- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •Р е ц е н з е н т ы
- •К о л л е к т и в а в т о р о в
- •Оглавление
- •Введение
- •История открытия и разработка метода пцр
- •Механизм полимеразной цепной реакции
- •Праймеры
- •Полимераза
- •Пробоподготовка (выделение днк/рнк)
- •Амплификация
- •Факторы, влияющие на эффективность амплификации
- •Использование «горячего старта» при постановке пцр
- •Приборное обеспечение
- •Регистрация результатов
- •Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней
- •Преимущества пцр перед другими методами клинической лабораторной диагностики
- •Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
- •Специфичность
- •Чувствительность
- •Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа)
- •Возможность экспертизы
- •Исследуемый биологический материал
- •Локализация возбудителей
- •Правила забора материала и транспортировки клинического материала для пцр-диагностики
- •Кровь, плазма, сыворотка
- •Соскоб с эпителиальных клеток для выявления днк возбудителей инфекций, передающихся половым путем
- •Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью нк
- •Правила подготовки больного для пцр-диагностики урогенитальных инфекций
- •Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей
- •Гепатит а (hаv), е (hеv)
- •Гепатит в (hвv)
- •Гепатит d (вгd)
- •Гепатит с (hcv)
- •Использование пцр в пульмонологии и фтизиатрии
- •Применение пцр в урогинекологической практике
- •Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции
- •Генитальный герпес вызывает вирусы простого герпеса I и II типов
- •Криминология
- •Установление отцовства
- •Персонализированная медицина
- •Клонирование генов
- •Онкология
- •Применение пцр в практике службы крови
- •Управление качеством пцр-исследований
- •Преаналитический этап
- •Аналитический этап
- •Контроль качества пцр-исследований
- •Контроль реакции амплификации
- •Внутренний контроль вко
- •Проблема контаминации
- •Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами
- •Постаналитический этап
- •Заключение
- •Вопросы для самопроверки
- •Ответы на вопросы для самопроверки
- •Список литературы
- •Приложение
- •Возможности пцр-диагностики в гуз иоккдц
- •Комплекс исследований на заболевания,
- •Передающиеся половым путем (зппп), 2ж3001
- •Хламидиоз, 2ж3002
- •Туберкулез, 2жз003
- •Гепатит с, 2ж3004
- •Микоплазма гоминис, 2ж3005
- •Трихомониаз, 2ж3006
- •Гепатит в, 2ж3007
- •Уреаплазма, 2ж3009
- •Папиллома (впч с определением онкогенности), 2ж3010
- •Гонорея, 2ж3011
- •Гепатит с количественный, 2ж3012
- •Генотипирование вируса гепатита с, 2ж3013
- •Микоплазма гениталиум, 2ж3015
- •Цмв, 2ж3019
- •Вирус Эпштейна-Барр, 2ж3020
- •Вирус герпеса I-го и II-го типов, 2ж3021
- •Вирус герпеса 6-го типа, 2ж3022
- •Токсоплазмы гондии, 2ж3023
- •Энтеровирус, 2ж3027
- •Гепатит в количественный, 2ж3031
- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •664079, Г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100, к. 302.
ГОУ ДПО «Иркутский государственный институт совершенствования
врачей Министерства здравоохранения и социального развития РФ»
ГУЗ «Иркутский областной клинический
консультативно-диагностический центр»
Рекомендовано Учебно-методическим объединением
по медицинскому и фармацевтическому образованию
вузов России в качестве учебного пособия для системы
послевузовского профессионального образования врачей
УМО-17-28/578
08.09.09
Пцр - анализ в клинической лаборатории
Учебное пособие
Иркутск – 2009
УДК 616-078
ББК 53.45
П91
Рекомендовано Учебно-методическим объединением по медицинскому
и фармацевтическому образованию вузов России в качестве
учебного пособия для системы послевузовского
профессионального образования врачей
Р е ц е н з е н т ы
С.В. Цвиренко – доктор медицинских наук, профессор;
И.М. Устьянцева – доктор биологических наук, профессор.
К о л л е к т и в а в т о р о в
Т.В. Медведева, Р.Г. Скворцова, В.В. Кузьменко, О.Б. Огарков
|
П91 |
ПЦР – анализ в клинической лаборатории: учеб. пособие /Т.В. Медведева [и др.]. Иркутск: РИО ИГИУВа, 2009. 88с.
