11.3.1.1 Методика выполнения работы

Свежие пекарские дрожжи (0,5 г) тщательно растирают в ступке с кварцевым песком и 5-кратным объемом воды. В две пробирки помещают по 2мл суспензии. Содержимое одной пробирки кипятят, прекращая действие фермента. В обе пробирки вносят по 0,5 мл раствора глюкозы, 2 капли метиленовой сини и 1 мл масла. После перемешивания пробирки помещают в водяную баню при температуре 40^оС. Замечают время с момента погружения пробирок в баню до обесцвечивания метиленовой сини в другой (некипяченой) пробирке. Активность фермента выражают в минутах, необходимых для обесцвечивания метиленовой сини.

11.3.1.2 Оформление результатов опыта

Полученные результаты записывают в таблицу 22.

Таблица 22

№ пробирки	Состояние фермента	Активность фермента, мин	Вывод

11.3.2 Опыт 2. Окисление формальдегида дегидрогеназой молока

В молоке содержатся дегидрогеназы, которые попадают в него из молочной железы и из микрофлоры молока. Альдегиддегидрогеназа окисляет формальдегид до муравьиной кислоты:

НСОН + НОН + МС НСООН + МСН₂

Приборы и реактивы: штатив с пробирками; мерные пипетки на 1 мл и на 5 мл; водяная баня; термометр; 0,4%-ный раствор формальдегида; 0,001%-ный раствор метиленовой сини.

11.3.2.1 Методика выполнения работы

В одну пробирку вливают 5 мл кипяченого молока, а в другую свежего. В обе пробирки добавляют по 0,5 мл раствора формальдегида и по 3 капли раствора метиленовой сини. Содержимое встряхивают и пробирки помещают в водяную баню при температуре 70^оС. засекают время, необходимое для обесцвечивания метиленовой сини. Активность фермента выражают в минутах, необходимых для обесцвечивания метиленовой сини.

11.3.2.2 Оформление результатов опыта

Полученные результаты записывают в таблицу 23.

Таблица 23

№ пробирки	Состояние фермента	Активность фермента, мин	Вывод

11.4 Контрольные вопросы

1. Какие реакции катализируют дегидрогеназы?

2. Какие факторы используются для инактивации дегидрогеназ?

3. Почему в контрольных вариантах опытов не обнаруживается активность ферментов?

4. Почему опыт с дегидрогеназой и метиленовой синью проводят в анаэробных условиях?

5. На чем основано определение активности дегидрогеназ с использованием метиленовой сини?

Рекомендуемая литература

[3 с.471-492];[6 с.73-88]

Лабораторная работа №12 Определение активности полифенолоксидазы

1. Цель работы: изучение метода определения активности полифенолоксидазы.

12.2 Общие сведения

Фермент полифенолоксидаза катализирует окисление моно-, ди- и полифенолов.

Типичная реакция, катализируемая полифенолоксидазой, имеет вид:

Полифенолоксидаза относится к купропротеидам и содержит в молекуле атом межи. Зона оптимальной активности фермента лежит между рН 5,0-7,0.

С действием полифенолоксидазы связано образование темноокрашенных соединений – меланинов при окислении кислородом воздуха аминокислоты – тирозина. Потемнение срезов картофеля, яблок, грибов, персиков и других растительных тканей в большей степени или полностью зависит от действия полифенолоксидазы.