Лабораторная работа Определение содержания бета- и пре-бета-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом по Бурштейну и Самай

Принцип метода. Метод основан на способности гепарина образовывать с бета- и пре-бета-липопротеинами сыворотки крови комплекс, который под действием хлорида кальция выпадает в осадок. Степень помутнения раствора пропорциональна содержанию этих липопротеинов в сыворотке крови.

Ход определения. В контрольную и опытную кюветы КФК с толщиной слоя 0,5 см наливают по 2 мл хлорида кальция. Устанавливают шкалу прибора на нулевую отметку при 720 нм (красный светофильтр). В опытную кювету приливают микропипеткой 0,2 мл сыворотки, несколько раз промывая пипетку. Отмечают исходное значение экстинкции (Е₁). Затем добавляют микропипеткой 0,04 мл гепарина, несколько раз промывая ее, и перемешивают содержимое кюветы. Ровно через 4 минуты (по секундомеру) вновь измеряют экстинцию (Е₂).

Расчет. Содержание бета- и пре-бета-липопротеинов х (г/л) в сыворотке крови определяют по формуле:

х = (Е₁-Е₂) *11,65,

где 11,65-эмпирический коэффициент пересчета содержания бета- и пре-бета-липопротеинов на г/л.

Оформление работы. По полученным значениям экстинкции рассчитать содержание определяемых липопротеинов в сыворотке крови и сделать вывод о возможных их изменениях.

Практическое значение работы. В норме содержание бета- и пре-бета-липопротеинов в сыворотке крови составляет 3,6-6,5 г/л. Наиболее часто наблюдается увеличение содержания бета-липопротеинов в сыворотке крови. Оно тесно связано с повышением содержания холестерина в крови, так как им наиболее богаты бета-липопротеины. Повышение бета- и пре-бета-липопротеинов имеет место при заболеваниях, связанных с нарушением липидного обмена (атеросклероз, сахарный диабет и др.). Уровень их изменяется при нарушении функции печени (гепатиты).

Тема 3.2. Синтез жирных кислот и триацилглицеролов. План изучения темы

1. Синтез жирных кислот (исходные метаболиты, ферменты, затраты энергии, локализация в клетке).

2. Синтез триацилглицеролов в печени.

3. Синтез триацилглицеролов в жировой ткани.

Вопросы для самоконтроля.

1. Что является исходным продуктом для синтеза жирных кислот? Где в клетке происходит этот процесс?

2. Как ацетил-КоА транспортируется из митохондрий в цитоплазму?

3. Укажите особенности структуры пальмитатсинтазы.

4. Напишите процесс синтеза малонил-КоА, назовите фермент и кофермент.

5. Напишите процесс биосинтеза пальмитиновой кислоты до образования бутирил-КоА.

6. Укажите особенности структуры ацилпереносящего белка.

7. Какие этапы биосинтеза жирных кислот катализируют ферменты, относящиеся к классу оксидоредуктаз?

8. Назовите соединения, являющиеся источником водорода для синтеза жирных кислот.

9. Напишите процесс биосинтеза триацилглицеролов в печени.

10. Особенности синтеза триацилглицеролов в жировой ткани.

11. Где в клетке происходит синтез триацилглицеролов.

12. Назовите транспортные формы экзогенных и эндогенных триглицерилов. Каков их состав, место синтеза?

13. Какое влияние оказывает окисление углеводов на биосинтез жирных кислот и ТАГ?

14. Известно выражение – «жиры сгорают в пламени углеводов». Какова его молекулярная основа?

15. Нарисуйте схему иллюстрирующую взаимосвязь между обменом липидов и метаболизмом глюкозы в жировой ткани.