Добавил:
Sekretar
kiopkiopkiop18@yandex.ru
t.me/Prokururor I Вовсе не секретарь, но почту проверяю
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Ординатура / Хирургия / Библиотека им академика М.И. Перельмана / Книга_4763_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана
.pdf
131
способностью к синтезу эндотоксинов, чрезмерному росту и доминированию на
фоне антибиотикотерапии [62]. Антибактериальная терапия способствует резкому
снижению общего биоразнообразия микробиома, способствует росту количества
протеобактерий и снижению содержания актинобактерий [78]. Тем самым как тип
протеобактерий, так и его представители могут участвовать в патогенезе развития
повторных эпизодов ОРВИ. По данным литературных источников, тип Actinobacteria
является одним из основных типов кишечного микробиома и играет важную роль в
поддержании постоянства внутренней среды кишечника.
Бактерии типа Actinobacteria (представитель которых род Bifidobacterium)
обладают пробиотическими функциями - обеспечивают защиту от кишечных
патогенов, оказывают иммуномодулирующее и противовоспалительное действие
[91]. Бактерии типаVerrucomicrobia улучшают барьерную функцию кишечного
эпителия [48]. Бактериальный тип Bacteroides синтезируют КЖК, производят
нейтротрансмиттеры (ГАМК). Однако патогенные виды Bacteroides способны
вызывать хронические воспалительные заболевания Лор-органов, инфекции полости
рта, токсигенные воспалительные диареи [95].
Из изложенного следует, что данные бактериальные типы могут быть
ответственны за местные иммунные реакции на слизистых оболочках.
В результате исследования микробиома ротоглотки нами было установлено,
что в группе здоровых детей концентрация Firmicutes и Actinobacteriota выше, чем в
группе ЧБД, а Proteobacteria ниже, чем в группе ЧБД. На фоне получаемого
профилактического курса у участников основных групп данное соотношение
меняется. Исходя из полученных нами данных можно сделать вывод, что все три
схемы коррекции приводят к увеличению относительного количества в ротоглотке
Firmicutes и Actinobacteriota и снижению Proteobacteria (р <0,001). Кроме того,
назначение препаратов на фоне коррекции питания приводит к снижению
относительного количества недифференцированной микрофлоры. Однако коррекция
132
питания вместе с назначением препаратов ведет к более выраженному повышению
Firmicutes, чем другие способы. У пациентов этой группы после проведенного курса
не отмечены статистически значимые различия по сравнению со здоровыми детьми в
относительном содержании Firmicutes (р =0,681) и Proteobacteria (р = 0,564) – этот
способ коррекции позволяет восстановить микробиом ротоглотки до уровня
«условно здорового» ребенка.
При исследовании кишечного микробиома также установлено, что в группе
«условно здоровых» детей концентрация Firmicutes, Actinobacteriota и
Verrucomicrobiа выше, а концентрация Bacteroidota, Proteobacteria и
недифференцированной микрофлоры ниже, чем в группе детей с РРИ (р <0,001).
Анализ полученных нами данных коррекции состава микробиома у детей с
РРИ показывает, что все три способа коррекции приводят к увеличению
относительного количества в кишечнике Actinobacteriota и Verrucomicrobia и
снижению Proteobacteria и недифференцированной микрофлоры. Кроме того,
назначение препаратов, как изолированное, так и на фоне коррекции питания,
приводит к снижению относительного количества Bacteroidota и увеличению
относительного количества Firmicutes (р <0,001). Установлено, что коррекция в виде
комплексного курса ведет к более выраженному снижению Bacteroidota и
увеличению Verrucomicrobia у пациентов и позволяет вернуть микробиом к уровню
«условно здорового» ребенка. Изолированное назначение препаратов позволяет
вернуть к норме относительное количество Actinobacteriota, Proteobacteria и
Verrucomicrobia, но оказывает недостаточное лечебное воздействие на Bacteroidota,
Firmicutes и недифференцированную микрофлору.
На уровне рода бактерий в микробиоме ротоглотки и кишечника участников
получены следующие данные.
Нами установлено, что в группе «условно здоровых» детей концентрация
Lactobacillis, Ruminococcus и Faecalibacterium в ротоглоточном и кишечном
133
микробиоме изначально была значительно выше, чем в остальных группах (р
<0,001).
