3.4. Изучение влияния ксенотрансплантации островков поджелудочной железы интрапортально и внутриселезеночно на функцию печени и селезенки

По мнению ряда авторов, трансплантация ОПЖ в портальную вену [117, 175, 293] и в пульпу селезенки [116, 136, 146, 289, 310, 330] позволяет нормализовать уровень глюкозы в крови, восстановить нарушенный углеводный обмен и обеспечить продукцию эндогенного инсулина в организме реципиента при СД 1 типа, а также способствует предупреждению развития тяжелых диабетических осложнений. Изучение показателей углеводного обмена в нашей работе показало, что интрапортальная и внутриселезеночная АлТц и КсТц ОПЖ позволяет в течение длительного времени поддерживать нормогликемию в организме реципиента. Уровень HbA1c и тест толерантности к глюкозе на 3 месяц посттрансплантационного периода не выявили существенных нарушений в углеводном обмене животных с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной и внутриселезеночной трансплантаций ОПЖ.

Однако, практически невыясненным остается вопрос о влиянии операции по введению ОПЖ путем инъекции на функцию органа, в который производится трансплантация. Кроме травматических послеоперационных нарушений, которые развиваются в первые дни после трансплантации, возможны также и осложнения, связанные с развитием реакции отторжения, инфильтрации иммунокомпетентными клетками, формированием рубца на поздних сроках. Все эти факторы могут негативно влиять на непосредственную жизнедеятельность органа, в который выполняют трансплантацию так, что гипогликемический эффект, достигнутый в результате введения ОПЖ может быть менее значим, чем тяжесть осложнений, нанесенных организму вследствие операции.

Эти вопросы требовали детального изучения, в связи с чем нами были изучены биохимические и другие показатели органов, гипогликемический эффект при трансплантации, в которые был максимальным: печень (интрапортальное введение) и селезенка.

3.4.1. Влияние интрапортальной ксенотрансплантации островков поджелудочной железы на функциональное состояние печени

В литературе встречаются данные, согласно которым успех интрапортальной трансплантации ОПЖ ограничен из–за быстрой потери графта, что связано с влиянием иммунных и неиммунных факторов [313]. Интрапортальная трансплантация ОПЖ может сопровождаться тяжелыми осложнениями, такими как кровотечение, гипертензия, эмболия и тромбоз портальной вены, стеатоз, массивный гепатический инфаркт, что в конечном итоге приводит к гибели реципиента [130, 333]. При трансплантации ОПЖ взрослых свиней в портальную вену обезьян происходит запуск реакции коагуляции, активации компонентов системы комплемента, агрегации тромбоцитов, инфильтрации портальной вены нейтрофильными гранулоцитами и моноцитами, которые вовлекаются в воспалительную реакцию, способствуя 70% потере графта на начальном посттрансплантационном этапе [313]. Активация вышеперечисленных реакций, возможно, связана с пиком С-пептида в сыворотке крови после проведения трансплантации. Известно, что между реакцией коагуляции, системой комплемента и клетками, принимающими участие в воспалительной реакции, существует множество связей [297]. В частности, реакция коагуляции развивается при контакте графта с кровью реципиента, что приводит к активации коллагена и тканевых факторов, которые экспрессируются и продуцируются α- и β-клетками наряду с глюкагоном и инсулином, способствуя активации и агрегации тромбоцитов [151, 198, 227, 252]. Дополнительно эндотелиальные клетки портальной вены продуцируют тромбоцит - активирующие факторы, являющиеся хемоаттрактантами для нейтрофилов. Активированные тромбоциты экспрессируют на поверхности мембраны Р-селектин – рецептор для взаимодействия с нейтрофилами и моноцитами. Тромбин стимулирует рецепторы к протеазам, представленые на гранулоцитах и моноцитах, что приводит к увеличению продукции цитокинов (ИЛ-1, ФНОα, моноцит – хемоаттрактантный белок-1) [153], а тканевые факторы, фибрин и фибриноген направлено активируют макрофаги [305]. Реакция коагуляции и агрегация тромбоцитов вызывает образование микротромбозов в терминальных ветвях портальной вены и развитию массивного инфаркта печени [313]. Цитокины, участвующие в процессе воспаления, повреждают β-клетки или островки через активацию нескольких стресс – сигнальных путей (р38 путь и путь опосредованный c-Jun NH2-терминальной киназой) [242, 258]. Активация системы комплемента, инфильтрация нейтрофилами и макрофагами, освобождение провоспалительных цитокинов, сверхактивация Fas экспрессии приводят к апоптозу островков, главным образом через ФНОα – сигнальный путь и активацию ядерного фактора – кВ - регулирующего апоптические гены и активацию каспаз [141].

