Лабораторная работа № 14 определение коэффициента набухания семян Linum usitatissimum l.

Цель работы: изучить метод определения коэффициента поглощения растительного сырья, осуществить определение коэффициента поглощения семян льна.

Средства испытаний: градуированный цилиндр с притертой пробкой вместимостью 25 мл и высотой 125±5 мм с делениями по 0,5 мл, фарфоровая чашка и ступка.

Общие сведения.

Объектом испытания являются семена льна (Lini semen, Linseed) [7]. Данное растительное сырье широко используется в лечебных и диетических целях. Семена льна содержат: 41% жиров, 28% диетической клетчатки, 21% протеина, 6% углеводов (сахара, ароматические кислоты, лигнин и гемицеллюлоза), 4% золы и 1,5−2% лигнанов. Каждый из указанных компонентов определяет пищевую, диетическую, лечебную ценность льняного семени. Оболочка семян содержит до 8% слизистых веществ. Слизи растений − это гидрофильные (активно взаимодействующие с водой) полисахариды. Присутствие слизи в семенах льна и ее способность к набуханию способствует поглощению воды семенами и таким образом их быстрому прорастанию. Способность зрелых семян льна выделять обильную слизь широко используется в медицине. Слизь, образующая после набухания льна в горячей или холодной воде, имеет способность смягчать негативное действие разных раздражителей, а также обволакивает слизистые оболочки в период воспаления. Она долго удерживается на слизистых оболочках кишечника, предохраняя их от раздражения различными вредными веществами, поскольку не подвергается действию ферментов. Слизь применяется в основном при воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта (оказывает обволакивающее, смягчающее и противовоспалительное действие), поэтому коэффициент набухания для семян льна является одним из важнейших показателем качества.

Коэффициент набухания – это объем в миллилитрах, занимаемый 1 г лекарственного растительного средства (лекарственного растительного сырья), включая прилипшую слизь, после набухания в водном растворе в течение 4 ч [3].

Проведение испытаний.

В градуированный цилиндр с притертой пробкой вместимостью 25 мл и высотой 125±5 мм с делениями по 0,5 мл помещают 1,0 г измельченного льняного семени. Смачивают образец 1 мл спирта, добавляют 25 мл воды и закрывают цилиндр. Встряхивают интенсивно каждые 10 мин в течение часа. Затем оставляют стоять 3 ч. Через 1,5 ч после начала испытания сливают максимально возможное количество жидкости и любые частички сырья, плавающие на поверхности жидкости путем вращения цилиндра вокруг вертикальной оси. Через 3 ч измеряют объем, занимаемый образцом, вместе с прилипшей слизью. Параллельно проводят 3 испытания.

Обработка результатов.

Коэффициент набухания равняется среднему значению, вычисленному по результатам трех параллельных испытаний.

Коэффициент набухания для семян льна должен быть не менее 4 [7].

Лабораторная работа № 15 определение подлинности корневища сабельника болотного методом тонкослойной хроматографии

Цель работы: изучить метод определения подлинности растительного сырья методом тонкослойной хроматографии, осуществить определение подлинности корневища с корнями сабельника болотного.

Средства испытаний: силикагелевые пластины Kiselgel 60 F254, кислота серная, спирт этиловый, вода дистиллированная, колба круглодонная, обратный холодильник, колба плоскодонная с притертой пробкой, камера для элюирования, мерная посуда, пинцет медицинский, кусочки фарфора, пемзы или капилляра, ванилин; этилацетат, метанол, муравьиная кислота безводная, водяная баня, чай зеленый.

Общие сведения.

Объектом испытания являются корневища с корнями сабельника болотного (Comari palustris rhizomata cum radicibus, Potentilla root) [7]. На основе данного растительного сырья выпускают биологически активные добавки в качестве общеукрепляющенго средства при повышенных нагрузках на опорно-двигательный аппарат, в комплексном лечении остеохондроза и артритов. Химический состав сабельника болотного представлен полифенольным комплексом, в котором преобладают дубильные вещества, главным образом конденсированные: проантоцианидины и катехины (рис. 1.20) [3, 12].