После проведения курса установлено статистически значимое увеличение
относительного количества Lactobacillis в микробиоме ротоглотки у всех участников,
максимально в ОГ3, получавшей комплексную коррекцию (р ≤ 0,001). Однако,
несмотря на то что изолированные назначения диеты и препаратов привели к
увеличению концентрации Lactobacillis в ротоглотке, до исходного уровня «условно
здоровых» детей восстановить микробиом удалось только у участников ОГ3
(р=0,348).
При этом, на содержание Lactobacillis в кишечнике все методы коррекции
оказывали одинаковое воздействие в виде статистически значимого увеличения
относительного количества (р <0,001) и позволили восстановить микробиом до
уровня «условно здоровых» детей (р
ог1-ог3
=0,002, р
ог1-ог2
=0,021,
рог2-ог3
= 0,348).
Увеличение относительного количества Ruminococcus в ротоглотке вследствие
проведения курса нами отмечено у 100% когортыОГ1 и ОГ2, и у 95% когортыОГ3(р
<0,001). У детей ОГ2 (р=0,114) и ОГ3 (р=0,633) способы коррекции позволили
восстановить микробиом до уровня «условно здорового» ребенка.
Однако в кишечнике статистически значимое увеличение относительного
количества Ruminococcus получено только у пациентов ОГ2 и ОГ3 (р <0,001), а
восстановить микробиом до уровня «условно здорового» ребенка удалось только у
пациентов ОГ3, с комплексным курсом (р=0,249).
Увеличение относительного количества Faecalibacterium в ротоглотке и в
кишечнике в результате проведенного курса было идентичным, отмечено у 65%
когортыОГ1, 80% когортыОГ2 и 85% когорты ОГ3(р <0,001). У детей ОГ2 (р=0,131,
р=0,398) и ОГ3 (р=0,730, р=0,617) полученные курсы позволили восстановить
микробиом ротоглотки и кишечника до уровня «условно здорового» ребенка.
134
Кроме того, установлено, что в микробиоме кишечника в группе «условно
здоровых» детей концентрация Bifidobacterium значительно выше, чем в остальных
группах (р <0,001). После проведения курса установлено статистически значимое (р
<0,001) увеличение относительного количества Bifidobacterium у 100% когорты ОГ1,
62% когорты ОГ2, и 63% когорты ОГ3.
Слизистые оболочки у детей с РРИ наиболее часто инфицированы
бактериальными возбудителями, относящимися к родам Haemophilus, Neisseria,
Klebsiella, Escherichia. С инфицированием этими патогенами связан высокий уровень
бактериальных осложнений при ОРВИ у детей этой группы — острых отитов,
тонзиллофарингитов, синуситов, бронхитов, пневмоний. Причем для бактериальной
флоры, выделяемой у детей с РРИ, характерна высокая устойчивость к
антибиотикам, что связано с их ятрогенной селекцией ввиду более частой
необходимости в антибактериальной терапии различных осложнений ОРВИ у
иммунокомпрометированных детей [19,46].
До начала курса нами установлено, что в группе «условно здоровых» детей в
ротоглотке и кишечнике концентрация Haemophilus значительно ниже, чем в
остальных группах (р <0,001). На фоне проведенного курса выявлено статистически
значимое снижение относительного количества Haemophilus в ротоглотке и в
кишечнике у пациентов ОГ2 и ОГ3(р <0,001).
Также установлено, что в ротоглоточном микробиоме «условно здоровых»
детей концентрация Neisseria значительно ниже, чем у детей с РРИ (р <0,003).
Статистически значимая динамика в виде снижения концентрации у участников
основных групп отмечена только на фоне комплексного курса, у пациентов ОГ3, у
62,5% когорты (р <0,001).
Кроме того, выявлено, что в группе «условно здоровых» детей в микробиоме
кишечника концентрация Bacteroides ниже, чем у детей с РРИ. Снижение
135
относительного содержания микроорганизма на фоне проводимой коррекции
отмечается у участников ОГ2 (р <0,036) и ОГ3 (р <0,001).
Кроме вышеописанных результатов, при исследовании микробиома кишечника
получены следующие данные о процентном содержании Escherichia-Shigella у
участников различных групп- не было выявлено статистически значимых различий
между пациентами (р = 0,077), что говорит об отсутствии существенного влияния
данного рода микроорганизмов на патогенез возникновения повторных ОРВИ.
