10.3.2.1 Методика выполнения работы

Навеску 2 г масла расплавляют при температуре 40^оС в конической колбе на водяной бане и прибавляют 50 мл дистиллированной воды той же температуры полученную эмульсию тщательно охлаждают до температуры 25^оС. затем добавляют 10 мл 0,3%-ного раствора Н₂О₂. Все перемешивают и оставляют на два часа при температуре 25^оС Одновременно ставят вторую пробу при тех же условиях, но с кипяченой и охлажденной эмульсией масла, через 2 часа пробы подкисляют 5 мл 10%-ного раствора H₂SO₄ и титруют 0,1 Н раствором KMnO₄ до неисчезающего в течение 30 секунд розового окрашивания.

Разность в объемах (мл) 0,1 Н раствора KMnO₄, пошедших на титрование некипяченой и кипяченой проб, отнесенная к 100г масла, называется каталазным числом. Точность метода при титровании равна 0,1 мл раствора KMnO_4, или 5 единицам каталазного числа.

10.3.2.2 Оформление результатов опыта

Полученные результаты записывают в таблицу 21.

Таблица 21

Номер опыта	V KMnO4, пошедший на титрование холостой пробы, мл	V KMnO4, пошедший на титрование опытной пробы, мл	Число каталазы

10.4 Контрольные вопросы

1. К какому классу ферментов относится каталаза?

2. Какую реакцию катализирует каталаза?

3. Какова природа фермента каталазы? Что является каталитическим центром этого фермента?

4. Что показывает каталазное число масла?

5. В чем заключается принцип метода определения активности каталазы?

Рекомендуемая литература

[3 с.442-468];[6 с.48-69]

Лабораторная работа №11 Определение активности дегидрогеназы

11.1 Цель работы: изучение методов определения активности дегидрогеназы

11.2 Общие сведения

Дегидрогеназа катализирует окисление субстрата путем переноса водорода от донора (окисляемого субстрата) на соответствующий акцептор. Акцептором может быть кислород или какое-либо вещество, содержащееся в тканях организма. В опытах используют искусственный акцептор-метиленовую синь. Дегидрогеназа отнимает водород от субстрата и отдает его метиленовой сини, которая восстанавливается и превращается в неокрашенное соединение. Следовательно, по обесцвечиванию раствора можно судить о действии дегидрогеназы.

Лейкоформа легко окисляется кислородом воздуха, поэтому опыты проводят в анаэробных условиях (под слоем растительного масла).

11.3 Практическая часть

11.3.1 Опыт 1. Восстановление метиленовой сини дегидрогеназой дрожжей

В процессе брожения глюкозы, вызываемого дегидрогеназами дрожжей, происходит восстановление их кофермента (НАД) до НАДН₂, которые передает водород на уксусный альдегид, также образующийся при брожении. Если к такой системе (глюкоза +дрожжи) добавить метиленовую синь, то НАДН₂ будет передавать водород на метиленовую синь, вызывая ее обесцвечивание.

Приборы и реактивы: ступки с пестиками; штатив с пробирками; мерные пипетки на 2 мл; мерные цилиндры на 10 мл; водяная баня; термометр; 5%-ный раствор глюкозы; 0,001%-ный раствор метиленовой сини; растительное масло.