58. Отличие гранулоцитов от агранулоцитов.

Агранулоциты - это одноядерные лейкоциты, один из двух типов лейкоцитов. Агранулоциты содержатядроовальной формы и незернистуюцитоплазму. Существуют два основных типа агранулоцитов:моноцитыилимфоциты. У лимфоцитов может наблюдаться токсогенная зернистость. Моноциты и Мкф также имеют пиливидную зернистость.

Гранулоциты- это одноядерные лейкоциты, (в отличии от агранулоцитов). В отличие от агранулоцитов, гранулоциты - это зернистые (полиморфноядерные)лейкоциты. Они содержат разделенное на различное количество связанных сегментовядрои зернистуюцитоплазму. Гранулоциты обладают способностью к амебоидномудвижению. Гранулоциты подразделяют нанейтрофилы,эозинофилыибазофилы.

• Агр. По пути из ККМ в ткани циркулируют дольше, чем агранулоциты.

• Гранулоциты не способны рециркулировать обратно в кровь, а агранулоциты способны, причем по несколько раз. Для эозинофилов вопрос о рециркуляции открыт! (Возможно гиперэозинофилия результат рециркуляции.)

• №	ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ПРИЗНАКИ	ГРАНУЛОЦЫТЫ	AГРАНУЛОЦИТЫ>
  1	Происхождение названия	Греч. granulum — зернышко + kytos — клетка	Греч. а— не, без + granulum — зернышко + kytos — клетка
  2	Белковые гранулы в цитоплазме	Есть	Отсутствуют
  3	Ядро	Сегментированное	Несегментированное
  4	Место образования	Красный костный мозг	Красный костный мозг, лимфатические узлы, селезенка, вилочковая железа
  5	Относительное количество	Около 50-70% всех лейкоцитов	Около 30-40% всех лейкоцитов
  6	Представители	Нейтрофилы, эозинофилы, базофилы	Моноциты, лимфоциты

  Только агранулоциты способны к пролиферации и дифференциации в месте своего функционирования. Гранулоциты не превращаются и не делятся

• Отличие в CD- маркерах на поверхности клетки.

• Гранулоцитопоэз происходит в ККМ (все стадии), агранулоцитопоэз- завершается в крови и тканях.

• Ядерноцитоплазмотический индекс (ЯЦИ) у гранулоцитов меньше 1, цитоплазма занимает больше площадь, чем ядро. Агранулоциты – ЯЦИ намного больше 1.

59. Разновидности лимфоцитов,генез,структура,св-ва

Лимфоциты- небольшие мононуклеарные клетки,координирующие иммунный ответ за счет продуцирования воспалительных цитокинов и антигенспецифических связывающих рецепторов. Лимфоциты подразделяются на две основные категории: В-клетки и Т-клетки-несколько менее многочисленных классов,например естественные(натуральные) клетки-киллеры. Подгруппы лимфоцитов отличаются по месту их образования и эффекторным молекулам, которые они экспрессируют, но имеют общее свойство- способность опосредновать высокоспецифический антигенный ответ.

В процессе развития плода важнейшими лимфопоэтическими являются желточный мешок, печень, селезенка. В постнатальный период основные лимфоидные органы-КМ и тимус. Вторичные лимфоидные ткани включают лимфатические узлы, селезенку и лимф. Образов ЖКТ и дых. путей.

