Хенке_Жидкостная хроматография [2009]

Приложение 241

Высокий выход по массе

Выход – очень важный момент при выборе колонки для биохимических анализов. Применение ультрачистого силикагеля и высокая степень прививки Protein RP приводят к отличному выходу. Это видно из приведенных ниже хроматограмм и таблицы воспроизводимости для Протеинов и Пептидов.

Выход

Колонки YMC Pack Protein RP отличается от обычных бутиловых фаз широ кими порами, и поэтому особенно хорошо подходят для анализа белков. Как вид

но из примеров, приведенных ниже, YMC Pack Protein RP эффективно разделя ет как низко молекулярные соединения, так и протеины с большой молекуляр ной массой. При этом пики имеют хорошую форму.

Протеины

242 Приложение

Протеины и пептиды

1.Met-Enkephalin

2.Leu-Enkephalin

3.Oxytocin

4.Bradykinin

5.Angiotensin I

6.Ribonuclease A

7.α-Mating factor

8.Insulin (bovine)

9.Cytochrome c

10.Lysozyme

11.BSA

12.β-Lactoglobulin

13.Ovalbumin

Колонки для сверхбыстрой хроматографии Ultra Fast LC

•Колонки LC YMC UltraHT обеспечивают значительную экономию времени без необходимости использовать высокое давление

•ЖХ Колонки YMC UltraHT обеспечивают очень высокие скорости разделений даже на обычным ВЭЖХ оборудовани

•Входит в семейство ProFamily, основа ультрачистый силикагель, обеспечива ет прекрасное разрешение для широкого круга аналитов.

•Полная масштабируемость и «вверх» и «вниз».

Приложение 243

В настоящее время, из за постоянно растущих, особенно в фармацевтической промышленности, требований к скорости анализов и проверки качества продукции,

требуются методы быстрой хроматографии с временем анализа две минуты и менее (Ultra Fast LC). Чтобы увеличить скорость, используются короткие колонки с малень ким размером частиц, одновременно увеличивается скорость потока и давление.

Специально для метода Ultra Fast LC YMC представляет стационарную фазу

YMCUltraHT Pro C18 с размером частиц 2 µm, которая идеально подходит для оборудования с сверхвысоким давлением таким как Agilent 1200™ или Waters Acquity UPLC™.

Однако, как старый и хорошо зарекомендовавший себя разработчик и постав щик колонок и сорбентов, компания YMC нашла недопустимым тот факт, что ис пользование новых фаз ограничивается только специализированными системами, и они не работают в стандартных условиях с давлением около 400 бар. По этой причине фаза Pro C18 YMCUltraHT сохраняет мощные свойства быстрой, ультроэффек

тивной фазы в обычном хроматографическом режиме. Поскольку фаза Pro C18

YMC UltraHT требует значительно меньшего давления, чем другие фазы с размером частиц 2 µm или меньше, высокие скорости потока достигаются без чрезмерного дав ления в системе и без необходимости использовать специальное оборудование.

Для эффективного высокопроизводительного разделения YMC предлагает ряд высокоэффективных колонок, на которых возможен ультра быстрый анализ на обычном оборудовании. Благодаря возможности «масштабирования вниз» для большинства стационарных фаз YMC, время, необходимое для анализа может быть

уменьшено до 60 сек и менее, в зависимости от хроматографических условий.

YMC-UltraHT Pro C18, 2 µm, 50 x 2.0 mm i.d.

1. Scopolamine

2. Atropine

3. Cinchonine

4. Quinine

5. Dihydroquinine

244 Приложение

С момента появления семейства стационарных фаз ProFamily фаза YMC Pack Pro C18 продемонстрировала свою уникальные возможности для широкого круга ВЭЖХ задач в фармацевтическом и биотехнологическом и производствах где эф фективность и надежность – главное требование. Все эти качества в полной мере передались новой фазе для быстрого разделения YMC UltraHT Pro C18.