В настоящее время существуют следующие пути преодоления развития воспалительных реакций, сопровождающиеся быстрой потерей интрапортального графта и развитием осложнений, к которым относят: использование антикоагулянтов (гепарин, N-ацетилцистеин и другие) [170], агентов, имеющих антивоспалительный эффект (анти–ФНОα–моноклональные антитела, статины, α1-антитрипсин, никотинамид и другие) [228, 251, 278], применение генетических модификаций в изолированных островках донора (человека, свиньи), с помощью аденовирус – опосредованной сверхэкспрессии анти-апоптических генов (А20, Bcl-2, Bcl-XL, XIAP) [150, 177, 209], применение антиоксидантов, комплемент – регулирующих белков (hDAF/hCD59) [173, 254, 278], а также создание нокаутных свиней, лишенных гена, кодирующего синтез фермента галактозил-трансферазы, ответственного за продукцию Gal-олигосахаридов [218, 266].

Однако необходимо отметить, что в работах некоторых авторов описываются данные, согласно которым активация реакции коагуляции и агрегации тромбоцитов, приводящие к быстрой потере интрапортального графта, может быть связаны с контаминацией трансплантата [133].

В связи с описанием некоторыми авторами возможных посттрансплантационных нарушений функций печени, сопровождающихся тяжелыми осложнения [130, 313, 333], мы считали необходимым в нашей работе провести исследование показателей, отражающих функциональное состояние печени, после интрапортальной трансплантации ОПЖ неонатальных поросят.

Для идентификации дисфункции печени после КсТц островков Лангерганса в портальную вену нами были проведены исследования биохимических показателей крови (содержание общего и свободного билирубина, альбумина, креатинина, активности ЩФ, АлАТ, АсАТ). По данным литературы вышеперечисленные показатели характеризуют функциональное состояние печени [69, 127, 171, 192, 271].

Одним из важных показателей развития острых и хронических диффузных заболеваний печени, дистрофических гепатопоражений при первичном билиарном циррозе печени, а также при тромбозе, эмболии, стеатозе портальной вены, массивном гепатическом инфаркте является повышение уровня общего билирубина в сыворотке крови [41, 52, 69].

Билирубин является продуктом распада гемоглобина, который образуется в клетках ретикулоэндотелиальной системы селезенки и печени вследствие катаболизма геминовой части гемоглобина и других гемсодержащих белков. Существуют две фракции билирубина: свободный и связанный. Процесс распада гемоглобина начинается в селезенке, вследствие чего образуются биливердин и свободный билирубин, который затем транспортируется в печень в виде комплекса с сывороточным альбумином. В печени свободный билирубин комплексируется с глюкуроновой кислотой и превращается в связанный билирубин или билирубинглюкуронид, который активно против градиента концентрации экскретируется в желчные протоки [9, 52]. Свободный билирубин представляет собой высоко токсичное, липофильное вещество, и может легко растворяется в липидах мембран митохондрий, нарушая метаболические процессы в гепатоцитах. При нарушении функции печени связывание билирубина замедляется, вследствие чего увеличивается уровень свободного билирубина в крови. Поэтому, избыточное содержание билирубина, особенно свободного, в крови, свидетельствует о наличии функциональных нарушений в печени [48, 69].

У интактных кроликов уровень общего билирубина в сыворотке крови в среднем составлял 9,71±0,38 мкмоль/л (Рис. 3.37), а у животных с экспериментальным СД 1 типа – 18,05±0,26 мкмоль/л.

Для дополнительного контроля проводили ложную операцию интактным животным и животным с экспериментальным СД 1 типа, при которой вместо трансплантата вводили такой же объем питательной среды с антибиотиками.

Содержание общего билирубина у ложнооперированных животных на протяжение 91 суток не превышало значения, установленные для интактных животных, тогда как у ложнооперированных с экспериментальным СД 1 типа этот покзатель в 1,7 раз был выше значений интактной группы животных (Таблица 6).

