диссертации / 64

151

4.3 Морфология эритроцитов и физико-химические свойства эритроцитарных мембран у новорожденных с синдромом полиорганной недостаточности

4.3.1 Анализ морфологии эритроцитов у новорожденных с синдромом полиорганной недостаточности с использованием световой и атомно-силовой микроскопии

Исследование морфологии эритроцитов с использованием световой микроскопии проведено у 108 новорожденных с СПОН. Световая иммерсионная микроскопия окрашенных по Романовскому-Гимза мазков периферической крови на 7-е и 28-е сутки жизни проведена у 87 выживших новорожденных, в том числе у 43 новорожденных в группе №1, у 44 новорожденных в группе №2. В группе №3 (новорожденные с летальным исходом) у 21 новорожденного анализ морфологии эритроцитов проведен на 7-е сутки, у 8 новорожденных из группы №3 анализ морфологии эритроцитов проведен на 28-е сутки жизни. Новорожденные в группах сопоставимы по полу (р7=0,9, р28=0,7), гестационному возрасту (р7=0,8,

р28=0,6). Атомно-силовая микроскопия эритроцитов проведена на 7-е сутки жизни у 40 новорожденных, в том числе у 12 новорожденных группы №1, у 18 новорожденных в группе №2, у 10 новорожденных в группе №3, новорожденные в группах сопоставимы по полу (р=0,2), гестационному возрасту (р=0,9). Рассчитан индекс трансформации (ИТ) эритроцитов (отношение количества эритроцитов аномальной формы к количеству дискоцитов), и коэффициент сферичности (K)

эритроцитов (отношение толщины эритроцита в центре к толщине эритроцита на половине радиуса), количественно характеризующие интегральную способность эритроцитов к выполнению ими газотранспортной функции.

На рис. 2-4 представлены микрофотографии мазков периферической крови новорожденных с СПОН на 7-е сутки жизни.

152

Рисунок 2

Микрофотография мазка периферической крови новорожденного Н.,

7-е сутки жизни, гестационный возраст 34 недели, группа №2.

×1000 МИ, окраска по Романовскому-Гимзе. Показаны кодоциты, дакриоцит, дегмациты, шизоцит (фрагментированный эритроцит).

Рисунок 3

Микрофотография мазка периферической крови новорожденного К.,

7-е сутки жизни, гестационный возраст 33 недели, группа №2.

×1000 МИ, окраска по Романовскому-Гимзе. Показаны эхиноциты, кодоцит, овалоцит.

153

Рисунок 4 Атомно-силовая микроскопия эритроцитов новорожденного А., 7-е сутки

жизни, гестационный возраст 33 недели, группа №2.

Область сканирования 50х50 мкм

Как показано на рис. 2-4, у новорожденных со СПОН в периферической крови имеют место аномальные формы эритроцитов, выявляющиеся как при световой иммерсионной микроскопии, так и при атомно-силовой микроскопии, позволяющей получить трехмерное изображение эритроцитов. На представленных микрофотографиях видны такие аномальные формы эритроцитов, как эхиноциты (эритроциты, имеющие шиповидные выросты на мембране, кодоциты (мишеневидные эритроциты), дакриоциты (эритроциты в форме слезы), овалоциты (эритроциты вытянутой формы), дегмациты (эритроциты в виде шлема), шизоциты (фрагментированные эритроциты).

Следует отметить, что в целом для новорожденных характерно присутствие в мазках периферической крови эритроцитов аномальной формы (пикноцитов). Количество пикноцитов у здоровых новорожденных в первые недели жизни составляет 0,3%-1,9%, а у недоношенных новорожденных составляет 5,6%

154

[Льюис С.М., Бэйн Б., Бэйтс И., 2009].

Процентное соотношение дискоцитов и эритроцитов аномальной формы — эхиноцитов, сфероцитов, кодоцитов, стоматоцитов, овалоцитов, дакриоцитов, дегмацитов, шизоцитов (фрагментированных эритроцитов), других форм эритроцитов на 7-е сутки жизни у обследованных новорожденных представлены в табл. 18.