Таким образом, на фоне проведенного курса коррекции изменилось
соотношение бактерий в составе ротоглоточного и кишечного микробиома
участников основных групп, приблизившись к уровню «условно здорового» ребенка
у участников, получающих комплексный курс.
Изменения в составе микробиома у детей основных групп на фоне проведения
курса профилактики имеют прямую связь с клинической динамикой параметров
заболеваемости ОРВИ – изменением частоты эпизодов ОРВИ, длительностью
эпизодов и потребностью в курсах антибактериальной терапии.
На основании полученных нами данных установлено, что на этапе
прохождения курса не было статистически значимых различий между пациентами
основных групп, ни в количестве эпизодов ОРИ (р=0,717), ни в средней
длительности эпизода (р=0,603), ни в количестве курсов антибиотикотерапии
(р=0,966). Таким образом, все три способа коррекции дали соизмеримые результаты
в течение периода прохождения курса. Однако за период наблюдения в течение 6
месяцев после завершения курса выявлены статистически значимые различия между
пациентами - число эпизодов ОРВИ различалось между группой детей, получивших
комплексный курс (ОГ
3
) и остальными группами (р
ог1-ог3
= 0,009, р
ог2-ог3
= 0,006).
Дети, получившие комплексный курс, болели ОРВИ значительно реже. Кроме того,
установлены различия в средней длительности эпизодов ОРВИ (р
ог1-ог3
= 0,001, р
ог2-ог3
= 0,013). Дети, получившие комплексный курс, болели в среднем 4,15 календарных
136
дней, в то время как дети с изолированной коррекцией питания и изолированным
приемом препаратов болели в среднем 5,5 и 5,4 календарных дней, соответственно.
При этом не было выявлено статистически значимых различий между пациентами
различных групп в количестве курсов антибиотикотерапии (р = 0,811).
Кроме того, нами определено среднее время наступления нового эпизода
ОРВИ после завершения курса у всех участников основных групп. Максимальный
результат получен в ОГ
3
, где медиана срока наступления нового случая ОРВИ
составила 15,0±2,2 недель (95% ДИ: 10,6 – 19,4 недель), а среднее время наступления
нового случая составило 15,6 недель с момента окончания лечения. Безрецидивная
выживаемость составила 85,0%.
В подтверждение клинической динамики нами определены корреляционные
зависимости содержания микроорганизмов в составе микробиома и их связь с
параметрами заболеваемости ОРВИ.
Установлена прямая корреляционная связь между количеством Firmicutes в
ротоглотке и кишечнике (r=0,37; р <0,001), также между количеством Actinobacteriota
в ротоглотке и кишечнике (r=0,47; р<0,001), а также количеством Firmicutes в
ротоглотке и Actinobacteriota в кишечнике (r=0,42; р <0,001), что подтверждает
однотипность состава микробиома ротоглотки и кишечника у детей.
Также установлена обратная корреляционная связь между количеством
Firmicutes в ротоглотке и количеством эпизодов ОРВИ (r=-0,51; р <0,001) и средней
длительностью эпизодов ОРВИ (r=-0,38; р<0,001) у детей с РРИ, что характеризует
роль бактериального типа Firmicutes в формировании иммунной защиты слизистых
ВДП у детей. Этот вывод подтверждает установленная обратная корреляционная
зависимость между количеством Firmicutes в ротоглотке после проведения курса и
средней длительностью эпизодов ОРВИ за 6 месяцев после прохождения курса (r=-
0,37; р=0,004), а также между количеством Actinobacteriota в ротоглотке, количеством
137
эпизодов ОРИ (r=-0,33; р=0,011) и средней длительностью эпизодов ОРВИ за 6
месяцев после проведения курса (r=-0,32; р=0,013).
Установленная прямая корреляционная зависимость между количеством
Proteobacteria в кишечнике и количеством эпизодов ОРВИ (r=0,31; р=0,003), а также
средней длительностью эпизодов ОРВИ за 12 месяцев, предшествующих началу
курса (r=0,40; р<0,001) подтверждает роль бактериального типа Proteobacteria в
формировании заболеваемости ОРВИ у детей.
Диагностическая значимость полученных клинико-анамнестических и
микробиологических показателей использована нами для создания алгоритма
персонифицированного принятия решения выбора фармакомикробиомической
компенсации для снижения частоты ОРВИ у детей с РРИ.
