбумине. Они появляются позднее, легко проникают через плаценту, поэтому имеют решающее значение в развитии гемолитической болезни.

В практической работе в большинстве случаев приходится сталкиваться с наличием в сыворотке неполных агглютинирующих антител. Количество антител выявляют путем определения их титра. Титр антител соответствует наибольшему разведению сыворотки, при котором она еще способна агглютинировать резус-положительные эритроциты (титр антител может быть равен 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 и т. д.).

При очень большом титре (концентрации) неполных антител их не удается обнаружить в неразведенной сыворотке. Они проявляют свои агглютинирующие свойства только после разведения в 5-100 раз. Такие антитела называют «скрытые». Наличие «скрытых» антител свидетельствует о большой степени иммунизации.

Для постановки РСК используют комплемент, содержащийся в крови морских свинок. Гемолитическая активность комплемента на комплексе антиген-антитело его действие проявляется реакцией лизиса антигена, если антиген корпускулярный или не сопровождается никакими видимыми изменениями, если это мелкодисперсные или растворимые антигены. Для учёта результатов РСК вводят вспомогательную ( индикаторную) гемолитическую систему. Она состоит из взвеси эритроцитов баранов в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолотической сыворотки кролика, полученной путём его иммунизации упомянутыми эритроцитами.

Приготовление и титрование ингредиентов.

Титрование комплемента. Проводят с помощью реакции имунного гемолиза. Для этого свежую сыворотку морской свинки разводят изотоническим раствором хлорида натрия от 1:10 до 1:40. К 0,2мл каждого разведения комплемента добавляют по 0,4 мл гемолитической смеси (смеси равных объёмов 3% суспензии эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки в разведении, соответствующем е тройному титру). Пробирки выдерживают при 37С и через 30 минут определяют титр комплемента – наибольшее разведение комплемента, которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки. Рабочую дозу комплемента рассчитывают, исходя из его титра. Рабочая доза комплемента должна быть выше титра на 25%.

Антигены изготавливаются из взвесей убитых микроорганизмов, из лизатов, полных антигенов, гаптенов, экстратов тканевых липидов.

Взвесь эритроцитов барана получают из дефибринированной крови барана, отмывая эритроциты изотоническим раствором хлорида натрия до получения полной бесцветности и прозрачности надосадочной жидкости и готовят из нах 3% взвесь в изотоническом растворе хлорида натрия.

Гемолитическая сыворотка готовится путм 3-4 кратной внутривенной иммунизации кролика 50% взвесью бараньих эритроцитов и инактивируется при 56С (разрушен комплемент). На этикетке ампул с сывороткой обозначен её титр – максимальной разведение данной сыворотки, которое обеспечивает полный лизис 3% взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента при 37С в течении часа. Для РСК сыворотка в тройном титре.

Постановка основного опыта РСК. Испытываемую и контрольные сыворотки предварительно инактивируют нагреванием при 56С в течение 30 мин. Первая фаза инкубации смеси антигена испытываемой сыворотки и комплемента при 37С в течении 30 мин. При постановке РСК на холоде эту фазу проводят при 0-4С в течение 18-20ч, что повышает чувствительность реакции. После добавления в каждую пробирку по 0,4 мл гемолитической системы пробирки встряхивают и выдерживают 20-30 мин при 37С. Результаты опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках. Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дне, отрицательной- при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена(«лаковая кровь»). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дно (++++,+++,++,+).

В качестве контроля (2-я,3-я) учитывают реакцию с заведомо положительной и заведомо отрицательной сыворотками;4-я,5-я пробирки – проверка антикомплементарных свойств сыворотки и антигена; в6-й,7-й пробирках контролируются рабочая доза комплемента и качество гемолитической системы.

3.В хирургическое отделение поступил больной с травмой правой голени. Мягкие ткани голени размозжены, загрязнены землей. Составить план лабораторного бактериологического обследования больного, план профилактических мероприятий.

Как известно в почве имеется огромное количество МКО, такие как патогенные, условно –патогенные и непатогенные для организма человека. Любая бактериальная инфекция представляет опасность для жизни человека. Потенциальными опасными для здоровья человека МКО могут быть возбудители аэробных и анаэробных инфекций, с последующими тяжелыми исходами и даже смертью постадавшего. Таким образом необходимо проведение исследований на идентификацию микроорганизмов, попавших на место повреждения с целью прогнозирования и назначения адекватного лечения.

Т.к. имеется как аэробные МКО ( стафилококки, стрептококки, и др), так и особо опасные анаэробные представители ( в основном различные виды клостридий : Cl. perfringens, Сl. novyi, Сl. septicum). Т.о. микробиологическое исследование следует проводить по плану выделения отдельно аэробов, и отдельно анаэробов с последующей идетнификацией возбудителей, определения их чувствительности к антибиотикам и др. факторов.

Также особо опасным осложнением является попадание при инфицировании спорами возбудителя Clostridium tetani с развитием столбняка,которая также является анаэробной инфекцией.

Прогноз анаэробной инфекции всегда серьезный, летальность зависит от формы инфекции и, как правило, превышает 20%.

Профилактика анаэробной инфекции заключается в своевременной и квалифицированной первичной обработке раны. С профилактической целью при загрязненных ранах нижних конечностей вводят 30 000 АЕ противогангренозной сыворотки.

Лечение анаэробной инфекции состоит в глубоких (до кости) разрезах по всей длине пораженных участков ("лампасные разрезы"), удалении гематом, инородных тел, некротизированных мышц, вскрытии полостей. Рану оставляют открытой, не тампонируют и ограничиваются только тщательным гемостазом. В гангренозной стадии раненого может спасти только ампутация конечности, произведенная в пределах здоровых тканей. Края раны обильно инфильтруют антибиотиками. Внутривенно вводят 150 000-200 000 АЕ поливалентной противогангренозной сыворотки. Сыворотка эффективна только при раннем применении. Переливают свежецитратную кровь, вводят достаточное количество жидкостей и белковых препаратов.

Профилактика столбняка проводится в плановом порядке вакциной АКДС, АДСм, АСм, первое прививание в 3х месячном возрасте ребенка, затем в соответствии с планом ревакцинации. Экстренная профилактика : ранее привитым вводят столбнячный анатоксин(0.5 мл),непривитым – 1 мл анатоксина + донорский иммуноглоблин. Все вводится дробно, по методу Безредко. лечение столбняка направлено на введение лошадиной противостолбнячной сыворотки, либо донорского противостолбнячного иммуноглобулина. Другие микроорганизмы в ране уничтожаются в соответствии с их особенностями.

ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ № 47