В-лимфоциты осуществляют экспрессию уникальных антигенных рецепторов-ИГ. В-клетки образуются из стволовых клеток КМ. Созревание В-клеток происходит в костном мозге. ИмСис-ма содержит большую популяцию клонов В-лимфоцитов. Каждый клон экспрессирует уникальный антигенный рецептор,идентичный в основном ИГ молекуле ,которую он будет синтезировать. Эти молекулы отличаются друг от друга и связываются только с ограниченным числом АГ. В-лимфоциты образуются в КМ иммунологически незрелыми поскольку они еще не подверглись воздействию АГ. Пре-В-клетка продуцирует терминальную дезоксинуклеотидтрансферазу (ТДТ) и общий АГ острого лейкоза. Позднее она экспрессирует х-ные поверхностные АГ В-клетки CD19,20. Далее созревание В-клеток зависит от АГ. С помощью Т-хелперов и специализированных макрофагов,называемых антигенпрезентующими клетками, В-клетки,рецепторы которых распознают АГ,пролиферируют и созревают. В-лимфоциты с помощью своих иммуноглобулиновых рецепторов могут распознавать не только пептиды, но и более крупные молекулы белков, нуклеиновых кислот, углеводов, липидов, полисахаридные и липопротеидные растворимые антигены. Зрелые В-лимфоциты способны самостоятельно распознавать растворимые антигены, в отличие от Т-лимфоцитов они не нуждаются в презентации чужеродных антигенов. Для этого В-лимфоциты имеют на своей поверхности адгезионные и костимулирующие молекулы, рецепторы для иммуноглобулинов, компонентов системы комплемента и для цитокинов. Распознавание антигена В-клеточным рецептором служит одним из сигналов активации В-лимфоцитов, которая проявляется их пролиферацией и дифференцировкой в продуцирующие иммуноглобулины плазматические клетки. Дополнительные сигналы активации В-клетки получают при взаимодействии с Th2, которые продуцируют и секретируют соответствующие цитокины: интерлейкины 4, 5, 6, 10. Синтез и секреция антител (иммуноглобулинов) В-лимфоцитами является завершающей стадией специфического гуморального иммунного ответа на конкретный антиген. В динамике иммунного ответа происходит переключение синтеза антител, который начинается с IgM, на другие изотипы: IgG, IgA или IgE. Переключение индуцируется разными цитокинами и взаимодействием костимулирующих молекул (CD40—CD40L), присутствующих на поверхности В-лимфоцитов и Th2.

Т-лимфоциты

Т-лимфоциты играют ключевую роль в клеточном иммунитете. Сенсибилизированные Т-клетки опосредуют гиперчувствительность замедленного типа,отторжение аллотрансплантата,контактную аллергию, а также иммунитет против опухолей и внутриклеточных паразитов. Клеточноопосредованный иммунитет обеспечивает уничтожение различных клеток непосредственно цитотоксическими Т-клетками. Он усиливается под взаимодействием цитокинов, которые вырабатываются в результате сложного взаимодействия Т-клеток и макрофагов. Кроме того, Т-лимфоциты активно и избирательно участвуют в регуляции пролиферации В-клеток и продукции иммуноглобулинов.

Образовавшись из стволовых клеток КМ, Т-клетки обязательно проходят стадию развития в тимус, в результате чего генерируются зрелые, функционально полноценные Т-клетки. Незрелые протимоциты мигрируют из КМ и заселяют субкабсулярный кортикальный слой селезенки. В тимусе Т-лимфоциты созревают и приобретают х-ные антигенные функции. Они экспрессируют CD2,3,4,7,8 и Т-клеточный рецептор. Позже, когда они становятся клетками-хелперами или супрессорами, они переключаются соответственно на экспрессию либо CD4,либо 8. Важнейшая ф-я селезенки в развитии Т-кл состоит в ликвидации аутореактивных Т-кл, которые способны распознавать АГ других нормальных клеток организма. В результате отборо в тимусе происходит элиминация этих клеток посредством ряда сложных процессов,приводящих к апоптозу.

Натуральные киллеры-обладают св-вом цитотоксичности без предварительной антигенной сенсибилизации. Их способность убивать не ограничивается ГКГ-антигенами,она не требует перегруппировки рецепторов Т-кл или ИГ и существенно усиливается под влиянием интерферонов. Атакуют аномальные клетки,выделяя цитотоксические гранулы. НК способны убивать непосредственно или зат счет АТ-зависимой клеточно-опосредованной уитотоксичности. В результате этого АТ,связанное с клеткой-мишенью,привлекает НК-клетки посредством взаимодействия с их рецепторами для Fc-участка ИГ.

60.

Процесс сосудисто-тромбоцитарного гемостаза тесно связан с гемокоагуляцией, поскольку вторая осуществляется локально вокруг образованного тромбоцитарного гвоздя и является доминирующей в защите. Ее функция заключается в уплотнении тромбоцитарного гвоздя и делать кровь более густой и плотной, чтобы сохранить ее в поврежденном сосуде.