Общий билирубин в сыворотке крови кроликов с экспериментальным СД 1 типа до интрапортальной КсТц ОПЖ превышал в 1,8 раза значения интактных животных и в среднем составлял 16,77±0,32 мкмоль/л. Однако на 3 сутки посттрансплантационного периода наблюдалось постепенное снижение уровня билирубина в сыворотке крови до 13,59±0,58 мкмоль/л. На 7 сутки после интрапортальной КсТц ОПЖ содержание общего билирубина было на уровне интактных животных и в среднем составляло 7,24±1,05 мкмоль/л. Следует отметить, что на 77 сутки после интрапортального введения ОПЖ отмечалось повторное повышение содержание билирубина в сыворотки крови экспериментальных животных, а на 91 сутки содержание билирубина в среднем составляло 11,79±0,41 мкмоль/л (Рис. 3.37).

Рис. 3.37. Содержание общего билирубина в сыворотке крови кроликов с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц ОПЖ.

Примечания: * - отличия достоверны по отношению к значениям интактного контроля, р < 0,01, линией указан уровень показателя интактного контроля.

Таблица 6. Биохимические показатели крови у интактных и животных с экспериментальным СД 1 типа после проведения ложной операции.

Биохимические показатели	Сутки	Контроль		СД 1 типа
		Без операции	ЛО	Без операции	ЛО
Глюкоза, ммоль/л	До	6,01 ± 0,30	4,25 ± 0,25	27,5 ± 0,05*	26,7 ± 0,15*
	3	5,37 ± 0,50	5,55 ± 0,05	27,15 ± 0,15*	27,5 ± 0,25*
	14	5,92 ± 0,21	5,05 ± 0,15	24,86 ± 0,05*	27,3 ± 0,22*
	91	5,60 ± 0,32	5,65 ± 0,35	26,05 ± 0,25*	27,4 ± 0,20*
Билирубин, мкмоль/л	До	11,45 ± 0,18	10,95 ± 0,12	17,34 ± 0,29*	16,32 ± 0,29*
	3	10,24 ± 0,29	11,25 ± 0,29	18,35 ± 0,29*	19,36 ± 0,29*
	14	8,21 ± 0,29	9,73 ± 0,15	16,53 ± 0,18*	16,83 ± 0,10*
	91	10,04 ± 0,17	8,21 ± 0,30	17,34 ± 0,30*	17,01 ± 0,12*
Креатинин, мг/мл	До	8,07 ± 0,20	7,52 ± 0,12	18,84 ± 0,41*	20,23 ± 0,39*
	3	8,56 ± 0,48	8,08 ± 0,20	20,23 ± 0,40*	22,31 ± 0,55*
	14	8,63 ± 0,28	7,38 ± 0,20	22,31 ± 0,56*	23,01 ± 0,41*
	91	10,16± 0,20	8,29 ± 0,08	18,84 ± 0,40*	20,84 ± 0,38*
Альбумин, мг/мл	До	45,96 ± 0,54	45,53 ± 0,57	33,62 ± 0,81#	29,78 ± 0,49#
	3	47,66 ± 0,62	46,59 ± 0,41	32,77 ± 0,81#	32,34 ± 0,98#
	14	47,02 ± 0,41	44,04 ± 0,73	29,36 ± 0,25#	34,89 ± 0,50#
	91	45,10 ± 0,49	46,80 ± 0,50	31,49 ± 1,04#	30,00 ± 0,81#
ЩФ, нмоль/сл	До	2875,35 ± 128,25	2875,35 ± 128,25	5985,20 ± 128,31*	5874,14 ± 64,12*
	3	2875,35 ± 128,25	3097,48 ± 128,24	6873,73 ± 128,31*	6540,53 ± 64,12*
	14	2764,29 ± 64,12	2208,95 ± 65,00	6207,33 ± 128,25*	4985,07 ± 192,37*
	91	2264,49 ± 55,53	2320,02 ± 64,12	6873,73 ± 128,31*	4652,41 ± 128,25*
АлАт, мкмоль/ч мл	До	0,49 ± 0,03	0,49 ± 0,03	1,28 ± 0,03*	1,43 ± 0,09*
	3	0,49 ± 0,03	0,54 ± 0,06	1,33 ± 0,02*	1,55 ± 0,03*
	14	0,57 ± 0,03	0,49 ± 0,03	1,38 ± 0,04*	1,33 ± 0,04*
	91	0,46 ± 0,05	0,49 ± 0,02	1,22 ± 0,03*	1,27 ± 0,06
АсАт, мкмоль/ ч мл	До	0,49 ± 0,03	0,50 ± 0,02	1,69 ± 0,05*	1,79 ± 0,05*
	3	0,40 ± 0,03	0,54 ± 0,06	1,79 ± 0,06*	2,51 ± 0,18*
	14	0,54 ± 0,06	0,44 ± 0,03	1,89 ± 0,05*	1,75 ± 0,08*
	91	0,47 ± 0,05	0,49 ± 0,04	1,98 ± 0,06*	1,79 ± 0,06*

