Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Технология продуктов животного происхождения (Технология сыра и продуктов из вторичного молочного сырья). Лабораторный практикум. Учебное пособие
.pdf
Посев сыра для определения БГКП (при контроле производства сычужных сыров). Бактерии группы кишечных палочек в
сыре определяются посевом на агар желчный фиолетовокрасный.
Каждое разведение (I, II, III, IV) должно быть засеяно по
1 см3 в отдельную чашку Петри и залито расплавленным и остуженным до 45 °С агаром желчным фиолетово-красным. После
застывания агара чашки Петри переворачивают крышками вниз и
ставят в таком виде в термостат при температуре (37±1) °С на
16-24 ч, но не более 24 ч.
Учитывают розовато-фиолетовые колонии диаметром
больше 0,5 мм с более светлым, по сравнению с центром, ореолом. Число колоний, выросших на каждой чашке, пересчитывают
на 1 г или 1 см3 продукта с учётом разведения.
Количество бактерий группы кишечных палочек рассчитывают на твердой среде по общепринятой методике.
Определение количества спор мезофильных анаэробных
лактатсбраживающих (маслянокислых) бактерий. Споры мезо-
фильных анаэробных бактерий в сыре определяются на среде
СДА.
Разведения исследуемого продукта (0, I, II ), предварительно
подвергнутые прогреву при (75± 1) °С с выдержкой 3 0 мин, высевают каждое по 1 см3 отдельно в 2 пробирки со средой СДА. Перед
посевом среду кипятят в водяной бане 30 мин, охлаждают до температуры 45 °С. После застывания питательной среды сверху, ее
поверхность заливают слоем водного агара высотой 1 5-20 мм. Посевы выдерживают в термостате при (37±1) °С в течение 3 сут.
Рост мезофильных анаэробных лактатсбраживающих бактерий в посевах определяют по образованию разрывов столбика
агара и изменению цвета питательной среды с красного до соломенно-желтого ( рисунок).
11

Р
исунок
. Признаки роста
Образование в среде желтых
пятен или точек также указывает на
наличие анаэробных
лактатсбраживающих бактерий.
Наиболее вероятное число спор
лактатсбраживающих анаэробных
бактерий рассчитывают по табл. 3. При
определении споровых анаэробов
учитывают число пробирок, давших
положительный и отрицательный
результат при посеве (0, I и II)
разведения сыра в 2 параллельные
споровых анаэробных
пробирки со средой СДА.
микроорганизмов
на среде СДА
Таблица 3
Вероятное число спор лактатсбраживающих анаэробных бактерий
Наибо-
Количество пробирок
с положительными
результатами
при посевах
1,0 см30,1 см30,01 см31,0 см31,0 см30,1 см3 0,01 см31,0 см
0 0 0 0,0 1 1 2 0 0 1 0,5 1 2 0 2,0
0 0 2 - 1 2 1 3,0
0 1 0 0,5 1 2 2 0 1 1 0,9 2 0 0 2,5
0 1 2 - 2 0 1 5,0
0 2 0 0,9 2 0 2 0 2 1 - 2 1 0 6,0
0 2 2 - 2 1 1 13,0
1 0 0 0,6 2 1 2 20,0
1 0 1 1,2 2 2 0 25,0
1 0 2 - 2 2 1 70,0
1 1 0 1,3 2 2 2 110,0
1 1 1 2,0 2 - - и более
лее
веро-
ятное
число
спор
Количество пробирок
с положительными
результатами
при посевах
Наи-
более
веро-
ятное
число
спор
3
12

Пример определения: количество пробирок, обнаруживающих рост микроорганизмов для 0, I, II разведений (1,00; 0,10;
0,01 см3), соответственно равно 2, 1, 0. Из табл. 3 вероятное число
споровых анаэробов в 1 см3 составляет 6,0.
Результаты, в которых количество пробирок с видимыми
признаками роста бактерий при посевах 1,00; 0,10; 0,01 см3 продукта соответственно равно 002, 012, 102, 112, 202, не могут быть
использованы для расчета, т. к. в 95 % случаев они вызваны несовершенной техникой приготовления разведений или присутствием антибактериальных веществ. В данных случаях исследование
продукта следует повторить.
Определение маммококков. Эта группа бактерий вызывает
пептонизацию казеина и образование горьких пептидов, поэтому
в ряде случаен требуется определение маммококков.
Из подготовленного ряда десятикратных разведений высевают IV и V разведения на молочный агар, после чего учитывают
выросшие мелкие колонии с незначительной светлой зоной.
3. Результаты микробиологических исследований необхо-
димо занести в табл. 4.
Таблица 4
Результаты исследований образцов
Объект
исследова-
ния
Молоко
Проба на
брожение
(класс)
Сычужно-
бродильная
проба (класс)
Маслянокислые
бактерии (споровые
анаэробы) в 1 г
БГКП
в 1 г
Сыр
4. Сравнить полученные результаты с требованиями Технического регламента Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» (ТР ТС 033/2013) (табл. 5) и сделать
выводы.
13