Таблица 18 Соотношение дискоцитов и эритроцитов с измененной формой, индекс

трансформации и коэффициент сферичности эритроцитов в группах обследованных новорожденных на 7-е сутки жизни

Как показано в табл. 18, на 7-е сутки жизни в группах новорожденных имеют место статистически значимые различия по количеству дискоцитов, эхиноцитов, кодоцитов, стоматоцитов, дакриоцитов, шизоцитов (фрагментированных эритроцитов), других форм эритроцитов, индексу трансформации и коэффициенту сферичности эритроцитов. Наиболее часто встречающимися аномалиями формы эритроцитов у новорожденных со СПОН были эхиноциты, овалоциты, сфероциты, шизоциты (фрагментированные эритроциты). При попарном сравнении групп по количеству дискоцитов получены

155

статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по количеству дискоцитов не получено (р=0,4). При попарном сравнении групп по количеству эхиноцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р=0,009), между группой №1 и группой №3 (р=0,03), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по количеству эхиноциов не получено (р=0,9). При попарном сравнении групп по количеству кодоцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по количеству кодоцитов не получено (р=0,3). При попарном сравнении групп по количеству стоматоцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р=0,005), между группой №1 и группой №3 (р=0,04), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по количеству стоматоцитов не получено (р=0,7). При попарном сравнении групп по количеству дакриоцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по количеству дакриоцитов не получено (р=0,6). При попарном сравнении групп по количеству шизоцитов (фрагментированных эритроцитов) получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по количеству шизоцитов не получено (р=0,1). При попарном сравнении групп по количеству других форм эритроцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р=0,008), статистически значимых различий по количеству других форм эритроцитов между группой №1 и группой №3 (р=0,3), между группой №2 и группой №3 (р=0,3) не получено. При попарном сравнении групп по индексу трансформации (ИТ) эритроцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3

156

(р<0,001), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по индексу трансформации эритроцитов не получено (р=0,4). При попарном сравнении групп по коэффициенту сферичности (К) эритроцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р=0,02), между группой №1 и группой №3 (р=0,004), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по коэффициенту сферичности эритроцитов не получено (р=0,5). Как было показано выше, индекс трансформации и коэффициент сферичности эритроцитов являются интегральными показателями, характеризующими газотранспортную функцию эритроцитов [В.А. Лисовский и др., 1986; В.В. Новицкий и др., 2008]. Увеличение индекса трансформации эритроцитов свидетельствует об увеличении в периферической крови эритроцитов

саномальной формой, увеличение коэффициента сферичности эритроцитов свидетельствует о приближении формы эритроцитов к сферической. Эритроциты

саномальной формой в меньшей степени способны к деформируемости и к адекватному газообмену [Зинчук, В.В., 2001]. В группе новорожденных с умеренными проявлениями СПОН (группа №1) количество эритроцитов с аномальной формой в целом, индекс трансформации эритроцитов и коэффициент сферичности эритроцитов ниже, чем у новорожденных с тяжелыми проявлениями СПОН (группа №2 и группа №3), то есть у новорожденных с тяжелыми проявлениями СПОН нарушение газотранспортной функции эритроцитов на 7-е

сутки жизни выражено в большей степени, чем у новорожденных с умеренными проявлениями СПОН. На наличие тканевой гипоксии, связанной с нарушением газотранспортной функции эритроцитов указывает увеличение уровня лактата у новорожденных с тяжелыми проявлениями СПОН. В группе новорожденных с умеренными проявлениями СПОН (группа №1) уровень лактата на 7-е сутки жизни составил 1,6 (1,1-2,5) ммоль/л, а у новорожденных с тяжелыми проявлениями СПОН (группа №2 и группа №3) уровень лактата на 7-е сутки жизни составил 2,8 (1,9-4,3) ммоль/л (р<0,001). На взаимосвязь функционального состояния эритроцитов и тяжести СПОН у новорожденных также указывает выявленная статистически значимая (р<0,001) положительная корреляционная

157

взаимосвязь максимальной оценки по шкале NEOMOD в раннем неонатальном периоде и индексом трансформации эритроцитов на 7-е сутки жизни, (коэффициент Спирмена 0,5), и статистически значимая (р=0,01) корреляционная взаимосвязь коэффициента сферичности эритроцитов на 7-е сутки жизни с максимальной оценкой по шкале NEOMOD в раннем неонатальном периоде (коэффициент Спирмена 0,4).