Тромбоцитарные факторы, которые служат связующими компонентами в реализации первичного гемостаза и гемокоагуляции, принято делить на эндогенные и экзогенные. Эндогенные факторы принято обозначать арабскими цифрами, в отличие от плазменных, которые адсорбируются на мембране тромбоцитов и обозначаются римскими цифрами. К эндогенным (или истинным) тромбоцитарным факторам относятся:

• Р₁ – тромбоцитарный акселератор протромбиназы (ускоряет образование тромбина из протромбина), идентичен FV плазмы крови;

• Р₂ – акселератор тромбина (ускоряет переход фибриногена в фибрин);

• Р₃ – тромбопластинчатый фактор (является фосфолипидом, необходим для образования протромбиназы;

• Р₄ – антигепариновый фактор;

• Р₅ – тромбоцитарный фибриноген;

• Р₆ – тромбостенин (обеспечивает движение тромбоцитов, участвует в сокращении и уплотнении кровяного сгустка (ретракции);

• Р₇ – антифибринолитический (связывает плазмин);

• Р₈ – активатор фибринолиза;

• Р₉ – фибринстабилизирующий фактор (аналог FXIII);

• Р₁₀ – серотонин;

• Р₁₁ – АДФ

На поверхности тромбоцитов могут адсорбироваться различные плазменные факторы (экзогенные) свертывания крови и фибринолиза – протромбин, тромбопластин, проакцелерин, конвертин, факторы VIII, IX, X, XI, XII, плазминоген и другие. Они образуют так называемую плазматическую атмосферу тромбоцитов, играющую роль в уплотнении и консолидации пластиночного тромба.

62.

Кислородзависимые факторы бактерицидности

В обеспечении киллинга фагоцитированных микроорганизмов наиболее важна роль производных кислорода. Главное событие в образовании кислородзависимых бактерицидных факторов — кислородный взрыв — быстрое (реализуемое за секунды) и высокопродуктивное осуществление цепи реакций, приводящих к образованию активных форм кислорода. Активные формы кислорода включают высокореактивные свободные радикалы, ионы кислорода и кислородсодержащих химических групп. Образование активных форм кислорода катализируется ферментом NADPH-оксидазой (NADPH — восстановленная форма

никотинамиддинуклеотидфосфата), называемой также оксидазой фагоцитов (Phоx).

Сборка NADPH-оксидазы

Кислородный взрыв реализуется в мембране фаголизосом. Сборка NADPH-оксидазы — исходное событие в запуске кислородного взрыва и генерации активных форм кислорода. NADPH-оксидаза активируется под влиянием сигналов, возникающих при связывании лигандов с Fc-рецепторами, рецепторами-≪мусорщиками≫, родопсиноподобными рецепторами. Сначала этот процесс происходит в участке клеточной мембраны, примыкающем к зоне действия хемотаксического агента или к зоне контакта с фагоцитируемым объектом. При формировании фагосомы сборка NADPH-оксидазы перемещается внутрь клетки.Неактивная NADPH-оксидаза локализуется в мембране секреторных везикул и специфических гранул. Она представляет собой флавоцитохром b558,состоящий из субъединиц α (p22phox) и β (gp91phox), а также белка Rap1а. При активации к NADPH-оксидазе подсоединяется 4 цитозольных белка: p47phox,p67phox, p40phox и ГТФаза Rac-2. При фагоцитозе гранулы и везикулы, содержащие NADPH-оксидазу, сливаются с фагосомой. Активация фермента происходит уже в составе мембраны фаголизосомы. В привлечении цитозольных компонентов важная роль принадлежит мембранным фосфоинозитидам, обеспечивающим связывание цитозольных компонентов Phox — фосфотидилинозитол-3,4-дифосфата (PI-3,4P2) и фосфотидилинозитол-3-монофосфата (PI-3P), а также фосфотидилинозитолкиназ, катализирующих их образование.Под влиянием активационных сигналов, генерируемых при связывании

родопсиноподобных рецепторов, происходят фосфорилирование p47phox и акти-

вация двух его доменов: PX и SH3. При участии PX-домена p47phox прикрепля-

ется к PI(3,4)P2 мембраны фаголизосомы, а с помощью SH3-домена — к С-кон-

цевой цитозольной части мембранного компонента цитохрома b558 — p22phox.