Допустимые уровни содержания микроорганизмов в сырах и сырных продуктах
Масса продукта, г,
в которой не
Индекс, группа
продуктов
Сыры (сверхтвердые, твердые, полутвердые, мягкие,
сывороточноальбуминные) - 0,001 25
Сыры и сырные продукты
плавленые:
- без компонентов
- с компонентами
- копченые
КМА-
ФАнМ,
КОЕ/г, не
более
3
5·10
4
1·10
4
1·10
допускаются
БГКП
(коли-
формы)
0,1
0,1
0,1
Патоген-
ные, в том
числе
сальмо-
неллы
25
25
25
S. aureus не допус-
каются в 0,001 г;
L. monocytogenes в
25 г не допускают-
ся
Плесени и дрожжи
не более 50 КОЕ/г;
Плесени и дрожжи
не более 100
КОЕ/г;
Плесени и дрожжи
не более 100
КОЕ/г
Таблица 5
Примечание
Контрольные вопросы
1. В чем заключается сущность и методика проведения
бродильной и сычужно-бродильной проб?
2. По каким микробиологическим критериям проводят
оценку качества сыров и сырных продуктов?
3. Какова методика определения наличия БГКП в сырах и
сырных продуктах?
4. В чем заключается сущность и методика определения
количества спор мезофильных анаэробных лактатсбраживающих
(маслянокислых) бактерий?
14

Лабораторная работа № 2.
ИЗУЧЕНИЕ ФАКТОРОВ, ВЛИЯЮЩИХ
НА СЫЧУЖНОЕ СВЕРТЫВАНИЕ МОЛОКА
Цель работы: ознакомиться с процессом свертывания мо-
лока под действием сычужного фермента; изучить влияния количества сычужного фермента, температуры свертывания, содержания солей кальция и режимов пастеризации молока на процесс
его свертывания.
Приборы, материалы и реактивы: сухой порошок сы-
чужного фермента, раствор с массовой долей хлорида кальция
40 %, раствор с массовой долей хлорида кальция 4 %, молоко коровье 2 дм3, колбы мерные на 100 см3 (4 шт.), стаканы стеклянные на 250 см3(16 шт.), цилиндр мерный на 250 см3, пипетки на
10 см3 (4 шт.), пипетки градуированные на 1 см3 (3 шт.), секундомер, баня водяная.
Теоретические сведения
Одно из основных свойств молока − способность свертываться под действием сычужного фермента широко используется
в сыроделии для выработки разнообразных сыров. Лишь при
производстве некоторых видов сыров вместо сычужного используется кислотное свертывание.
При выработке сыров для свертывания молока применяют
сычужный фермент, препараты ВНИИМС и пепсины животных.
Сычужный фермент − это однородный порошок от белого
до желтовато-серого цвета с кристаллами соли, имеющий специфический запах.
В сыроделии молокосвертывающие препараты используются в виде водных растворов, которые готовят на кипяченой
питьевой воде, нагретой до t = 30-32 °С путем выдержки фермен-
та в течение 0-30 мин до его внесения в молоко. Количество молокосвертывающего фермента, необходимого для свертывания
15

подготовленного молока, устанавливают по показаниям прибора
(кружки) ВНИИМС. По данным ВНИИМС (В. П. Табачников и
др.), процесс сычужного свертывания условно разделяют на четыре стадии:
1) индукционный период, включающий ферментативную
стадию и стадию скрытой коагуляции;
2) стадия массовой коагуляции;
3) стадия структурообразования и упрочнения сгустка ;
4) стадия синерезиса.
Реограмма, отражающая процесс сычужного свертывания
белков молока (рис. 1), показывает, что после внесения сычужного фермента (точка 0) наступает стадия индукционного периода,
в течение которого вязкость молока почти не изменяется, лишь
после точки К на II стадии наблюдается ее резкое повышение, так
как происходит массовая агрегация частиц. В точке Г (гельточка) все агрегаты цепочки частиц объединяются в пространственную структуру сгустка и в течение III стадии вязкость остается постоянной - заканчивается образование и уплотнение структуры, после чего начинается ее разрушение с падением вязкости
на IV стадии (стадии синерезиса после точки С).
Вязкость
Продолжительность сычужного свертывания
Рис. 1. Реограмма процесса сычужного свертывания молока
Готовность сычужного сгустка определяют следующим образом. Острым ребром шпателя делают разрез сгустка, затем пло-
16

