1. Общие сведения.

Количественное определение натрия уксуснокислого 3-водного (в дальнейшем натрия уксуснокислого) в лекарственном препарате «Ацесоль, раствор для инфузий» осуществляется прямым методом кислотно-основного титрования в присутствии индикатора бромфенолового синего, который меняет окраску раствора с синей (в щелочной среде) на желтую (кислая среда).

Титриметрия или титриметрические методы количественного анализа основаны на точном измерении объема раствора реактива, израсходованного на реакцию с определяемым веществом. Раствор реактива (титрант, рабочий раствор) должен при этом иметь точную концентрацию, обеспеченную условиями приготовления раствора (рабочий раствор с приготовленным титром) или установленную по другому раствору с точно известной концентрацией (рабочий раствор с установленным титром).

Титр – способ выражения концентрации раствора, определивший название метода, и показывающий массу растворенного вещества в граммах в 1 см³ (или 1 мл) раствора. При титровании наступает момент, когда рабочий раствор и определяемое вещество прореагируют между собой в эквивалентных количествах, т.е. в строгом соответствии со стехиометрией реакции. В таком случае справедлив закон эквивалентов, составляющий основу расчетов в титриметрии.

При титровании важно зафиксировать конец реакции, называемый точкой стехиометричности или точкой эквивалентности (ТЭ). ТЭ – момент титрования, когда достигнуто эквивалентное соотношение реагирующих веществ.

Для экспериментального установления конечной точки титрования (КТТ), по возможности наиболее близкой к теоретической ТЭ, используют изменение окраски индикатора или какого-либо физического свойства раствора.

Индикаторы – это вещества, которые изменяют свое строение и физические свойства при изменении среды. В области точки эквивалентности индикатор изменяет свой цвет, образует осадок или вызывает какой-то другой наблюдаемый эффект.

Титриметрические методы характеризуются быстротой анализа, простотой оборудования, возможностью автоматизации определения. Чувствительность индикаторных методов титриметрии составляет 10^-3−10^-4 моль/л, относительная погрешность более 0,1 %.

Методы титриметрического анализа классифицируют по характеру химической реакции, лежащей в основе определения веществ, и по способу титрования.

По характеру реакции выделяют следующие основные методы: кислотно-основного титрования (нейтрализации), осаждения, комплексообразования, окисления-восстановления.

Метод кислотно-основного титрования (нейтрализации) основан на реакции взаимодействия кислот и оснований.

В методе осаждения определение вещества основано на осаждении того или иного иона в виде малорастворимого соединения.

Метод комплексообразования основан на реакции образования комплексных ионов.

Метод окисления-восстановления (редоксиметрия) основан на использовании реакций окисления-восстановления.

По способу титрования различают следующие методы.

Метод прямого титрования основан на том, что пробу анализируемого вещества титруют стандартным раствором до точки эквивалентности.

Метод замещения (титрование по замещению) применяют тогда, когда непосредственное определение вещества затруднено (допустим при работе с неустойчивыми веществами). В этом случае анализируемое вещество посредством реакции с неопределенным избытком соответствующего реагента переводят в другое соединение, которое и титруют стандартным раствором.

Метод обратного титрования (титрование по остатку) применяют, когда определяемое вещество не реагирует со стандартным раствором или реагирует недостаточно быстро. В этом случае к пробе анализируемого вещества прибавляют заведомый избыток стандартного раствора и остаток его после реакции с определяемым веществом титруют другим раствором.

В фармакопейном анализе титриметрические методы используют только для аналитических методик количественного определения исключительно в синтетических химико-фармацевтических субстанциях и лекарственных препаратах из них. Особенности валидации титриметрических методов состоят в следующем [22].

Специфичность титриметрической методики считается доказанной, если ни растворитель, используемый при пробоподготовке, ни реактивы, ни компоненты плацебо (смесь всех ингредиентов без фармацевтической субстанции) не искажают результат.

Специфичность методики показывается путем сравнения количества израсходованного титрованного раствора при титровании:

– плацебо;

– действующего вещества;

– лекарственного препарата.

Если при титровании плацебо отмечается расход титранта, то должно быть проведено титрование с используемыми при пробоподготовке растворителями, реактивами и т.д. Найденная причина расхода титранта (например, растворитель) затем используется для определения контрольного значения (холостой опыт), которое учитывается при расчете.

Линейность аналитической методики доказана если в выбранном диапазоне применения можно показать прямо пропорциональное соотношение между концентрацией исследуемого вещества и расходом титранта. Линейность доказывается на не менее 5 разных разведениях исследуемого раствора в диапазоне применения методики. Валидация проводится с непосредственным использованием чистой субстанции или приготовлением модельных смесей с последующим проведением пробоподготовки и определением.

Правильность аналитической методики количественного определения доказывается на всем диапазоне применения. Правильность показывается одним из следующих методов: метод плацебо или метод добавок.

В методе плацебо определяется отклик действующего вещества в плацебо. Концентрация плацебо составляет 100 % навески, указанной в методике контроля. Действующее вещество добавляется в модельную смесь в соответсвии с требуемым уровнем концентрации (нижняя граница – макс. 80, 100 %; верхняя граница – мин.120 %).

В методе добавок отклик определяется путем добавления действующего вещества к исследуемому образцу с известной концентрацией субстанции.

Для определения правильности при обоих методах проводится как минимум 9 испытаний с не менее 3 концентрациями в определенном диапазоне применения методики (например, 3 концентрации с 3-кратным определением для каждой концентрации с выполнением всех стадий аналитической методики).

Сходимость должна показывать, что методика титриметрического определения при проведении в одинаковых условиях обеспечивает получение сравнимых результатов.

Сходимость может быть показана при помощи испытаний:

– не менее 6 подготовленных проб при 100 % концентрации действующего вещества в исследуемом растворе;

– не менее 9 подготовленных проб внутри диапазона применения методики (например, 3 концентрации, три повтора).

С помощью промежуточной прецизионности должно быть показано, что аналитическая методика обеспечивает получение согласующихся результатов независимо от изменений внешних условий при условии однородности пробы.

При проведении валидации следует учесть все определенные ситуации для данной лаборатории. Типичными переменными, обусловливающими внутрилабораторную вариабельность, являются сотрудники, день проведения и оборудование для титрования.

Для оценки промежуточной прецизионности используются данные сходимости вместе с набором данных, полученных при выполнении методики вторым сотрудником.

Титриметрическая методика считается робастной, если на ее результаты не влияют небольшие, специально внесенные а рамках валидации изменения. Робастность методики проверяется при разработке методики. Специально изменяемыми при титровании параметрами являются: количество индикатора, температура, значение РН или скорость титрования.