Примечания: * - отличия достоверны относительно интактных животных, р < 0,05, # - отличия достоверны относительно интактных животных, р < 0,01.

Из литературных источников известно, что фракция свободного билирубина при отсутствии патологических процессов в печени составляет до 25% от общего билирубина [69].

В таблице 6 представлены данные содержания свободного билирубина в сыворотке крови экспериментальных групп животных. Необходимо отметить, что содержание свободного билирубина в сыворотке крови ложнооперированных животных не изменялось на протяжение всего эксперимента и оставалось на уровне интактной группы животных, который в среднем составлял 11,9±0,3% от общего билирубина. У кроликов с экспериментальным СД 1 типа независимо от проведения ложной операции содержание свободного билирубина в сыворотке крови было в 2,3-2,5 раза выше, чем у контрольной группы животных.

У группы животных с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц ОПЖ содержание уровень билирубина, начиная с 3 суток постепенно снижался и на 7 сутки находилсь в пределах нормальных значений. Уровень свободного билирубина у кроликов с интрапортальным ксенографтом ОПЖ не превышал 14,5±1,1% на протяжении всего периода наблюдения (Таблица 7).

Следует отметить, что уровень глюкозы в крови кроликов с экспериментальным диабетом после интрапортальной КсТц ОПЖ с 49 суток начинал повторно увеличиваться и на 91 сутки в среднем составлял 12,43±1,17 ммоль/л. Следовательно, повторное повышение уровня общего и свободного билирубина в сыворотке крови было связано с повышением уровня глюкозы в крови животных, а не с повреждением печени вследствие операции введения островков в портальную вену. Это подтверждается тем фактом, что у кроликов с экспериментальным СД 1 типа независимо от проведения ложной операции содержание общего и свободного билирубина в сыворотке крови значительно превышало показатели интактных животных, это свидетельствовало о развитии диабетической гепатопатии у этих групп животных.

Таблица 7. Относительное содержание свободного билирубина (%) в сыворотке крови интактных животных и кроликов с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц островков.

Группы животных	Сутки после трансплантации
	До тр.	3	7	21	49	63	77	91
Интактные	11,9±1,3
Диабет	30,3±2,8
ЛО контроль	9,8±0,6	10,5±1,1	10,2±0,7	12,9±1,7	11,4±0,9	11,8±0,5	11,9±1,1	11,9±1,1
ЛО диабет	32,0±2,4*	32,2±2,2*	29,3±1,2*	31,9±1,2*	28,9±1,2*	32,7±1,1*	27,6±1,8*	29,6±2,4
КсТц ОПЖ	26,7±0,6*	15,6±2,1	11,4±0,9	11,1±2,0	10,6±1,3	11,2±1,6	14,2±1,4	14,5±1,1

Примечание. * - отличия достоверны по отношению к значениям интактного контроля, р < 0,05.

Наиболее информативными показателями нарушения деятельности печени и индикаторами гепатоцеллюлярных поражений считаются содержание альбумина и активности ферментов ЩФ, АлАт, АсАт в сывортке крови [1, 9, 127, 192, 271].

Известно, что синтез альбумина происходит в основном в гепатоцитах, поэтому изучение этого показателя является важным при определении развития нарушений в печени [9, 52, 69]. При нарушениях функционального состояния печени снижается белоксинтезирующая способность, в том числе и синтез альбумина.

