Лабораторная работа Цветные реакции на белки и аминокислоты.

Белки - полимерные соединения, построенные из аминокислот, которые соединены между собой пептидными связями.Аминокислоты – это производные карбоновых кислот, у которых три валентности a – углеродного атома всегда заняты одним атомом водорода (-Н), аминогруппой (-NН₂) и карбоксильной группой (-СООН).

Четвёртая валентность может быть занята атомом водорода (глицин) или группировкой атомов, называемой радикалом (-R).

В составе радикалов многие аминокислоты имеют реакционно-способные (функциональные) группы, например сульфгидрильную –SH (цистеин), тиометильную –S- СН₃ (метионин), гидроксильную –ОН (серин, треонин, тирозин).

Цель работы - провести цветные реакции с двумя растворами (I и II), один из которых содержит овальбумин (яичный белок), а другой желатину (овальбумин содержит все 20 аминокислот, а желатина только 17), и определить, в каком растворе овальбумин, а в каком – желатина.

Принцип метода. Ряд химических реактивов специфически взаимодействуют с функциональными группами аминокислот (как свободных, так и в составе пептидов или белков), в результате чего развивается специфическое окрашивание. Такие реакции называют цветными реакциями. Интенсивность окраски в цветных реакциях пропорциональна количеству реагирующих функциональных групп. Поэтому цветные реакции могут быть использованы для качественного и количественного определения белков, для определения присутствующих в них аминокислот или для анализа состава белков.

Например:

- с помощью биуретовой реакции определяют наличие пептидных групп в олигопептидах и в белках (универсальная реакция для любых белков);

- с помощью нингидриновой реакции определяют наличие a-аминогруппв свободных аминокислотах, а также в аминокислотах олигопептидов и белков (универсальная реакция для любых белков);

- с помощью ксантопротеиновой реакции определяют наличие в белках ароматических аминокислот;

- с помощью реакции Фоля определяют наличие аминокислоты - цистеина.

Ход определения

Реакция	Номер пробирки	Ход работы	Окраска	Чем обусловлена
Биуретовая	1	Раствор I - 5капель, 10%-ный раствор NaOH - 5 капель,1%-ный раствор СuSО4 - 1 капля
	2	Раствор II - 5капель, 10%-ный раствор NaOH - 5 капель,1%-ный раствор СuSО4 - 1 капля
Нингидриновая	1	Раствор I - 5капель, 1%-ный раствор нингидрина в ацетоне- 2 капли; нагревают
	2	Раствор II - 5капель, 1%-ный раствор нингидрина в ацетоне- 2 капли; нагревают
Ксантопротеиновая	1	Раствор I - 5капель, HNO3(конц.)- 3 капли ; осторожно нагревают
	2	Раствор II - 5капель, HNO3(конц.)- 3 капли ; осторожно нагревают
Фоля	1	Раствор I - 5капель, , 30%-ный раствор NaOH - 5 капель,5%-ный раствор(СН3СОО)2Рb-1 капля; нагревают до кипения
	2	Раствор II - 5капель, 30%-ный раствор NaOH - 5 капель,5%-ный раствор (СН3СОО)2Рb-1 капля; нагревают до кипения

Реакция

Номер пробир-ки

Ход работы

Окраска

Чем обуслов-лена