МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ УКРИНЫ

ХАРЬКОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ИМЕНИ В.Н. КАРАЗИНА

Колот Наталья Владимировна

УДК

Компенсация углеводного обмена у кроликов с экспериментальным сахарным диабетом 1 типа при трансплантации островков поджелудочной железы в разные сайты организма

03.00.13 – физиология человека и животных

Научный руководитель:

д.б.н., проф. Бондаренко Т.П.

Харьков - 2008

Содержание

Перечень условных обозначений……………………………………………..…5

Введение…………………………………………………………………………..6

I раздел. Обзор литературы……………………………………………………..17

1.1. Современные представления о физиологии поджелудочной железы и ее роли в жизнедеятельности организма………………………………………….17

1.1.1.Эмбриональное становление поджелудочной железы…………………………………………………………………………….18

1.1.2. Инсулин, регуляция его синтеза и секреции……………………..21

1.1.3. Физиологические эффекты инсулина в организме………………25

1.2. Cахарный диабет 1 типа…………………………………………………….30

1.3. Трансплантация островков поджелудочной железы как метод лечения сахарного диабета 1 типа………………………………………………………..37

1.4. Выживание островков поджелудочной железы в различных сайтах организма…………………………………………………………………………43

II радел. Материалы и методы исследований………………………………….49

2.1. Получение островков поджелудочной железы……………………………49

2.2.Разделение суспензии клеток и островков поджелудочной железы в градиенте плотности фиколла…………………………………………………..50

2.3. Культивирование островков поджелудочной железы……………………50

2.4. Выявление β-клеток островков поджелудочной железы с помощью специфической реакции на дитизон……………………………………………51

2.5. Измерение базального и стимулированного уровня инсулина в среде культивирования…………………………………………………………………51

2.6. Измерение активности α - амилазы в среде культивирования островков поджелудочной железы………………………………………………………….52

2.7. Экспериментальная модель сахарного диабета…………………………...52

2.8. Трансплантация островков поджелудочной железы животным с экспериментальным СД 1 типа………………………………............................52

2.9. Исследование показателей углеводного обмена у кроликов с экспериментальным СД 1 типа до и после трансплантации………………….54

2.9.1. Измерение содержания глюкозы в цельной крови………………54

2.9.2. Проведение внутривенного теста на толерантность к глюкозе…54

2.9.3. Измерение уровня гликозилированного гемоглобина в крови….54

2.9.4. Определение содержания глюкозы в моче……………………….55

2.10. Идентификация трансплантата при использовании флуоресцентного полиметинового красителя DioC18…………………………………………….55

2.11. Определение уровня инсулина в сыворотке крови…………………..….56

2.12. Определение уровня С-пептида в сыворотке крови………….…………56

2.13. Измерение биохимических показателей в сыворотке крови экспериментальных животных………………………………………………….57

2.14. Определение показателей крови у экспериментальных животных…….57

2.15. Гистологический анализ образцов………………………………………..57

2.16. Реактивы……………………………………………………………………58

2.17. Статистическая обработка результатов…………………………………..58

III раздел. Собственные результаты и их обсуждение………………………..59

3.1. Изучение структурно - функциональных свойств островков поджелудочной железы неонатальных поросят и кроликов in vitro…………60

3.2. Алло - и ксенотрансплантация островков поджелудочной железы неоанатальных животных в различные сайты организма кроликов с экспериментальным СД 1 типа…………………………………………………83

3.3. Использование флуоресцентного маркера DiOC18 для идентификации трансплантата островков поджелудочной железы………………..………….125

3.4. Изучение влияния ксенотрансплантации островков поджелудочной железы интрапортально и внутриселезеночно на функцию печени и селезенки..............................................................................................................132

3.4.1. Влияние интрапортальной ксенотрансплантации островков поджелудочной железы на функциональное состояние печени.....................133

3.4.2. Влияние внутриселезеночной ксенотрансплантации островков поджелудочной железы на функциональное состояние селезенки................150

Заключение..........................................................................................................163

Выводы………………………………………………………………………….174

Список литературы……………………………………………………………..176

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АлАт - аланинаминотрансфераза

АлТц - аллотрансплантация

АДФ - аденозиндифосфат

АКТГ - адренокортикотропный гормон

АсАт - аспартатаминотрансфераза

АТФ - аденозинтрифосфат

БСА – бычий сывороточный альбумин

ГЛЮТ – глюкозный транспортер

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИЛ - интерлейкин

ИНФ - интерферон

ИФР - инсулиноподобный фактор роста

КсТц - ксенотрансплантация

ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности

НАДФ · Н - никотинамидфосфат восстановленный

НАД · Н - никотинамид восстановленный

ОПЖ - островки поджелудочной железы

ПЖ - поджелудочная железа

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РНК - рибонуклеиновая кислота

СД - сахарный диабет

СОЭ – скорость оседания эритроцитов

ФНО - фактор некроза опухоли

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

ЩФ - щелочная фосфатаза

HbA1с – гликозилированный гемоглобин