Нормы содержания посторонних микроорганизмов в 1 г различных образцов дрожжей

Микроорганизмы мелассы	Чистые культуры (ЧК)	Естественно чистые культуры (ЕЧК)	Товарные дрожжи (Т)
Молочнокислые	До 1 млн	До 10 млн	До 100 млн
Лейконосток	0	0	До 1 млн
Кишечная палочка	0	0	0
Гнилостные бактерии	До 500	До 1000	До 5000
Посторонние дрожжи, %	0	0,001	До 10

Гнилостные бактерии образуют колонии с зоной просветления молочного агара через 24–72 ч роста. Поскольку в зависимости от протеолитической активности разные виды этих бактерий образуют зоны в разный срок, просмотр посевов проводят регулярно по два раза в сутки, начиная с суточной инкубации в термостате.

Подсчет количества молочнокислых бактерий на сусло-агаре с мелом проводят на 3–5 сут роста.

Подсчет общего количества всех дрожжей проводят через 48 ч. «Дикие» дрожжи учитывают отдельно по количеству колоний, выросших на синтетической среде с лизином. На этой среде колонии культурных дрожжей не образуются. Колонии дрожжей подсчитывают через 48–72 ч.

Пример расчета.

В чашке Петри выросло 50 колоний молочнокислых бактерий, посев на эту чашку сделан из разведения дрожжей в 100 тыс. раз, значит, число бактерий в 1г дрожжей составляет: 50 · 100 000 = 5 млн клеток.

Микробиологический контроль мелассы и мелассного сусла

Меласса является первоисточником попадания на производство основных вредителей. Поэтому необходимо высевать пробы мелассы, непосредственно перерабатываемой на производстве, а также из всех ее хранилищ. Посев производят в те же среды, которые используют при анализе дрожжей.

Предварительно готовят необходимую стерильную посуду: один стеклянный стаканчик с бумажным колпачком, две пипетки на 1 или 2 мл, водопроводную воду: 90 мл в колбе и 9 мл – в пробирке.

Непосредственно перед посевом из отобранной пробы взвешивают 10 г мелассы в стеклянный стаканчик. Далее мелассу разводят стерильной водой из колбы с помощью стерильной стеклянной палочки (разведение 1:10). Затем 1 мл тщательно перемешанного раствора переводят в пробирку с 9 мл воды (разведение 1:100). Посев в чашки Петри производят дважды из обоих разведений. Для каждого разведения следует пользоваться отдельной стерильной пипеткой. Просмотр и подсчет выросших микроорганизмов осуществляют, как описано выше.

Можно считать мелассу хорошей, если она содержит в 1 г до 2000 клеток и нет преобладания отдельных видов микроорганизмов. В плохой мелассе количество микроорганизмов превышает 10 000 клеток в 1 г и преобладают их отдельные виды. Особенно опасен лейконосток.

Техника посева мелассного сусла аналогична применяемой при анализе дрожжей и мелассы.

Питательные среды и растворы

1. Сусло-агар. К солодовому суслу с содержанием 8 % СВ добавляют 2 % агара и нагревают до кипения. Среду разливают в пробирки по 5 и 10 мл и стерилизуют при избыточном давлении 0,5 атм в течение 20 мин.

2. Дрожжевой агар. К дрожжевой воде добавляют 4 % сахарозы и 2 % агара. После расплавления агара среду разливают в пробирки по 10 мл и стерилизуют при давлении 0,5 атм в течение 20 мин.

3. Дрожжевая вода. 1 л водопроводной воды и 80 г прессованных дрожжей кипятят в течение 20 мин, фильтруют в горячем виде, стерилизуют при давлении 1 атм в течение 20 мин.

4. Дрожжевой автолизат. 1 кг чистой культуры дрожжей размешивают в 1л водопроводной воды, добавляют 10 мл уксусной кислоты для предотвращения развития бактерий, доводят рН до 5,4–5,0 и помещают в термостат при температуре 45–48 С на 40–48 ч. Фильтруют через складчатый фильтр, разливают в пробирки и стерилизуют при давлении 0,5 атм в течение 30 мин.

5. Синтетическая среда с лизином. В 1 л водопроводной воды растворяют 50 г глюкозы, 5 г лизина, 1 г КН₂РО₄, 1 г МgSO₄, FeSO₄ –следы. Каждый компонент растворяют отдельно и добавляют в указанном порядке. Далее вносят 20 г агара, расплавляют его, разливают в пробирки и стерилизуют при давлении 0,5 атм в течение 20 мин. Отдельно готовят раствор детиобиотина в стерильной воде (50 г в 100 мл). Для растворения детиобиотина в среду на кончике скальпеля вносят питьевую соду. 0,1 мл раствора детиобиотина вносят в чашки Петри перед посевом дрожжей на синтетическую среду с лизином.

6. Синтетическая среда с нитратом. Для определения титра денитрофикации в 1 л водопроводной воды растворяют 20 г глюкозы, 1 г КН₂РО₄, 0,5 г МgSO₄, 10г KNO₃, разливают в пробирки по 10 мл, стерилизуют при давлении 0,5 атм в течение 20 мин.

Задание

1. Определить качество товарных дрожжей по микробиологическим показателям.

2. Оценить обсемененность мелассы.

Контрольные вопросы

1. Задачи микробиологического контроля на дрожжевом производстве.

2. Микрофлора мелассы.

3. Методы выявления отдельных представителей микроорганизмов.

4. Особенности роста отдельных представителей микроорганиз-мов на индикаторных средах.