Содержание альбумина в сыворотке крови у интактных животных в течение 91 суток в среднем составляло 46,39±0,26 мг/мл (Рис. 3.38), при этом уровень альбумина у кроликов с экспериментальным СД 1 типа – 31,18±0,41 мг/мл.

У ложнооперированных кроликов уровень альбумина в сыворотке крови на протяжении всего периода наблюдения оставалсь в пределах контрольных значений, а у ложнооперированных кроликов с экспериментальным СД 1 типа содержание альбумина было в среднем в 1,5 раза меньше, чем у интактных животных, что свидетельствовало про нарушения синтезирующей функции печени (Таблица 6).

При изучении содержания альбумина в сыворотке крови было установлено снижение этого показателя у кроликов до интрапортального введения островков и на 3 сутки после КсТц в среднем 1,2 раза. Однако на 7 сутки отмечалось повышение уровня альбумина у кроликов с интрапортальным ксенографтом ОПЖ до уровня интактных животных. На 91 сутки посттрансплантационного периода у животных с ксенографтом в портальной вене уровень альбумина достоверно не отличался от показателей контроля и в среднем составлял 45,67±0,77 мг/мл (Рис. 3.38), что свидетельствовало о восстановлении белоксинтезирующей способности печени после интрапортальной КсТц ОПЖ.

Рис. 3.38. Содержание альбумина в сыворотке крови кроликов с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц ОПЖ.

Примечания: * - отличия достоверны по отношению к значениям интактного контроля, р < 0,01, линией указан уровень показателя интактного контроля.

ЩФ имеет повышенную активность в печени и остеобластах по сравнению с другими органами, поэтому при нарушении функции печени и заболеваниях костей её активность в крови повышается [1, 52]. Аминотрансферазы (АлАт и АсАт) имеют наибольшую активность в печени и ПЖ. При патологических процессах в этих органах увеличивается проницаемость мембран клеток или их лизис, вследствие чего ферменты высвобождаются из клеток, благодаря чему показатели их активности в крови увеличиваются. Таким образом, повышение активности аминотрансфераз в крови является одним из основных индикаторов поврежедения паренхимы печени и заболеваний гепатобилиарной системы [69, 127, 192, 271].

Активность ферментов в сыворотке крови интактной группы животных на протяжение всего периода наблюдений в среднем составляла: ЩФ – 2468,11±56,75 нмоль/с·л (Рис. 3.39), АсАт - 0,49±0,03 мкмоль/ч·мл (Рис. 3.40), АлАт – 0,54±0,04 мкмоль/ч·мл (Рис. 3.41). У кроликов с экспериментальным диабетом показатели были следующими: ЩФ – 6022,22±160,79 нмоль/с·л, АсАт – 1,92±0,06 мкмоль/ч·мл, АлАт – 1,35±0,03 мкмоль/ч·мл, что указывало на существование нарушений функции печени у животных при данной патологии. Этот факт подтверждают данные литературы, которые демонстрируют, что при введении животным диабетогенной дозы раствора аллоксана уже на 11 сутки начинают увеличиваться активности ЩФ, АсАт, АлАт в сыворотке крови [1].

Рис. 3.39. Активность ЩФ в сыворотке крови интактных и кроликов с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц ОПЖ.

Примечание. * - отличия достоверны по отношению к значениям интактного контроля, р < 0,01, линией указан уровень показателя интактного контроля.

У кроликов после ложной операции активность ЩФ, АлАт, АсАт в сыворотке крови оставалась в пределах контрольных значений, тогда как у группы кроликов с экспериментальным СД 1 типа независимо от проведения ложной операции наблюдалась повышенная активность ЩФ в 2,2 раза, АсАт в 3,6 раза, АлАт в 2,4 раза по сравнению с интактной группой животных (Таблица 6).

Н еобходимо отметить, что у кроликов с экспериментальным диабетом до КсТц ОПЖ активность ЩФ в 2,1 раза (Рис. 3.39), АсАт 2,9 в раза (Рис. 3.40), АлАт в 2,5 раза (Рис. 3.41) была выше, чем у интактных животных. На 3 сутки после КсТц ОПЖ в портальную вену активность ферментов постепенно начинала снижаться, однако превышала значения контроля: ЩФ в 1,8 раза, АсАт в 1,6 раза, АлАт в 1,7 раза. С 7 суток посттрансплантационного периода, когда уровень глюкозы в крови экспериментальных животных был в пределах нормогликемии активности ЩФ, АсАт и АлАт в сывортке крови животных достоверно не отличались от интактной группы животных (Рис. 3.39, 3.40, 3.41).