138
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Нами выполнено исследование микробиома ротоглотки и кишечника у детей в
возрастной группе от 1 года до 6 лет включительно методом секвенирования
бактериальных генов 16S рРНК.
Определён таксономический состав микробного пейзажа ротоглотки и
кишечника у здоровых и детей с РРИ, проведен сравнительный анализ.
Выявлены существенные различия в количественном и качественном составе
микробиома (р <0,001).
В ротоглотке в группе здоровых детей процентное содержание Firmicutes и
Actinobacteriota выше, а Proteobacteria ниже, чем у детей с РРИ. В кишечном
микробиоме в группе «условно здоровых» детей концентрация Firmicutes,
Actinobacteriota и Verrucomicrobiа выше, а концентрация Bacteroidota, Proteobacteria и
недифференцированной микрофлоры ниже, чем у детей с РРИ (р <0,001). В родовом
отношении в группе «условно здоровых» детей концентрация Lactobacillis,
Ruminococcus и Faecalibacterium в ротоглоточном и кишечном микробиоме выше,
чем у детей с РРИ, а концентрация Haemophilus ниже (р <0,001). В ротоглоточном
биотопе у «условно здоровых» детей концентрация Neisseria значительно ниже, чем
у детей с РРИ (р <0,003). Кроме того, в группе «условно здоровых» детей в
кишечном микробиоме концентрация Bifidobacterium выше, чем у детей с РРИ, а
концентрация Bacteroides ниже (р <0,001).
На фоне проведенного курса коррекции соотношение бактерий в составе
ротоглоточного и кишечного микробиома участников меняется, установлены
корреляционные зависимости между изменением состава микробиома и параметров
заболеваемости ОРВИ у участников исследования.
139
Полученные результаты диссертационной работы пересекаются с имеющимися
научными данными и имеют важное значение в понимании патогенеза
возникновения повторных ОРВИ.
Установленные в данном исследовании связи анамнестических, клинико –
лабораторных данных с составом микробиома ротоглотки и кишечника, а также
выявленные различия в составе микроорганизмов у сравниваемых групп,
подтверждают современные представления о роли таксономического состава
микробиома в развитии и течении ОРВИ и позволили создать персонифицированный
алгоритм для выбора способа профилактики возникновения РРИ у детей, возможный
к широкому использованию в амбулаторной педиатрической практике.
140
ВЫВОДЫ
1. Изучен состав микробиома ротоглотки и кишечника у детей раннего и
дошкольного возраста, установлены значимые (р <0,001) различия в
таксономическом составе микробиома здоровых и детей с РРИ на уровне типа
(Proteobacteria, Bacteroidota, Firmicutes, Actinobacteriota, Verrucomicrobiа) и рода
бактерий (Lactobacillis, Bifidobacterium, Ruminococcus, Faecalibacterium, Haemophilus,
Neisseria и Bacteroides).
2. Выявлены корреляционные связи между таксономическим составом
микробиома ротоглотки и кишечника и особенностями течения повторных случаев
ОРВИ (между количеством Firmicutes в ротоглотке с количеством эпизодов ОРВИ
(r=-0,51; р<0,001) и средней продолжительностью эпизодов ОРВИ (r=-0,38; р<0,001);
между количеством Proteobacteria в кишечнике с количеством эпизодов ОРВИ
(r=0,31; р=0,003) и средней продолжительностью эпизодов ОРВИ (r=0,40; р<0,001)).
3. На основе результатов генетического секвенирования 16S-
рибосомальной РНК создан персонифицированный алгоритм для выбора способа
профилактики возникновения РРИ у детей, являющийся высокоэффективным
(р<0,001) инструментом снижения заболеваемости у детей.
4. При наблюдении в течение 6 месяцев средняя частота заболеваемости,
длительность эпизодов ОРВИ, количество курсов антибиотикотерапии статистически
значимо различалось между группой сравнения и основной группой детей с РРИ
(р<0,001), медиана срока наступления нового случая ОРВИ была выше в основных
группах, и безрецидивная выживаемость (85%), и среднее время наступления нового
случая ОРВИ (15,6 недель) оказались наиболее высокими в группе ОГ
3
, что
подтверждает эффективность предложенного персонифицированного алгоритма
профилактики.
Соседние файлы в папке Библиотека им академика М.И. Перельмана