1. Гликолиз — это ферментативный процесс расщепления глюкозы:

1) аэробного апотомического

2) анаэробного апотомического

3) аэробного дихотомического

4) анаэробного дихотомическог

2. Приведите пример реакции субстратного фосфорилирования

в процессе гликолиза.

Биологическая роль пировиноградной кислоты Пировиноградная кислота (ПВК) образуется в организме при метаболических превращениях углеводов, белков и липидов. Она образуется в тканях в процессе окисления глюкозы, распада гликогена, окисления глицерина, ряда аминокислот и молочной кислоты.

ПВК является ключевым метаболитом анаэробного и аэробного окисления глюкозы. В процессе гликолиза ПВК восстанавливается до молочной кислоты - конечного продукта анаэробного обмена; в аэробных условиях ПВК подвергается окислительному декарбоксилированию с образованием ацетил-коА, который подвергается дальнейшему окислению в цикле трикарбоновых кислот или используется для синтеза липидов и аминокислот. ПВК является основным субстратом глюконеогенеза.

Значение определения концентрации ПВК в крови и моче в санитарно-химических и клинических исследованиях.

Повышение концентрации ПВК в крови и моче наблюдается при гиповитаминозе В₁, при воздействии на организм промышленных ядов, блокирующих SH-группы тиоловых ферментов, паренхиматозных заболеваниях печени, тяжелой сердечной недостаточности, гипоксических состояниях, острых инфекционных заболеваниях, инсулинзависимом сахарном диабете, диабетическом кетоацидозе, гепато-церебральной дистрофии, акродинии, мышечной дистрофии и др. заболеваниях. Наиболее резкое повышение ПВК в крови отмечается при интенсивной мышечной работе и гиповитаминозе В₁.

Одной из причин накопления ПВК является торможение процесса ее окислительного декарбоксилирования в митохондриях клеток.

Витамин В₁ входит в состав кофермента тиаминдифосфата, который является простетической группой первого фермента пируватдегидрогеназной системы – пируватдегидрогеназы. При недостаточности этого витамина, а также при нарушении его обмена наблюдается снижение интенсивности окислительного декарбоксилирования ПВК. Введение пациенту препарата витамина В₁или тиаминдифосфата с фармакопейным названием кокарбокси-

лаза – наоборот, стимулирует процесс аэробного метаболизма пиру-

вата и повышает энергообеспечение клеток.

В состав пируватдегидрогеназной системы входят тиоловые ферменты – дегидрогеназы (пируватдегидрогеназа и дигидролипо-

илдегидрогеназа) и коферменты, содержащие SH-группы (липоевая кислота и HS-коА), поэтому пируватдегидрогеназная система блоки-

руется тиоловыми ядами: солями тяжелых металлов, окислителями, алкилирующими агентами.

Пируватдегидрогеназная система работает только в аэробных условиях, поэтому ПВК накапливается в тканях и при гипоксии.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПВК

Существуют несколько методов количественного определения пировиноградной кислоты в тканях и биологических жидкостях.

1. Определение ПВК в крови колориметрическим методом.

Принцип метода см. в разделе «Лабораторная работа».

При анализе используют 0,2 мл крови из пальца.

Нормальные значения: 0,03 – 0,10 ммоль/л.

2. Энзиматический метод определения ПВК в крови (и в тканях экспериментальных животных).

Принцип метода. В присутствии фермента лактатдегидрогеназы пируват восстанавливается до лактата в реакции:

СOO^- COO^-

С=О + НАДН + Н^{+ à} CH-ОН + HAД⁺

СН₃ CH₃

пируват лактат

Количество используемого в реакции пирувата эквивалентно количеству восстановленного кофермента НАДН + Н⁺ , убыль которого регистрируют спектрофотометрически при длине волны l=340 нм.

В клинике для анализа используют 1 мл венозной крови.

Нормальные значения: 0.05-0.114 ммоль/л

Лабораторная работа № 8