Рис. 3.40. Активность АсАт в сыворотке крови интактных и кроликов с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц ОПЖ.

Примечание. * - отличия достоверны по отношению к значениям интактного контроля, р < 0,01, линией указан уровень показателя интактного контроля.

В течение 77 суток у кроликов после интрапортальной КсТц ОПЖ активности ЩФ, АсАт, АлАт были в пределах контрольных значений. Однако на 77 суток отмечалось повторное повышение в сыворотке крови активности ЩФ в 1,2 раза, АсАт в 1,3 раза, АлАт в 1,2 раза, при этом необходимо отметить, что уровень глюкозы в крови этих животных составлял 11-12 ммоль/л.

Д ля дополнительной оценки влияния интрапортальной КсТц островков на функцию печени мы проводили изучение коэффициента Де Ритиса, который представляет собой соотношение АсАт к АлАт и отражает степень тяжести поражения печени. Повышение коэффициента Де Ритиса более 1,33±0,26 наблюдается при тяжелых поражениях печени, сопровождающихся некрозом гепатоцитов [9, 41, 72].

Рис. 3.41. Активность АлАт в сыворотке крови интактных и кроликов с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц ОПЖ.

Примечание. * - отличия достоверны по отношению к значениям интактного контроля, р < 0,01, линией указан уровень показателя интактного контроля.

У интактных кроликов соотношение АсАт/АлАт в среднем составляло 0,96±0,03 (Рис. 3.42), а у кроликов с экспериментальным диабетом – 1,45±0,04, что свидетельствовало про развитие диабетической гепатопатии при аллоксан – индуцированном диабете.

Рис. 3.42. Изменение коэффициента Де Ритиса у кроликов с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц ОПЖ.

Примечание. * - отличия достоверны по отношению к значениям интактного контроля, р < 0,01, линией указан уровень показателя интактного контроля.

Определение содержания креатинина в сыворотке крови наряду с идентификаций клубочковой фильтрации в почках также является информативным показателем печеночной недостаточности, так как синтез креатинина происходит в печени [52, 69]. Креатинин относится к «беспороговым» веществам, в норме креатинин свободно фильтруется в почечных клубочках, не подвергаясь обратному всасыванию или дополнительной секреции в канальцах и при отсутствии патологии почек полностью экскретируется из организма с мочой. Увеличение концентрации креатинина в сыворотке крови происходит при уменьшении уровня почечной фильтрации (снижении функции почек) [9, 69].

Исследование содержания креатинина в крови после трансплантации ОПЖ неонатальных поросят в портальную вену является целесообразным для обнаружения развития осложнений, которые связаны с развитием в организме СД 1 типа (нефропатии), а также посттрансплантационных осложнений.

У ложнооперированных кроликов содержание креатинина в крови не изменялось и соответствовало значениям интактных животных, тогда как у кроликов с экспериментальным СД 1 типа уровень креатинина в 2,1 раза превышал значения контроля (Таблица 6). Содержание креатинина в сыворотке крови интактных животных в среднем составляло 9,63±0,53 мг/мл (Рис. 3. 43), а у кроликов с экспериментальным СД 1 типа – 20,23±0,42 мг/мл.

На 3 сутки после КсТц ОПЖ в портальную вену наблюдалось постепенное снижение уровня креатинина в сыворотке крови и на 7 сутки посттрансплантационного периода у кроликов с интрапортальным ксенографтом островков уровень креатинина был в пределах контрольных значений и в среднем составлял 8,93±0,18 мг/мл. Повторное повышение в 1,2 раза креатинина наблюдалось на 77 сутки после КсТц ОПЖ в портальную вену (Рис. 3. 43).

Рис. 3.43. Содержание креатинина в сыворотке крови кроликов с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц ОПЖ.

Примечание. * - отличия достоверны по отношению к значениям интактного контроля, р < 0,01, линией указан уровень показателя интактного контроля.