Процентное соотношение дискоцитов, дегмацитов, дакриоцитов, кодоцитов, овалоцитов, стоматоцитов, сфероцитов, эхиноцитов, шизоцитов (фрагментированных эритроцитов), других форм эритроцитов на 28-е сутки жизни в группах обследованных новорожденных представлены в табл. 19.

Таблица 19 Соотношение дискоцитов и эритроцитов с измененной формой, индекс

трансформации эритроцитов в группах обследованных новорожденных на 28-е

сутки жизни

Из табл. 19 видно, что на 28-е сутки жизни у обследованных новорожденных с СПОН в зависимости от тяжести состояния и исхода имеют место статистически значимые различия по количеству дискоцитов, эритроцитов с различными аномалиями формы и по индексу трансформации эритроцитов.

158

При попарном сравнении групп по количеству дискоцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 (р<0,001).

При попарном сравнении групп по количеству эхиноцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по количеству эхиноцитов не получено (р=0,4).

При попарном сравнении групп по количеству сфероцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 (р=0,02).

При попарном сравнении групп по количеству кодоцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 (р<0,001), между группой №1 и группой №2 статистически значимых различий по количеству кодоцитов не получено (р=0,7).

При попарном сравнении групп по количеству стоматоцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №3 (р=0,001), между группой №2 и группой №3 (р=0,001), между группой №1 и группой №2 статистически значимых различий по количеству стоматоцитов не получено (р=0,2).

При попарном сравнении групп по количеству овалоцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р=0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 статистически значимых различий по количеству овалоцитов не получено (р=0,1).

При попарном сравнении групп по количеству дегмацитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №3 (р=0,001), между группой №2 и группой №3 (р=0,004), между группой №1 и группой №2 статистически значимых различий по количеству дегмацитов не получено (р=0,9).

При попарном сравнении групп по количеству дакриоцитов получены

159

статистически значимые различия между группой №1 и группой №3 (р=0,006), между группой №1 и группой №2 (р=0,3), и между группой №2 и группой №3 (р=0,1) статистически значимых различий по количеству дакриоцитов не получено.

При попарном сравнении групп по количеству шизоцитов

(фрагментированных эритроцитов) получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 (р<0,001), между группой №1 и группой №2 статистически значимых различий по количеству шизоцитов не получено (р=0,1).

При попарном сравнении групп по количеству других форм эритроцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), статистически значимых различий по количеству других форм эритроцитов между группой №2 и группой №3 (р=0,2) не получено.

При попарном сравнении групп по индексу трансформации (ИТ) эритроцитов получены статистически значимые различия между группой №1 и группой №2 (р<0,001), между группой №1 и группой №3 (р<0,001), между группой №2 и группой №3 (р<0,001).

Таким образом, в целом, количество эритроцитов аномальной формы на 28-е

сутки жизни было наименьшим у новорожденных с умеренными проявлениями СПОН, самое высокое количество эритроцитов с аномальной формой на 28 сутки жизни имело место у новорожденных с летальным исходом. У выживших новорожденных с тяжелыми проявлениями СПОН количество эритроцитов с аномалиями формы и индекс трансформации эритроцитов был выше, чем у новорожденных с умеренными проявлениями СПОН.

Показатели количества дискоцитов, эритроцитов с аномалиями формы и индекса трансформации эритроцитов на 7-е и 28-е сутки жизни и значения показателей статистической значимости динамических изменений данных показателей в группах новорожденных в неонатальном периоде представлены в табл. 20, нижними индексами у р показаны этапы исследования (сутки жизни).

160

Таблица 20 Показатели количества дискоцитов, эритроцитов с аномалиями формы и индекса

трансформации эритроцитов на 7-е и 28-е сутки жизни и значения показателей статистической значимости динамических изменений данных показателей в группах новорожденных в неонатальном периоде