3. Извлечение эмбрионов

Извлечение эмбрионов у коров до середины 70-х гг. проводили

восновном хирургическим методом. Наиболее распространенным был метод лапаротомии по белой линии живота с использованием общей анестезии. Вымывание яйцеклеток хирургическим методом можно проводить из яйцевода или и I яйцевода и матки в зависимости от того, в какие сроки после осеменения проводят извлечение эмбрионов. Эмбрионы крупного рогатого скота поступают из яйцевода в матку между 3-м и 5-м днями, но до 10 % яйцеклеток остается в яйцеводах, по крайней мере, до 8-го дня. На 6–8-й день после осеменения 7 % извлеченных яйцеклеток было найдено в яйцеводах, 73 % – в верхней части рога матки на расстоянии до 10 см от ма- точно-трубного соединения и 20 % – в основании рога.

Эффективность извлечения эмбрионов зависит от времени вымывания после овуляции. На 3-й, 4-й, 5-й, 6-й, 7-й и 8-й дни после охоты было извлечено 73,3, 53,4, 66,6, 64,1, 50,0 и 45,9 % яйцекле-

ток к числу овуляций соответственно. В период с 7-го до 12-го дня после охоты Бранд с соавторами не обнаружили уменьшения процента извлеченных яйцеклеток с удлинением интервала времени от охоты до вымывания; средний процент извлечения составил 62,5 по 264 овуляциям. Обобщив данные хирургического извлечения эмбрионов от 480 доноров, Гордон установил, что эффективность извлеченияколеблетсяот11,4до57 %исоставляетвсреднем6,5яйцеклеток на одно извлечение. Из числа извлеченных яйцеклеток 75 % были оплодотворенные, что составляет 43 % к числу овуляций, или в среднем 4,9 эмбриона (с колебаниями от 2,0 до 8,4) на каждого донора.

Ввиду трудоемкости, дороговизны и неотъемлемого риска при хирургическом вмешательстве на смену ему пришел нехирургический метод, основанный на введении в матку устройства по естественному каналу. Хирургический метод извлечения эмбрионов крупного рогатого скота в настоящее время рекомендуется только

висключительных случаях, если условия в матке непригодны для развития эмбрионов, или в научно-исследовательских целях, когда возникает необходимость получать эмбрионы в течение 4-дневного срока после охоты.

14

Нехирургический способ значительно проще по технике исполнения, чем хирургический. Уступая незначительно по результативности при разовом исполнении, он, в конечном счете, имеет гораздо большую эффективность, так как позволяет с минимальным риском многократно использовать высокопродуктивных животных. Он требует меньших затрат времени, сил и средств, а при соответствующем оснащении позволяет извлекать эмбрионы непосредственно на животноводческой ферме. Учитывая сроки попадания яйцеклеток

вматку, нехирургический способ извлечения эмбрионов может быть применен не ранее 5–6-го дня после осеменения.

Первое устройство для нехирургического извлечения эмбрионов крупного рогатого скота было предложено в 1949 г. Это был резиновыйкатетерсбаллоном,приносящимиотводящимканалом.Его вводили через канал шейки матки в один из ее рогов. Нагнетанием воздуха в баллон ограничивали промывную полость и фиксировали катетер. Промывание осуществляли от верхушки рога к телу матки. Результативность применения этого устройства была очень низкой,

всреднемодинэмбрионнадонора.Поэтомуэтоустройствоиспособ были надолго забыты. Шуги предложил трехканальное устройство, состоящее из наружной двухканальной трубки с баллоном и внутренней подвижной, которая может быть выдвинута на различную глубину в зависимости от размера матки. Направление тока жидкости – от тела матки к верхушке рога. Это устройство также не нашло широкого распространения.

В70-х гг. широкое применение для нехирургического извлечения эмбрионов получили двух- и трехканальные катетеры Фолея.

Эти катетеры отличаются от ранее предложенного большей эластичностью и высоким качеством изготовления. Для приданая жесткости при введении их в канал шейки матки вставляют металлический стилет. При использовании трехканального катетера промывную жидкость вводят в один канал, а извлекают через другой; третий канал используется для наполнения баллона. В случае двухканального катетера промывная жидкость вводится и вытекает через один и тот же канал.

