- •Введение
- •1. Отбор доноров и реципиентов
- •2. Вызывание суперовуляции у коров-доноров
- •3. Извлечение эмбрионов
- •4. Пересадка эмбрионов
- •5. Манипулирование с эмбрионами вне организма
- •6. Технология эмбриотрансплантации
- •6.1. Осеменение коров-доноров
- •6.2. Нехирургическое извлечение эмбрионов
- •6.3. Оценка качества эмбрионов, их кратковременное культивирование
- •6.4. Криоконсервирование эмбрионов
- •6.5. Повышение эффективности нехирургической пересадки эмбрионов
- •7. Методы коррекции воспроизводительной функции коров и телок
- •7.1. Определение эффективности применения «достима» для стимуляции половой функции и повышения оплодотворяемости коров
- •7.2. Применение «достима» для повышения выхода пригодных для пересадки эмбрионов крупного рогатого скота
- •Термины и определения
- •Список литературы
(2/5 объема). Заправку производили таким образом, чтобы верхний столбик раствора криопротектора смочил пыж пайетты. Нижний конец пайетты закрывают пластиковой пробкой, на которой указывают дату извлечения зародышей, номер донора и номер пайетты.
Для замораживания эмбрионов используют замораживатель MS-21. Замораживание эмбрионов проводили в парах жидкого азота
вследующей последовательности:
1)охлаждение зародышей до –7 °С со скоростью 4 градуса
вминуту;
2)сидинг;
3)замораживание эмбрионов до –30 °С со скоростью 0,3 °С
вминуту;
4)погружение пайет в жидкий азот и перенос на хранение
всосуд Дьюара.
6.5. Повышение эффективности нехирургической пересадки эмбрионов
Нехирургическая пересадка эмбрионов состоит в основном из трех этапов: подготовки реципиентов к пересадке эмбрионов; пересадки, включающей прохождение с помощью специальных катетеров внутренней полости половых органов от преддверия влагалища до верхушки рога матки; строгого контроля за реципиентом до установления стельности или до выявления охоты. Основным критерием эффективности применения метода трансплантации эмбрионов является их приживляемость после нехирургической пересадки. Этот показатель во многом зависит от качества самих эмбрионов, степени подготовки реципиента к пересадке (качество желтого тела в яичнике, состояние половых органов), квалификации специалиста и условий выполнения работы по пересадке.
Подготовка телок-реципентов ведется аналогично подготовке коров-доноров эмбрионом перед обработкой их гормонами для получения суперовуляции.
Перед пересадкой эмбрионы размораживают в 2 этапа:
1)выдержка пайеты на воздухе в течение 10 секунд;
2)размораживание пайеты в водяной бане при температуре
+25 °С.
47
Затем из эмбриона извлекают криопротектор в последовательности, обратной насыщению, и помещают в пайету для пересадки.
Нехирургическую пересадку эмбрионов проводят в период диэструса (7-й день). В этот период матка наиболее восприимчива к инфекции. Поэтому при пересадке необходимо строго соблюдать асептику. У реципиента должно быть четко выраженное желтое тело, качество которого определяется непосредственно перед пересадкой иоцениваетсяпотрехбалльнойшкале:«отличное»,«хорошее»,«удовлетворительное». Животные, у которых желтые тела отсутствуют или слабо выражены, исключают из числа реципиентов и используют
втехнологии искусственного осеменения. Отобранных реципиентов фиксируют в станке, наружные половые органы и перениальную область обмывают теплой водой с мылом, вытирают салфеткой.
Пересадка эмбрионов выполняется специальными катетерами. Эмбрионы, заправленные в пайетту, помещают в стерильный катетер для пересадки, на который снаружи надевают полиэтиленовый санитарный чехол. Специалист по пересадке эмбрионов рукой
вперчатке, увлажненной теплым мыльным раствором, раскрывает у реципиента наружные половые губы, другой рукой вводит катетер во влагалище. Чтобы катетер не попал в мочеиспускательный канал, его сначала продвигают на 10–15 см снизу вверх и вперед под углом 35–40о, а дальше горизонтально до упора в шейку матки. Санитарный чехол прорывают катетером. Под ректальным контролем катетер продвигают через цервикальный канал. Манипуляции с шейкой матки проводятся осторожно, без резких движений и давления на инструмент. После прохождения цервикального канала катетер вводят в рог матки, на стороне которого имеется хорошо развитое, функционирующее желтое тело. Форма желтого тела должна быть округлой, с четко выраженной на верхушке ямкой в виде грибка. Катетер продвигают как можно ближе к верхушке рога матки, ректально контролируя положение округлой головной части инструмента. Убедившись в правильности расположения инструмента, специалист осторожно выдавливает содержимое пайетты в просвет рога матки. Извлекать катетер из полости матки реципиента необходимо осторожным движением.
Пересадка эмбрионов проводиться быстро и осторожно. Время нехирургической пересадки 1–2 мин. После пересадки эмбрионов велся контроль за проявлением охоты у реципиентов.