Еще на заре ВЭЖХ существовали аналитические проблемы, требующие уве личения эффективности разделений – сложные аналиты и необходимость сокра тить время анализа, чтобы справиться с растущим числом образцов. Кроме умень

шения размеров колонки и увеличения скорости потока, уменьшение размера

частиц сорбента – мощный инструмент для увеличения эффективности. Известное уравнение Ван Деемтера определяет «Высоту, Эквивалентную Те

оретической тарелке» как функцию линейной скорости u:

H = A + B/u + Cu.

Здесь А, В, С – константы описывающие вклад А – вклад неоднородности по тока подвижной фазы; В/u – вклад слагаемых диффузного характера; Сu – вклад кинетики массообмена.

Кривые Ван Деемтера демонстрируют уменьшение H когда используется сор бент с меньшим размером частиц, чем YMC Pack Pro C18, при одновременном сдвиге минимальной скорости в большую сторону.

Кривые Ван-Деемтера

Результаты исследования зависимости числа теоретических тарелок от размера частиц

Уменьшение размера частиц от 5 µm и 3 µm до 2 µm позволяет уменьшить длину колонки почти в три раза без уменьшения эффективности. Это обеспечивает уменьшение времени разделения и снижение количества элюента.

Стандартная ЖХ

Быстрая хроматография (Ultra Fast LC Method)

246 Приложение

Стандартная ЖХ

1. Scopolamine

Быстрая хроматография (Ultra Fast LC Method)

1.Scopolamine

2.Atropine

3.Cinchonine

4.Quinine

5.Dihydroquinine

Приложение 247

Применение ВЭЖХ к биологическим разделениям – важнейшая и быстро раз вивающаяся область. YMC UltraHT Pro C18 имеет выдающиеся хроматографи

ческие свойства, которые позволяют использовать ее в решении сложной про блемы пептидного картирования.

Для быстрой хроматографии, использующей частицы уменьшенного разме ра, очень важно найти оптимальное соотношение между размером частиц и вы соким обратным давлением. Используемая YMC тех нология позволяет производить силикагель сфери

ческой формы с очень узким разбросом по размеру, что приводит к понижению обратного давления. Ко лонки YMC UltraHT Pro C18 на основе этого силика геля демонстрируют выдающуюся эффективность для

быстрой жидкостной хроматографии без экстремаль

но высокого давления, которое необходимо для ра боты с фазами других производителей с размером частиц 2 мm и менее. Поэтому для работы с C18 YMC UltraHT нет необходимости в использовании специ альных систем.

248 Приложение

Появление YMC Pack Pro C18 2 µm позволяет легко масштабировать методы, разработанные для YMC Pack Pro C18 3 µm and 5 µm.

Давление в колонках

Приложение 249

Патентованные технологии энд кэппинга и химической прививки обеспечи вают выдающуюся эффективность вместе с отличной формой пика.

Форма Пика

Сульфаниламиды

Кроме уникальной по своим характеристикам YMC UltraHT, быстрые хрома

тографические разделения могут успешно выполняться на колонках YMC 3 мm.

Эти колонки сохраняют улучшенную селективность, максимальное разрешение и прекрасную форму, характерные для колонок YMC, что позволяет хроматогра фистам решать задачи быстрого определения состава образцов. YMC Fast LC ко лонки выпускаются длиной 10, 20 или 33 мм и 2.1, 3.0, и 4.0 ID. Примеры быстрых разделений на таких колонках приведены ниже:

250 Приложение

Ароматические кетоны

Полярные и неполярные соединения

1.8-Bromoguanosine

2.Acetanilide

3.Triamcinolone

4.Hydrocortisone

5.2-Amino-7-chloro-5- oxo-5H-[1] benzopyrano- [2,3-b] pyridine-

3 carbonitrile

6.6a-Methyl-17ahydroxy- progestrone

7.3-Aminofluoranthene

8.2-Bromofluorene

9.Perylene

10.Naphtho(2,3-a)pyrene