Переместившись в мембрану, p47phox способствует внедрению в нее белка p67phox,

происходящему за счет взаимодействия С-концевого домена p47phox и С-кон-

цевого SH3-домена p67phox. Адапторный белок p40phox связан с p67phox исходно, а

через PX-домен он присоединяется к PI-3P мембраны. Одновременно ГТФаза

Rac-2 освобождается от ингибитора, блокирующего ее при покоящемся состоя-

нии клетки (отделение от ингибитора обусловлено фосфорилированием Rac-2),

и внедряется в мембрану фагосомы, где взаимодействует с молекулой p67phox.

Таким образом, осуществляется полная сборка NADPH-оксидазы .

Образование активных форм кислорода.Конформационные изменения, происходящие при сборке NADPH-оксидазы, приводят к тому, что ее основной компонент gp91phox приобретает способность взаимодействовать с окисленной формой кофактора, образующегося при гликолизе, — NADPH. Это взаимодействие происходит при участии простетической группы FAD (флавин адениндинуклеотид)

и двух молекул гема. FAD получает электрон (е-) от NADPH и передает его ≪наружной≫ молекуле гема, обращенной к цитозолю, от которой он переходит к ≪внутренней≫ молекуле гема, обращенной к содержимому фагосомы. Внутренняя молекула гема передает электрон молекуле кислорода, что приводит к образованию супероксида , объединяющего в себе свойства аниона и радикала, и потому называемого супероксидрадикалом,или супероксиданионом (*О2Ї). Супероксидрадикал — короткоживущий родоначальник активных форм кислорода (рис. 2.29). В начальную фазу фагоцитоза супероксиданион, образующийся на участке клеточной мемб-

раны, находится во внутриклеточном пространстве; после формирования фагосомы и фаголизосомы он поступает внутрь этих гранул. На следующем этапе реализуется цепь реакций, приводящих к образованию радикалов, ионов кислорода и содержащих их молекул, обладающих более высокой бактерицидной активностью чем супероксианион, —активных форм кислорода. Под действием фермента супероксиддисмутазы из двух молекул супероксидного аниона образуется перекись водорода. В присутствии ионов Fe2+ супероксид взаимодействует с перекисью водорода

с образованием гидроксил-радикала (*ОН) (см. рис. 2.29) — сильного окислителя. Перекись водорода и особенно гидрокисл-радикал обладают очень сильной бактерицидной активностью. При их совместном действии происходит перекисное окисление липидов, разрыв пептидных связей, окисление сульфгидрильных групп и другие глубокие химические изменения макромолекул в клеточных стенках патогенов, приводящие к их гибели. При мутациях генов, кодирующих субъединицы NADPH-оксидазы, нарушается активность этого фермента и, как следствие, развивается хроническая гранулематозная болезнь.

63.

Базофилы представляют собой еще одну разновидность гранулоцитов крови (на их долю приходится всего 0,5 % от общего числа лейкоцитов). Их основная особенность — наличие базофильных гранул (см. табл. 13), в которых содержатся хондроитинсульфаты А и С, гистамин, гепарин, серотонин (у кроликов и мышей), а также ряд ферментов (трипсин, химотрипсин и другие протеиназы, дегидрогеназы, пероксидаза, РНКаза, гистидинкарбоксилаза) и кислые гликозаминогликаны. Второе важное свойство базофилов — наличие на их поверхности высокоаффинных и низкоаффинных рецепторов для IgE — FceRI и FceRII. Присутствие рецепторов первого типа обеспечивает возможность не только связывания IgE, но и реакции на это связывание, выражающейся в освобождении гранул, содержимое которых обусловливает развитие аллергических реакций. Базофилы подвижны, обладают способностью к фагоцитозу, но не могут делиться и восстанавливать гранулы.