|
|
|
В учебном пособии представлены основные сведения об одном из современных методов диагностики – полимеразной цепной реакции (ПЦР). Дано описание всех его этапов – преаналитического, аналитического и постаналитического. Подробно освещены особенности использования ПЦР для диагностических целей, интерпретации результатов применения этой методики, обсуждаются ее преимущества и недостатки в сравнении с другими методами диагностики инфекций. Предназначено для врачей клинической лабораторной диагностики и врачей других специальностей. |
УДК 616-078
ББК 53.45
© ГОУ ДПО ИГИУВ Росздрава, 2009
© ГУЗ ИОККДЦ, 2009
Оглавление
|
Введение................................................................................................. |
6 |
|
История открытия и разработка метода ПЦР................................... |
7 |
|
Механизм полимеразной цепной реакции........................................ |
8 |
|
Основные компоненты ПЦР................................................................ |
8 |
|
Праймеры........................................................................................ |
8 |
|
Полимераза..................................................................................... |
9 |
|
Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты.......................................... |
9 |
|
Ионы двухвалентных металлов.................................................. |
9 |
|
Буферы............................................................................................ |
9 |
|
Анализируемый образец................................................................ |
9 |
|
Циклический температурный режим.......................................... |
10 |
|
Стадии постановки ПЦР...................................................................... |
11 |
|
Пробоподготовка (выделение ДНК/РНК)...................................... |
11 |
|
Амплификация.................................................................................. |
13 |
|
Факторы, влияющие на эффективность амплификации..... |
15 |
|
Использование «горячего старта» при постановке ПЦР.... |
15 |
|
Приборное обеспечение............................................................. |
16 |
|
Регистрация результатов................................................................ |
16 |
|
Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней.................................................................................................. |
19 |
|
Микробиологический метод................................................................. |
20 |
|
Иммунологический метод.................................................................... |
21 |
|
Микроскопия......................................................................................... |
21 |
|
Генотипический метод (ПЦР).............................................................. |
21 |
|
Преимущества ПЦР перед другими методами клинической лабораторной диагностики................................................................... |
23 |
|
Универсальность процедуры выявления различных возбудителей............................................................................. |
23 |
|
Специфичность.......................................................................... |
23 |
|
Чувствительность...................................................................... |
24 |
|
Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа) .................................................................................... |
24 |
|
Возможность экспертизы.......................................................... |
25 |
|
Исследуемый биологический материал........................................... |
25 |
|
Локализация возбудителей................................................................ |
26 |
|
Правила забора материала и транспортировки клинического материала для ПЦР-диагностики........................................................ |
26 |
|
Кровь, плазма, сыворотка.............................................................. |
27 |
|
Соскоб с эпителиальных клеток для выявления ДНК возбудителей инфекций, передающихся половым путем.................................. |
28 |
|
Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью НК..................... |
28 |
|
Правила подготовки больного для ПЦР-диагностики урогенитальных инфекций........................................................ |
29 |
|
Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей..... |
30 |
|
Моча................................................................................................. |
30 |
|
Мокрота............................................................................................ |
31 |
|
Синовиальная жидкость................................................................. |
31 |
|
Другие биологические жидкости.................................................... |
31 |
|
Секционный материал.................................................................... |
31 |
|
Применение метода ПЦР в медицине.................................................. |
31 |
|
Диагностическое значение ПЦР-исследований в клинике инфекционных заболеваний.............................................................. |
31 |
|
Гепатит А (HАV), Е (HЕV) ............................................................. |
34 |
|
Гепатит В (HВV) ............................................................................ |
34 |
|
Гепатит D (ВГD) ............................................................................ |
35 |
|
Гепатит С (HCV) ........................................................................... |
36 |
|
Использование ПЦР в пульмонологии и фтизиатрии....................... |
38 |
|
Применение ПЦР в урогинекологической практике......................... |
39 |
|
Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции |
40 |
|
Криминология................................................................................... |
44 |
|
Установление отцовства.................................................................... |
45 |
|
Персонализированная медицина...................................................... |
46 |
|
Клонирование генов........................................................................... |
47 |
|
Онкология............................................................................................ |
48 |
|
Применение ПЦР в практике службы крови..................................... |
48 |
|
Управление качеством ПЦР-исследований...................................... |
49 |
|
Документы, регламентирующие использование методов генодиагностики инфекций................................................................................. |
49 |
|
Основные принципы организации ПЦР-лабораторий....................... |
50 |
|
Порядок проведения работ в лаборатории........................................ |
51 |
|
Обеспечение качества в ходе ПЦР-исследований............................ |
53 |
|
Преаналитический этап.................................................................. |
54 |
|
Аналитический этап........................................................................ |
56 |
|
Контроль качества ПЦР-исследований................................... |
57 |
|
Контроль реакции амплификации....................................... |
59 |
|
Внутренний контроль ВКО................................................... |
60 |
|
Проблема контаминации........................................................... |
60 |
|
Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами................................................. |
62 |
|
Постаналитический этап...................................................................... |
63 |
|
Заключение............................................................................................. |
67 |
|
Вопросы для самопроверки................................................................ |
67 |
|
Ответы на вопросы для самопроверки............................................... |
71 |
|
Список литературы................................................................................ |
72 |
|
Приложение............................................................................................. |
73 |
|
Возможности ПЦР-диагностики в ГУЗ ИОККДЦ............................... |
73 |
|
Комплекс исследований на заболевания, передающиеся половым путем (ЗППП), 2Ж3001................................................. |
73 |
|
Хламидиоз, 2Ж3002...................................................................... |
73 |
|
Туберкулез, 2ЖЗ003..................................................................... |
74 |
|
Гепатит С, 2Ж3004........................................................................ |
75 |
|
Микоплазма гоминис, 2Ж3005..................................................... |
76 |
|
Трихомониаз, 2Ж3006................................................................... |
76 |
|
Гепатит В, 2Ж3007........................................................................ |
77 |
|
Уреаплазма, 2Ж3009.................................................................... |
77 |
|
Папиллома (ВПЧ с определением онкогенности), 2Ж3010....... |
78 |
|
Гонорея, 2Ж3011........................................................................... |
79 |
|
Гепатит С количественный, 2Ж3012........................................... |
80 |
|
Генотипирование вируса гепатита С, 2Ж3013........................... |
80 |
|
Микоплазма гениталиум, 2Ж3015................................................ |
81 |
|
ЦМВ, 2Ж3019................................................................................. |
82 |
|
Вирус Эпштейна-Барр, 2Ж3020................................................... |
83 |
|
Вирус герпеса I-го и II-го типов, 2Ж3021..................................... |
84 |
|
Вирус герпеса 6-го типа, 2Ж3022................................................ |
85 |
|
Токсоплазмы гондии, 2Ж3023...................................................... |
85 |
|
Энтеровирус, 2Ж3027................................................................... |
86 |
|
Гепатит В количественный, 2Ж3031............................................ |
87 |