ской стороной шпателя вдоль разреза приподнимают сгусток и по
расколу судят о его свойствах (прочности) и готовности. Если
сгусток дает раскол с нерасплывающимися острыми краями без
образования хлопьев белка и с хорошо выделяющейся сывороткой светло-зеленого цвета, то он готов к разрезке. Неровный излом сгустка с мелкими кусочками белка и мутно-беловатый цвет
сыворотки указывают на слабую прочность сгустка.
Прочность сгустка повышается с ростом температуры свертывания молока, кислотности молока, увеличением содержания
растворимых солей кальция, увеличением количества молокосвертывающего фермента, нормальном физико-химическом составе молока, а снижается при уменьшении температуры свертывания молока, понижении кислотности молока, растворимых солей
кальция, количества фермента в сычужно-вялом молоке.
Свертывание молока сычужным ферментом происходит
при слабокислой реакции молока (рН 5,9-6,0) и достаточном содержании растворимых солей кальция. Медленное или быстрое
свертывание молока сычужным ферментом, образование «вялого» или «плотного» сгустка определяет формирование качественных показателей сыра. От свойств сычужного сгустка зависит
скорость выделения сыворотки зерна при обработке его в ванне и
содержание в нем влаги, которая, в свою очередь, влияет на ход
ферментативных процессов образования сыра, структуру и физические свойства сырного теста и, тем самым, на качество сыра.
Химизм действия сычужного фермента на казеин молока
изучен во многих работах. Согласно последним данным различают три стадии действия сычужного фермента на молоко:
1 − энзиматическая или ферментативная;
2− коагуляция казеина (образование сгустка);
3 − протеолитическое расщепление фракций казеина.
Первые две стадии протекают в начальный период выработки сыра, третья − на заключительном этапе при его созревании. Наиболее изучена в настоящее время первая стадия сычужной коагуляции казеина, при которой происходит ферментативный разрыв полипептидной цепи κ-фракции казеина. Сычужный
фермент действует избирательно на пептидную связь между
17

105-м и 106-м аминокислотным остатком фенилаланина и метио-
C
нина. При этом происходит отщепление гликомакропептида и
нарушение «защитных» свойств κ-казеина (рис. 2).
После разрыва этой связи происходит коагуляция as- и β-
фракций казеина под влиянием ионов кальция. Электрический
заряд частиц казеина, являющийся фактором его агрегативной
устойчивости, снижается, и между частицами увеличивается действие сил гидрофобного взаимодействия (силы Ван-дер-ВаальсаЛондона), которые в конечном итоге ведут к образованию сгустка. На стадии ферментативного гидролиза происходит дальнейшее расщепление молекул as- и β-казеина на фрагменты с мень-
шей молекулярной массой (полипептиды и аминокислоты).
На процесс свертывания молока сычужным ферментом
оказывают влияние следующие факторы: масса сычужного фермента, температура свертывания, содержание растворимого кальция, рН молока, содержание белковых веществ, режим пастеризации молока, примесь молозива и др.
Масса сычужного фермента. Известно, что время коагуля-
ции tc обратно пропорционально массе используемого фермента.
Согласно правилу Сторка и Сегелке эта зависимость выражается
уравнением:
K
tt +=
,
0c
где t0 − время между моментом прекращения ферментативной
реакции и моментом свертывания;
К − константа;
С − масса фермента.
Температура. Продолжительность свертывания молока за-
висит от температуры. Ниже 10 °С свертывание молока не происходит, в диапазоне температур от 10 до 20 °С и даже 40-42 °С
скорость свертывания постепенно возрастает. Затем она снижается, и при температуре выше 65 °С свертывание прекращается,
фермент теряет свертывающую активность.
18

19
Рис. 2. Механизм сычужной коагуляции казеина
19

Кислотность. Влияние кислотности на свертывание молока довольно существенно. При повышении кислотности продолжительность свертывания сокращается, что можно объяснить его
воздействием на активность фермента (оптимум рН для воздействия находится в интервале рН 5-6).
Массовая доля казеина в молоке. От содержания казеина
зависят скорости сычужного свертывания и обсушки зерна, потери белков и жира с сывороткой, качество и выход сыра. Показатели сычужно-вялого молока, из которого не выработать качественный сыр, − это низкое содержание казеина, ионов кальция
(менее 8 мг в 100 см3 при нормальном содержании 11 мг в 100 см3)
и Р (содержание Са и Р коррелирует с содержанием казеина). При
наличии в молоке более 2,5 % казеина существует линейная зависимость между этим показателем и плотностью сгустка. Снижение массовой доли казеина до 0,7 % приводит к полной потере
способности молока свертываться под действием сычужного
фермента.
Содержание казеина в молоке нормального состава тесно
коррелирует с содержанием общего белка, которое чаще всего и
принимается за показатель сыропригодности молока. В нормальном молоке массовая доля казеина составляет 78-85 % от содержания белка. Считается, что высококачественный сычужный сыр
можно выработать из молока с массовой долей белка не менее
3,2 %, что соответствует примерно массовой доле 2,5 % казеина.
Порядок выполнения работы
Влияние массовой доли раствора сычужного фермента на
процесс свертывания молока. 1. Приготовить растворы с массовой
долей сычужного фермента 0,25; 1,00; 2,00; 3,00 %. Для этого необходимо отвесить на технических весах соответствующее количество сухого порошка и растворить его в осветленной (70-90 °Т) пастеризованной сыворотке при 30-40 °С, доведя до 100 см3.
2. Определить продолжительность свертывания молока по-
лученными растворами сычужного фермента.
20
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