Расбех предложил устройство, в котором резиновый катетер Фолея вводится внутрь стальной трубки, а в конечную часть вставлена спираль, придающая упругость концу устройства и предотвращающая

15

выход стилета из отверстия. Устройство снабжено двухпозиционным краником для удобства введения и отсасывания промывной среды. Другие исследователи применили телескопическое устройство для извлечения эмбрионов, представляющее собой двухканальный катетер Фолея, в который вставлена стальная трубка, а через канал стальной трубки пропущена трубка, выдвигающаяся в рог матки.

Сообщалось об успешном извлечении эмбрионов при помощи трехканального устройства, состоящего из жесткого трехканального остова и эластичного одноканального наконечника. Предложено также простое двухканальное устройство, состоящее из стальной трубки диаметром 4 мм с баллоном, расположенным на переднем конце таким образом, что при наполнении его в матке он принимает форму воронки.

Все названные устройства для нехирургического извлечения эмбрионов крупного рогатого скота характеризуются тем, что благодаря прикрепленному баллону на конце катетера обеспечивается одновременно его фиксация и ограничение промывной полости. Однако устройство подобного типа не удается провести через канал шейки матки у всех животных, и поэтому около 10–15 % доноров остаются неиспользованными.

Предложено и широко апробировано простое одноканальное безманжетное устройство, состоящее из стальной трубки с приспособлением для фиксации в шейке матки в виде пуговчатых и шарообразных утолщений и эластичного съемного наконечника из поливинилхлорида. Устройство легко стерилизуется (кипячением, автоклавированием или холодным способом), позволяет проводить быструю замену наконечников, которые очень дешевы и выдерживают многократную стерилизацию.

Введение промывной жидкости и сбор смыва при использовании указанных устройств осуществляются с помощью системы трубок со шприцем емкостью 50–60 мл и распределительным устройством (краник, клапанное устройство или зажимы); смыв собирают в пробирки емкостью 150–200 мл, мерные цилиндры, делительные воронки или шприцы.

Подготовка животных к извлечению эмбрионов включает обследование на наличие желтых тел, чистку и мойку, ограничение

16

дачи корма, а за сутки прекращение кормления и поения. Голодная диета не обязательна, хотя отсутствие ее затрудняет работу в асептических условиях. Непосредственно перед извлечением эмбрионов у донора моют и дезинфицируют наружные половые органы; делают низкую сакральную эпидуральную анестезию введением 4–6 мл 2 %-го раствора ксилокаина или медокаина, 8–10 мл 2 %-го раствора прокаина или 5–7 мл 1,5 %-го раствора новокаина.

Устройство для извлечения эмбрионов и систему трубок промывают физраствором. При помощи стилета под контролем руки вводят катетер в наружное отверстие шейки матки. Поворачивая шейку матки в разные стороны, надевают ее на устройство. Затем направляют устройство в один из рогов матки на безопасное расстояние во избежание прокола стенки рога матки. Стилет извлекают на 3–4 см и одновременно или последовательно продвигают устройство до такого положения, когда баллон окажется в роге матки непосредственно за бифуркацией. Вводят в баллон 15–20 мл воздуха или жидкости и таким образом фиксируют устройство. При работе с устройствами Шуги или Боутерса после наполнения баллона продвигают внутреннюю трубку до верхушки рога. При использовании безманжетного катетера первое пуговчатое утолщение входит в канал шейки матки за один из выступов, тем самым фиксируя устройство и герметизируя канал шейки матки, а второе упирается в каудальную ее часть. Конец устройства должен находиться вблизи верхушки рога матки. В таком положении устройство дополнительно удерживают за жесткую трубку, затем подключают систему для промывания. Далее через стенку прямой кишки прижимают рог матки так, чтобы все отверстия катетера находились в полости рога, ограниченной местом сжатия, и вводят 20–40 мл физиологической среды под умеренным давлением. С целью лучшего смывания эмбрионов рог матки массируют и покачивают из стороны в сторону. Первые 10–20 мл смыва собирают в отдельную посуду, так как имеющаяся в них слизь и клетки крови мешают обнаружению эмбрионов. Промывают рог матки 5–8 раз. В качестве промывной среды используют фосфатный буфер Дюльбекко (PBS) с 1 %-й эмбриональной сывороткой или ТСМ 199 при температуре 37,5–38 °С. Основную часть эмбрионов извлекают в первых трех-четырех смывах, и лишь единичные эмбрионы могут обнаруживаться в последующих смывах.

17