R₁, R₂=H (пропеларгонидины); R₁=Н, R₂=OH (процианидины); R₁, R₂=OH (продельфинидины); R₃, R₄=H (катехин); R₃=OH, R₄=H (эпигаллокатехин); R₃=H, R₄=OH (эпикатехингаллат); R₃, R₄=OH (эпигаллокатехингаллат).

Рис. 1.20. Базовые структуры проантоцианидинов (a) и катехинов (б)

Для определения подлинности растительного сырья в фармакопейном анализе часто используется метод тонкослойной хроматографии (ТСХ). Это метод разделения, основанный на различном сродстве разделяемых компонентов между подвижной и неподвижной фазой (чаще всего силикагель), которая в ТСХ нанесена на инертную подложку. Перед разделением смеси веществ на пластину наносят испытуемые образцы и помещают в камеру с подвижной фазой. Важной характеристикой степени разделения определяемых соединений в планарной хроматографии является величина R_f отношение расстояния от центра пятна на пластинке до линии старта (х) к расстоянию (у), пройденному растворителем от линии старта до финиша (рис. 1.21). Величина R_f является характеристикой природы определяемого соединения и зависит от сорбента и растворителя, используемых для разделения [12].

1 – линия старта; 2 – анализируемое вещество; 3 – фронт растворителя.

Рис. 1.21. Определение R_f на тонкослойной хроматограмме

Проведение испытаний.

Приготовление растворов.

Испытуемый раствор. 0,50 г измельченного сырья помещают в круглодонную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл спирта этилового (70%, об/об) и нагревают с обратным холодильником на водяной бане в течение 30 мин. Охлаждают и фильтруют.

Раствор сравнения. 0,50 г измельченного зеленого чая помещают в круглодонную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл спирта (70%, об/об) и нагревают с обратным холодильником на водяной бане в течение 30 мин. Охлаждают и фильтруют.

Подвижная фаза. В коническую колбу с притертой пробкой последовательно вносят 17 мл этилацетата, 600 мкл метанола, 700 мкл воды, 800 мкл кислоты муравьиной безводной. Получают смесь растворителей состава: этилацетат − метанол − вода − кислота муравьиная безводная (8,5:0,3:0,35:0,4, об/об/об/об).

Ванилина раствор для опрыскивания. 0,1 г ванилина растворяют в 100 мл 96% этанола.

Серной кислоты раствор спиртовой. Осторожно при постоянном охлаждении и перемешивании 0,57 мл кислоты серной с содержанием 95,0−97,0 % (м/м) прибавляют к 60 мл 96% этилового спирта, охлаждают и доводят объем раствора тем же растворителем до 100 мл. Готовят перед использованием.

На линию старта пластин Kiselgel 60 F254с помощью капилляра наносят по 5 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения. Для более интенсивного испарения растворителя на нанесенные пробы направляли поток воздуха комнатной температуры. После полного высушивания пластинку помещают в специальную камеру с плоским дном, наполненную подвижной фазой.

Фронт подвижной фазы должен составлять не менее 15 см от линии старта. После элюирования пластину достают с помощью пинцета и высушивают при температуре от 100°С до 105°С в течение 5 мин, затем охлаждают на воздухе.

Проявление пластинку осуществляют опрыскиванием раствором 1 г/л ванилина в 96% спирте и последующим погружением на 1−2 мин в раствор 10 г/л кислоты серной в 96% спирте. После высушивания пластинки при температуре от 100°С до 105°С в течение 5 мин ее просматривают при дневном свете.

Обработка результатов.

На хроматограмме раствора сравнения в верхней трети должны обнаруживаться пять зон красного цвета (катехины чая). На хроматограмме испытуемого раствора в средней и верхней части должны обнаруживаться одна или несколько зон красного цвета (проантоцианидины и катехины). Если указанные вещества детектируются на хроматограмме, растительное сырье сабельника болотного выдерживает испытание на подлинность. Для всех обнаруживаемых веществ рассчитывается показатель R_f.