Тучные клетки являются тканевыми аналогами базофилов и основными эффекторами аллергических реакций немедленного типа. Они локализуются в серозных оболочках, селезенке, в эпителии и подслизистом

Слое пищеварительного, дыхательного и урогенитального трактов, в коже, а также соединительной ткани, окружающей капилляры. На 1 г тканей указанных локализаций приходится 104— 106 тучных клеток. В отличие от базофилов они способны к делению и имеют довольно большой срок жизни (месяцы, годы). Тучные клетки крупнее базофилов (размер 10—20 мкм), имеют ворсинчатую поверхность, содержат больше гранул (10—150 на клетку) (рис. 17). Их состав аналогичен составу гранул базофилов, но они богаче трипсино - и химотрипсиноподобными протеиназа-ми. В тучных клетках, как и в базофилах, вырабатываются эйкозанои-ды — лейкотриены (особенно СД тромбоксаны, простагландины (в основном D2) (см. раздел 2.3.2).

Существуют различия в свойствах тучных клеток соединительной ткани (серозных) и слизистых оболочек, позволяющие квалифицировать эти два типа клеток как субпопуляции (табл. 14). Те и другие имеют костномозговое происхождение, но лишь вторые в своем развитии зависят от тимуса, т. е. отсутствуют у генетически бестимусных или тимэктомиро-ванных животных (роль тимуса в их развитии не вполне ясна). Эти клетки отличаются по зависимости их пролиферации от различных ростовых факторов: хотя основным ростовым цитокином для тех и других служит фактор стволовых клеток, существуют кофакторы роста: для серозных тучных клеток — ИЛ-3, для тучных клеток слизистых оболочек — ИЛ-3 в сочетании с ИЛ-4. В серозных тучных клетках преобладающим пепти

Догликаном является гепарин, а в тучных клетках слизистых оболочек — хондроитинсульфат. Аналоги этих типов тучных клеток обнаружены и у человека. Первые преобладают в коже; они содержатся также в перива-скулярном пространстве различных органов. В их гранулах наряду с триптазой имеются химотрипсиноподобная протеиназа (химаза), а также карбоксипептидаза А и катепсин С. Вторые преобладают в слизистых оболочках пищеварительного и дыхательного путей; в их гранулах отсутствует химаза. Спектр протеаз, свойственный двум типам тучных клеток человека, отражен в их обозначении — MCtc и MCt (МС — mast cell, t — триптаза, с — химаза). На поверхности тучных клеток присутствуют FceRI и FceRII, а также Fcy-рецепторы и рецепторы для комплемента (его фрагментов СЗ и С5). Дегрануляция базофилов и тучных клеток происходит главным образом при воздействии на них иммунных комплексов, содержащих IgE, но она может быть вызвана также действием ионофоров кальция, повышением внутриклеточного уровня цАМФ, связыванием рецепторов для компонентов комплемента. Механизмы активации и дегрануляции тучных клеток, а также их последствия будут рассмотрены детальнее при описании аллергических реакций (см. раздел 5.2.1). Дегрануляция не сопровождается гибелью клеток. В тучных клетках (но не в базофилах) возможен процесс восстановления гранул. По некоторым свойствам тучные клетки «сближаются» с антиген-представляющими клетками и лимфоцитами. Так, они экспрессируют молекулы МНС не только I, но и II класса, а также вспомогательные молекулы В7-2 (CD86). Подобно Т-лимфоцитам, они секретируют цитокины: ИЛ-4, 5, 10, 12, 13, а также ГМ-КСФ и ФНОа. Полагают, что тучные клетки участвуют в регуляции дифференцировки Т-хелперов, способствуя образованию Th2, с которыми у них есть наибольшее сходство (см. раздел 3.5.2).

