Профильные вопросы
Для лечебного факультета
Изменения в системе крови при физической нагрузке. Роль депо крови в перераспределительных реакциях.
Для педиатрического факультета
Особенности количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы, количества гемоглобина, эритроцитов и СОЭ у детей.
Для стоматологического факультета
Физиологическое обоснование способов предотвращения и остановки кровотечения при операциях в ротовой полости.
Для медико-профилактического факультета
Изменения периферической крови при пониженном атмосферном давлении. Механизмы этих изменений.
Вопросы для фармацевтического факультета
Кровь как внутренняя среда организма. Понятие о системе крови, ее состав и количество. Основные функции крови.
Физико-химические свойства плазмы крови, их параметры, механизмы поддержания постоянства. Регуляция ОЦК.
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ), его механизм. Значение определения СОЭ для клиники.
Лимфа, ее состав, значение, механизмы образования.
Эритроциты, их количество, значение для организма.
Гемоглобин, его количество и значение. Соединения с различными газами.
Понятие о гемолизе.
Лейкоциты, их виды, строение, функции. Лейкоцитарная формула.
Основные механизмы регуляции постоянства клеточного состава крови.
10.Понятие о гемостазе, его значение для организма. Компоненты гемостаза.
11.Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз, его механизмы. Свойства и значение тромбоцитов.
12.Свёертывающая система крови. Плазменные факторы свертывания крови.
13.Современная схема свёртывания крови (гемокоагуляции).
14.Понятие о противосвёртывающей системе и фибринолизе.
15. Регуляция гемостаза.
16. Групповая дифференцировка крови человека. Понятие о Rh-факторе.
Лабораторные работы
Работа 1. Определение количества эритроцитов в крови (в счетной камере)
Цель работы: знакомство с классическим методом подсчета эритроцитов в периферической крови.
Для работы необходимы: исследуемая кровь, смеситель (меланжер) для эритроцитов, камера с сеткой Горяева, 3%-ный раствор хлористого натрия, микроскоп, спирт, вата, груша.
Ход работы
1. Разведение крови
Перед началом работы необходимо ознакомиться с устройством меланжера и с сеткой счетной камеры. Меланжер для подсчета эритроцитов представляет собой капилляр с ампулообразным расширением и с бусинкой красного цвета (Рис 1). На меланжер нанесены три метки: 0,5; 1,0; 101; кровь обычно набирают до метки 0,5, а затем добавляют физиологический раствор до метки 101, чем достигают разведения в 200 раз. При заборе крови и ее разведении, во избежание нарушения точности анализа нельзя допускать попадания пузырьков воздуха. Покачиванием смесителя, отверстия которого зажимают между пальцами, кровь тщательно перемешивают для равномерного распределения эритроцитов.
2. Заполнение счетной камеры
Счетная камера (Рис. 2) состоит из толстого прямоугольной формы стекла с двумя сетками Горяева, нанесенными на середине площади камеры. Кнаружи от желобов, образующих букву «Н», находятся две прямоугольные пластинки, к которым притирается шлифованное покровное стекло. Сетка Горяева (Рис. 3) состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых разделены поперечными и продольными полосами на 16 малых. Сторона малого квадрата составляет 1/20 мм, площадь – 1/400 мм2, глубина камеры – 1/10 мм, следовательно, объем камеры над малым квадратом равен 1/4000 мм3.
Перед заполнением камеры ее и покровное стекло промывают водой, протирают ватным тампоном, смоченным эфиром или спиртом, а затем сухой полотняной салфеткой. Затем притирают покровное стекло к боковым поверхностям камеры скользящими и давящими движениями больших пальцев обеих рук до появления радужных (ньютоновых) колец. Перед заполнением камеры выпускают на ватный тампон две-три капли содержимого из капилляра, затем заполняют камеру, нанося каплю разведенной крови на среднюю пластину у края покровного стекла. В силу капиллярности жидкость равномерно распределится над сеткой. После заполнения камеру оставляют на одну минуту для равномерного распределения и оседания эритроцитов.
Рис.1. Смесители для подсчёта эритроцитов и лейкоцитов.
Подсчет эритроцитов
Камеру кладут на предметный столик микроскопа, установленный горизонтально, и приступают к подсчету эритроцитов при малом увеличении микроскопа (объектив 8х, окуляр 10х или 15х). Поле зрения должно быть затемнено диафрагмой и несколько опущенным конденсором. Подсчитывают эритроциты в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых (всего в 5×16=80 малых квадратах), расположенных по диагонали. Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе квадратов, руководствуются правилом Егорова: считают эритроциты, находящиеся внутри квадрата и на его верхней и левой границах.
Рис.2. Общий вид счетной камеры.
Результаты подсчета фиксируют, определяют суммарное количество эритроцитов, найденных в 80 малых квадратах, и рассчитывают количество клеток в 1 мкл крови по формуле: Х = А•4000•200/80, где
Х – искомое число эритроцитов в 1 мкл;
А – число эритроцитов в 80 малых квадратах;
1/4000мм3 – объем разведенной крови над одним малым квадратом;
80 – число малых квадратов;
200 – степень разведения.
Полученное число умножают на 106 и получают содержание клеток в 1 л крови.
Ошибка метода составляет ±2-3%.
Возможные источники ошибок при подсчете эритроцитов
1.Образование сгустка во время взятия и разведения крови.
2.Несоблюдение условий, обеспечивающих должную высоту камеры (неправильный выбор покровного стекла и плохое его притирание к камере).
3.Проведение подсчета сразу после заполнения камеры, когда клетки еще не распределились равномерно и не осели.
4.Попадание воздуха в капилляр с кровью.
большой квадрат
малый квадрат
Рис. 3. Фрагмент сетки Горяева.
В протокол вносится изображение сетки Горяева с обозначением большого и малого квадратов, указывается количество эритроцитов в больших квадратах, а также приводятся формула расчета и полученный результат. В заключении сравнивают результаты подсчета с физиологической нормой. При значительном отклонении полученного результата от физиологической нормы следует исключить ошибки проведения работы.
Работа 2. Определение количества лейкоцитов
Цель работы: знакомство с классическим методом определения количества лейкоцитов в периферической крови.
Для работы необходимы: исследуемая кровь, меланжер для лейкоцитов, камера с сеткой Горяева, микроскоп, 3%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, спирт, вата, груша.