- •Колот Наталья Владимировна
- •Компенсация углеводного обмена у кроликов с экспериментальным сахарным диабетом 1 типа при трансплантации островков поджелудочной железы в разные сайты организма
- •Содержание
- •Введение
- •Раздел I
- •1.1. Современные представления о физиологии поджелудочной железы и её роли в жизнедеятельности организма.
- •1.1.1. Эмбриональное становление поджелудочной железы.
- •1.1.2. Инсулин, регуляция его синтеза и секреции.
- •1.1.3. Физиологические эффекты инсулина в организме.
- •1.2. Cахарный диабет 1 типа.
- •1.3. Трансплантация островков поджелудочной железы как метод лечения сахарного диабета 1 типа.
- •1.4. Выживание островков поджелудочной железы в различных сайтах организма.
- •Раздел II
- •2.1. Получение островков поджелудочной железы.
- •2.2. Разделение суспензии клеток и островков поджелудочной железы в градиенте плотности фиколла.
- •2.3. Культивирование островков поджелудочной железы.
- •2.4. Выявление β-клеток островков поджелудочной железы с помощью специфической реакции на дитизон.
- •2.5. Определение базального и стимулированного уровня инсулина в среде культивирования.
- •2.6. Измерение активности α - амилазы в среде культивирования островков поджелудочной железы.
- •2.7. Экспериментальная модель сахарного диабета.
- •2.8. Трансплантация островков поджелудочной железы животным с экспериментальным сд 1 типа.
- •Экспериментальные группы животных:
- •2.9.1. Определение содержания глюкозы в цельной крови.
- •2.11. Определение уровня инсулина в сыворотке крови.
- •2.12. Определение уровня с-пептида в сыворотке крови.
- •2.13. Измерение биохимических показателей в сыворотке крови экспериментальных животных.
- •2.14. Определение показателей крови у экспериментальных животных.
- •2.15. Гистологический анализ образцов.
- •2.16. Реактивы.
- •2.17. Статистическая обработка результатов.
- •3.1. Изучение структурно - функциональных свойств островков поджелудочной железы неонатальных поросят и кроликов in vitro
- •3.3. Использование флуоресцентного красителя DiОc18 для идентификации трансплантата островков поджелудочной железы.
- •3.4. Изучение влияния ксенотрансплантации островков поджелудочной железы интрапортально и внутриселезеночно на функцию печени и селезенки
- •3.4.1. Влияние интрапортальной ксенотрансплантации островков поджелудочной железы на функциональное состояние печени
- •3.4.2. Влияние внутриселезеночной ксенотрансплантации островков поджелудочной железы на функциональное состояние селезенки
- •Заключение
- •Список использованной литературы
2.11. Определение уровня инсулина в сыворотке крови.
Содержание инсулина в сыворотке крови экспериментальных животных определяли радиоиммунологическим методом с помощью стандартного набора риа-ИНС-ПГ-125I (Беларусь). В основе метода лежит «конкуренция» между меченным I125 инсулином и инсулином калибровочной или исследуемой пробы за связывание со специфическими антителами. Фракция свободного и связанного с антителами инсулина разделяется с помощью полиэтиленгликоля. Концентрацию инсулина в исследуемых пробах сыворотки крови определяют по калибровочной кривой зависимости активности связанного [I125] – инсулина от концентрации инсулина в калибровочных пробах.
2.12. Определение уровня с-пептида в сыворотке крови.
Содержание С-пептида в сыворотке крови экспериментальных животных определяли радиоиммунологическим методом с помощью стандартного набора C-PEPTIDE IRMA KIT (Чехия). Принцип метода заключается в связывание I125 с С-пептидом, находящийся в калибровочных или исследуемых пробах, образуя при этом иммунный комплекс. В течение трех часовой инкубации иммунные комплексы иммобилизируются на реактивной поверхности тест – пробирок. После чего тест – пробирки отмывают и измеряют радиоактивность на гамма – счётчике, которая прямо пропорциональна концентрации С-пептида. Концентрацию С-пептида в исследуемых пробах сыворотки крови определяют по калибровочной кривой зависимости активности связанного [I125] – С-пептида от концентрации С-пептида в калибровочных пробах.
2.13. Измерение биохимических показателей в сыворотке крови экспериментальных животных.
Определение содержания общего и прямого билирубина, альбумина, креатинина, активности щелочной фосфатазы (ЩФ), активности аланинаминотрансферазы (АлАт) и аспартатаминотрансферазы (АсАт) у экспериментальных животных проводили в сыворотке крови еженедельно на протяжении 3 месяцев с помощью стандартных наборов (Felicit - Диагностика, Украина), набора реактивов («Билирубин Эталон Агат», Россия) и фотометрического прибора (КФК 2 –УХЛ 42).
2.14. Определение показателей крови у экспериментальных животных.
Из гематологических показателей оценивали количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов путем подсчета в камере Горяева, ретикулоцитов и сидероцитов определяли в мазках крови по общепринятым методикам [23, 56, 94], скорость оседания эритроцитов (СОЭ) определяли микрометодом Панченкова, время свертывания крови определяли по методу Моравица [23, 56], уровень гемоглобина определяли фотометрическим методом, используя стандартный набор HB 400 S (Lachema, Чехия) с помощью фотометрического прибора (КФК 2 –УХЛ 42).
2.15. Гистологический анализ образцов.
Гистологическому исследованию подвергались собственные ПЖ экспериментальных животных и органы, в которые осуществляли трансплантацию ОПЖ. После легкого эфирного наркоза животных забивали и извлекали органы, которые помещали в 10% нейтральный раствор формалина для гистологического исследования. По стандартной методике органы заливали в парафин [63, 107]. Приготовленные на микротоме срезы 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и проводили исследования под световым микроскопом при увеличении х 20 и х 40. Микрофотосъёмку осуществляли на микроскопе Olympus XI71.