Анализ полученных данных показал повышенные показатели общего и свободного билирубина, креатинина и активностей ЩФ, АсАт, АлАт и сниженный уровень альбумина у животных с экспериментальным СД 1 типа, что свидетельствовало о развитие диабетической гепатопатии, так как у этой группы животных отмечалась гипергликемия на протяжении всего периода наблюдения, которая способствовала жировой инфильтрации печени.

У животных с экспериментальным СД 1 типа после интрапортальной КсТц ОПЖ определение биохимических показателей функции печени показало сходную динамику общего и свободного билирубина, креатинина, а также активностей ЩФ и аминотрансфераз, а именно: повышение уровня показателей до проведения КсТц, снижение в первую неделю после введения ОПЖ неонатальных поросят, и повторное повышение на 77 сутки посттрансплантационного периода.

Из литературных источников известно, что нарушение функции печени является распространенной патологией при СД 1 типа. Диабетическая гепатопатия встречается по данным разных авторов в 26-66% случаях у больных СД 1 типа. Дефицит инсулина в организме при СД приводит к нарушениям углеводного, жирового, белкового, аминокислотного обменов, повышению активности контринсулярных гормонов, сопровождающееся развитием хронического эндотоксикоза и негативно влияет на функцию печени. Повышение в плазме крови уровня триглицеридов, липопротеинов низкой и очень низкой плотности при СД 1 типа приводит к увеличению синтеза жирных кислот. Это сопровождается перенапряжением процессов β-окисления в митохондриях гепатоцитов и накоплением жирных кислот и липопротеинов низкой плотности в клетках печени, что вызывает её жировую дистрофию и приводит к нарушению связывания свободного билирубина [4, 34, 47, 57, 90].

При СД 1 типа наблюдается нарушение синтеза белка, а также отмечается интенсификация процессов катаболизма белков, при этом уменьшается содержание альбумина и повышается содержание α-глобулинов [34, 47, 111]. На фоне диспротеинемии происходит повышение активности АлАт в сыворотке крови, так как усиливается аланинглюкозный путь, который сопровождается выбросом из клеток глюкозы за счет ее дефосфорилирования повышенной ЩФ [69, 88]. Известно, что АлАт является ферментом, который обеспечивает работу аланинглюкозного шунта, способствуя переходу глюкозы в аланин и наоборот, поддерживая уровень глюкозы и белка в плазме крови. Следует отметить, что АсАт является ключевым ферментом обмена веществ и обеспечивает поступление субстратов (аспартат, глутамат, пируват и α-кетоглутарат) в цикл трикарбоновых кислот, занимая «центральную» роль в метаболизме. ЩФ в организме осуществляет процессы трансмембранного фосфорилирования, обеспечивая вход и выход глюкозы в клетки, что напрямую влияет на уровень глюкозы в крови [9]. Вследствие нарушение углеводного обмена, а именно гипергликемия, при СД 1 типа способствует повышению активности ЩФ, АсАт, АлАт в крови.

Учитывая выше представленные факты, полученные нами результаты давали основание считать, что повышение уровня сывороточного билирубина, креатинина, и активностей ЩФ и аминотрансфераз, которое наблюдалось при развитие экспериментального СД 1 типа, не связано с посттрансплантационными осложнениями и развитием функциональных нарушений в печени. Анализ динамики гликемии (Рис. 3.19 б) и биохимических показателей у кроликов с интрапортальным ксенографтом ОПЖ дают возможность утверждать, что повышение биохимических показателей, отражающие функциональное состояние печени, зависят от присутствия гипергликемичного состояния у животных, но не являются следствием интрапортального введения островков неонатальных поросят.

У кроликов после интрапортальной КсТц ОПЖ уровень глюкозы на протяжение 49 суток находился на уровне интактной группы животных. Начиная с 49 суток у кроликов с интрапортальным ксенографтом наблюдалось повышение уровня гликемии до 10 ммоль, а с 77 суток до 11-12 ммоль/л. Отсутствие изменений в содержание общего и свободного билирубина, креатинина, а также активности ферментов на протяжении 70 суток и уровня альбумина на протяжении 91 суток посттрансплантационного периода, свидетельствовало о том, что интрапортальная КсТц ОПЖ не вызывала развития интрапортальных осложнений и нарушения функции печени.