Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Экзамен / Экзаменационный Билеты Лечебного факультета.docx
Скачиваний:
1104
Добавлен:
19.06.2017
Размер:
2.81 Mб
Скачать

2.Тинкториальные свойства микроорганизмов, сущность, дифференциально-диагностическое значение, определение методами Грама и Циль-Нильсена.

Тинкториальные св-ва - св-ва бактерий, грибов и простейших, характеризующие их способность вступать в реакцию с красителями и окрашиваться определенным образом. Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые заключаются в окраске препарата одним красителем (Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.). При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые).

Сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков (серебрение по Морозову), клеточной стенки (по Грамму), нуклеоида(по Фельгену, Романовскому-Гимзе), капсулы (по мет. Бурри-Гинса), споры (По Ожешко, по Шефферу) и разных цитоплазматических включений, например, зерна волютина (по Нейссеру).

Окраска по методу Грамма. На фиксированный мазок нанести карбол.-спиртовой р-р генцианового фиолетового через фильтрационную бумагу. Через 1-2 мин.ее снять, краситель слить. Нанести р-р люголя на 1-2 мин. Обесцветить этиловым спиртом в теч. 30-60с. до прекращения отхожд. фиолетовых струек красителя. Промыть водой. Докрасить водным раствором фуксина в теч. 1-2 мин., промыть водой, высушить. Грам+ в темно-фиолет., Грам- в красный. Окраска по Грамму имеет важное диагностич. значение. К Грам+ бакт. относятся стафилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии, микобактерии туберкулеза. К Грам- гонококки, менингококки, кишечная палочка. Некоторые виды бакт. могут окраш. по Граму вариабельно в зависимости от возраста, особенностей культивирования и других факторов. Основная ошибка состоит в переобесцыечивании мазка этиловым спиртом, Грам+ при этом утрачивают первоначальную окраску генциановым фиолетовым и приобретают красный цвет в рез. последующей окраске фуксином. А Грам- могут сохранять сине-фиолетовый цвет. Окраска на кислотоустойчивость по Циллю-Нильсену. На фиксир. мазок нанести карболовый р-р фуксина через фильтрационную бумагу и подогреть до появления паров в течении 3-5 мин. Снять бумагу, промыть водой. Нанести 5% р-р серной к-ты или 3% р-р смеси спирта с хлороводородной к-той на 1-2 мин. для обесцвечивания. Промыть водой. Докрасить мазок водным р-ром метиленового синего в теч. 3-5 мин. Промыть водой, высушить. Кислотоустойчивость обусловлена наличием в клет. стенке и цитоплазме бакт. повышенного кол-ва липидов, воска и оксикислот. Р-р карболовой к-ты разрыхляет клет. стенку и повышает ее тинкториальные св-ва, а высокая концентрация красителя и нагревание в проц. окраски усиливают реакцию взаимод. красителя с бакт. кл-ми. При обработке препарата серной к-той некислотоустойчивые обесцвечиваются и окраш. метиленовым синим в голубой цв, а кислотоустойчивые остаются окашеными фуксином в красный цвет.