-Основной компонент цитоплазмы - гранулы, содержащие активные субстанции. Гистамин - главный компонент гранул базофилов. В гранулах много мукополисахаридов, в том числе гепарин, гиалуроновая кислота и хондроитин сульфат, которые обнаруживаются на всех уровнях созревания базофилов. На поверхности базофила и мастоцита расположены рецепторы, из которых наиболее специфическими являются Fc-рецептор для IgE. Эти рецепторы позволяют удерживать большое количество молекул IgE (30-100 тыс). Базофил продуцирует IL-4, IL-13, экспрессирует лиганд CD40L и рецептор для CCR3 на свою мембрану. Имеется также рецептор для эотаксина. Основными маркерами зрелых базофилов периферической крови являются как общие маркеры клеток крови и гранулоцитарного ряда - CD13+CD17+CD26+CD33+CD38+CD40L+CD44+ CD55+CD59+CD71+HLA-DR-, так и специфические - сочетание 97А6+С0123+Рс-рецептор для IgE. Кроме того, базофилы имеют рецепторы для IL-1, IL-3, GM-CSF. Специфическим маркером тучных клеток, позволяющим дифференцировать их от других форменных элементов, являются сочетание 97А6 + c-kit+ (CD117) (в отличие от базофилов, которые являются 97A6+CD123+). У мастоцита обнаружена интересная особенность: до стимуляци на тучных клетках экспрессируются структуры только I класса комплекса гистосо в местимости (MHC-I), после стимуляции мастоцитов гамма-интерфероном появляются антигены гистосовместимости II класса (МНС II) .

Высоко аффинный lgE-рецептор (FceR1) имеет значение в следующих ситуациях.

1. Для быстрого выброса гистамина из гранул.

2. Для активации метаболизма липидов и продукции лейкотриена 4.

3. Для синтеза иммуномодуляторных цитокинов.

Базофилы подобно другим клеткам гранулоцитарного ростка созревают в костном мозге, циркулируют в крови, но выполняют свои функции в тканях, хотя в норме они -не присутствуют в соединительной ткани, как тучные клетки. Кинетика базофилов соответствует кинетике эозинофилов. После созревания они находятся в костном мозге 1,5 дня, в кровотоке - 2,5 дня. Весь цикл в костном мозге и крови завершается в течение 7дней.

Тучные клетки созревают и мигрируют в соединительную ткань, в адвентицию сосудов, в подэпителиальные слои желудочно-кишечного тракта, дыхательных путей и кожи. Фактор стволовых клеток, который индуцирует дифференцировку мастоцитов, участвует в созревании клетки и индуцирует агрегацию Fes RI.

Функции

Одной из основных функций базофилов является участие в аллергических реакциях различного типа. Сигналом к началу ответа базофилов (и мастоцитов) является такое количество антигена, которое при взаимодействии с определенным количеством молекул антител IgE, вызывет их связывание и погружение в цитоплазму. При этом происходит цепь процессов, приводящих к дегрануляции, выделению гистамина и развитию местной реакции. В организме базофилы и тучные клетки являются основными поставщиками гистамина – главного медиатора в реакциях гиперчувствительности немедленного типа, причем особенно много гистамина содержится в тучных клетках. Гистамин действует через Н1г и Н2- рецепторы. При действии через Н1 наблюдается зуд, расширение сосудов, возбудимость. При оздействии через Н2-рецепторы – сокращаются гладкомышечные волокна, увеличивается сосудистая проницаемость, увеличивается секреция слизи, активируются Т-супрессоры.

В периоде, предшествующем дегрануляции, под воздействием антигена происходит перераспределение lgE-молекул на мембране [6]. В обеспечении процесса дегрануляции принимают участие ионы Са+ + и Мд+ + . Дегрануляция происходит как многоступенчатый процесс, после которого на месте гранулы образуется пузырек или вакуоль. Тормозяшее влияние на дегрануляцию оказывают катехоламины.

Базофилы быстро оказываются в коже, легких, слизистой носа после воздействия аллергена. До этого происходит адгезия к эндотелию, процесс прохождения через стенку сосуда. В этом процессе ключевую роль играет эотаксин (CCL11) и рецептор к нему (CCR3) на базофилах, что приводит их к месту развития аллергического воспаления.

В отличие от базофилов, CD88 не экспрессируется тучными клетками, которые не отвечают на С5а-стимуляцию. Тучные клетки не имеют рецепторов для IL-3 и GM-CMF. Таким образом, базофилы более чувствительны к действию иммуномодулирующих цитокинов и провоспалительных факторов.