Стерилизация стеклянной посуды и инструментов

Перед стерилизацией посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки на каждый сосуд надевают бумажный колпачок. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 2–4 шт.

Для стерилизации пипеток в верхнюю часть каждой вкладывают кусочек ваты и затем заворачивают их в плотную, предварительно нарезанную полосками бумагу шириной 2–2,5 см и длиной 50–70 см, на которой пишут объем завернутой пипетки. Пипетки можно стерилизовать в специальных пеналах.

Существует несколько видов стерилизации.

Стерилизация кипячением – наиболее простой и доступный способ. Режим стерилизации: температура 100 С, время – 40 мин.

Стерилизация текучим паром производится в текучепаровом аппарате Коха, представляющем собой полый металлический цилиндр с двойным дном (это пространство заполнено водой) и крышкой конической формы. Стерилизуемый материал загружают в камеру аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего контакта его с паром. Стерилизацию текучим паром проводят несколько раз, так как однократное подогревание до температуры 100 С не обеспечивает полной стерильности. Такая стерилизация называется дробной. Она применяется для сред, разрушающихся при температуре выше 100 С. Обработку стерилизуемого материала текучим паром проводят ежедневно по 30 мин в течение 3 дней.

Стерилизация горячим воздухом (сухим жаром) является основным способом стерилизации стеклянной посуды. Она осуществляется в сушильных шкафах при температуре 160–175 С в течение 1,5–2 ч. При этом погибают и вегетативные клетки и споры микроорганизмов. Сушильные шкафы изготовляются из термостойких мате-риалов (обычно из металла и асбеста). Внутри шкафа имеются полки, а наверху – отверстие, в котором укрепляют термометр. Здесь же есть отверстие для вентиляции, которое при стерилизации закрывают. Поддержание необходимой температуры обеспечивается терморегулятором.

Стерилизацию посуды и инструментов можно также проводить в автоклавах. Мелкие металлические инструменты (петли, иглы, ножницы) стерилизуют прокаливанием в пламени непосредственно перед использованием. Изделия из резины (резиновые пробки, перчатки, шланги) стерилизуют автоклавированием. Предметы, изготовленные из термостабильных пластмасс, например, центрифужные пробирки, стерилизуют УФ-лучами, окисью этилена.

Условия культивирования микроорганизмов

Как уже отмечалось, при приготовлении сред нужно учитывать требования микроорганизмов к кислотности среды. Кроме того, при культивировании микроорганизмов следует учитывать отношение микроорганизмов к температуре (большинство микроорганизмов хорошо развивается при температуре 25–37 С) и свету (большей части микроорганизмов свет не нужен). Микроорганизмы, использующие в процессах обмена солнечную энергию (т. е. фототрофные), выращиваются при освещении.

Важно также учитывать потребности микроорганизмов в свободном кислороде. Различные потребности микроорганизмов в свободном кислороде определяют разные способы их культивирования.

Культивирование аэробных микроорганизмов

Поверхностное культивирование на плотных и жидких питательных средах. В данном случае микроорганизмы развиваются на поверхности питательной среды и получают кислород непосредственно из воздуха. Поэтому при поверхностном культивировании необходимо увеличить площадь соприкосновения среды с воздухом (среда тонким слоем наливается в посуду с плоским дном, например, в чашки Петри). При поверхностном культивировании на жидких средах аэробные микроорганизмы растут в виде плотных пленок. Посев на твердую питательную среду производится с помощью бактериологической петли (методом штриха), или шпателя (на поверхность среды пипеткой вносят каплю посевного материала и растирают его стерильным шпателем на этой поверхности). Посев на жидкую питательную среду осуществляется с помощью пипетки или бактериологической петли.

Глубокое культивирование в жидких средах. При использовании глубинного способа культивирования аэробных микроорганизмов интенсивность роста культуры определяется интенсивностью доставки кислорода к клеткам. Наиболее простой способ глубинного культивирования аэробов – выращивание их на качалках, встряхивающих колбы. В промышленной микробиологии широко применяется глубинное культивирование аэробных микроорганизмов с продуванием стерильного воздуха через культуральную жидкость.