Ход работы

Взятие и разведение крови осуществляют с помощью смесителя для лейкоцитов. Смеситель имеет меньший объем ампулы по сравнению со смесителем для эритроцитов и содержит белую бусинку. Набирают кровь до метки «0,5», затем уксусную кислоту - до метки «11», чем достигают разведения в 20 раз. Для разрушения оболочки эритроцитов и прокрашивания ядер лейкоцитов после перемешивания содержимого ждут 5 минут.

Заполнение камеры проводят так же, как описано в работе 1. Подсчет лейкоцитов осуществляют в 100 больших квадратах, что соответствует 100×16=1600 малым. Количество лейкоцитов в 1 мкл крови вычисляют по формуле: Х=А•4000•20/1600, где

А – найденное количество лейкоцитов в 100 больших квадратах;

20 – степень разведения крови;

1/4000 мм³ – объем разведенной крови над малым квадратом;

1600 – количество малых квадратов.

Для определения числа лейкоцитов в 1 л крови полученный результат умножают на 10⁶.

Ошибка метода составляет в среднем ±7%.

Источники ошибок при подсчете лейкоцитов в счетной камере те же, что и при подсчете эритроцитов. Кроме того, в число лейкоцитов могут войти и эритробласты, если они имеются в крови. Их наличие у испытуемого выясняют при изучении морфологии клеток в фиксированных и окрашенных препаратах.

В протокол вносят найденное число лейкоцитов, фрагмент сетки Горяева с указанием квадратов, в которых считают лейкоциты, формулу определения количества лейкоцитов в крови и полученный результат.

В заключении сравнивают результат с физиологической нормой и анализируют возможные причины несоответствия результатов нормативу.

Работа 3. Определение количества гемоглобина в крови по методу Сали

Цель работы: знакомство с классическим методом определения количества гемоглобина.

Для работы необходимы: исследуемая кровь, гемометр Сали, 0,1N раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, спирт, вата, груша.

Метод основан на колориметрическом принципе. При смешивании крови с соляной кислотой гемоглобин превращается в солянокислый гематин, имеющий коричневый цвет. Полученную смесь разводят дистиллированной водой до цвета раствора в стандартных пробирках, находящихся в крайних гнездах гемометра (Рис. 4). Этот раствор имеет интенсивность окраски, соответствующую содержанию гемоглобина, равному 166,7 г/л.

Ход работы

1. В градуированную пробирку гемометра наливают до первой метки (2г%) 0,1%N раствор соляной кислоты.

2. Капиллярной пипеткой набирают кровь точно до метки 20 мм³ и осторожно выдувают ее на дно пробирки. Не вынимая пипетку из пробирки, промывают ее соляной кислотой. Встряхивая пробирку, тщательно перемешивают ее содержимое. Для завершения реакции смеси дают постоять не менее пяти минут.

Рис. 4. Гемометр Сали

3. Специальной пипеткой прибавляют к смеси по каплям дистиллированную воду, перемешивая содержимое палочкой. Это продолжают до тех пор, пока цвет исследуемой жидкости не сравняется с окраской стандартного раствора.

4. Отмечают по шкале, на каком делении стоит уровень верхнего края мениска полученного раствора солянокислого гематина. Чтобы выразить результат в системе СИ (г/л), умножают найденную цифру на 10.

Источниками ошибок могут быть:

а) выцветшие стандартные растворы в старых гемометрах;

б) неточное соблюдение пятиминутной выдержки перед началом разведения (гематиновая окраска со временем усиливается);

в) попадание воздуха в капилляр с кровью.

В заключении следует указать, соответствует ли норме найденное количество гемоглобина.