Микротренинг
.pdf
тех же научных целей. Значимую часть микрохирургического тренинга занимают неживотные модели.
К лабораторным животным также применимы понятия «боль» и «ди- стресс». – неприятное чувствительное или эмоциональное восприятие, ассоциированноеБоль с потенциальным или имеющим место повреждением ткани (IASP). – биологическийответ,с помощьюкоторогоживотноепытаетсяДистресссправиться с угрозой для своего гомеостаза [41].
Признаки боли и дистресса указаны в табл. 1 и на рис. 2.
|
|
|
Таблица 1 |
||
Потенциальные симптомы боли или дистресса животных |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Симптом |
Мыши |
Крысы |
|
Кролики |
|
Снижение потребления пищи и воды |
+ |
+ |
|
+ |
|
Снижение массы тела |
+ |
+ |
|
+ |
|
|
|
|
|
|
|
Немотивированная изоляция (животное прячется) |
+ |
+ |
|
+ |
|
Нанесение себе увечий (животное грызет |
+ |
+ |
|
+ |
|
конечности) |
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
НЦРВХ СО |
+ |
РАМН+ + |
|
||
Учащенное дыхание |
+ |
+ |
+ |
|
|
Дыхание открытым ртом |
+ |
+ |
+ |
|
|
Дыхание с участием живота |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Скрежетание зубами |
– |
+ |
+ |
|
|
Кусание/ворчание/агрессия |
– |
+ |
+ |
|
|
Замедление/убыстрение движений |
+ |
+ |
+ |
|
|
|
|
|
|
|
|
Взъерошенный вид (ощетиненность, |
+ |
+ |
+ |
|
|
всклоченность) |
|
||||
|
|
|
|
|
|
Аномальная поза (голова вжата в туловище, |
+ |
+ |
+ |
|
|
спина выгнута) |
|
||||
|
|
|
|
|
|
Беспокойный сон |
– |
– |
+ |
|
|
|
|
|
|
|
|
Слезотечение (включая порфирию), |
– |
+ |
+ |
|
|
снижение мигательного рефлекса |
|
||||
|
|
|
|
|
|
Расширенный зрачок |
– |
– |
+ |
|
|
Ригидность мышц или недостаточный тонус |
+ |
+ |
+ |
|
|
|
|
|
|
|
|
Признаки дегидратации, запавшие глаза |
+ |
+ |
+ |
|
|
Подергивание, дрожание, тремор |
+ |
+ |
+ |
|
|
|
|
|
|
|
|
Издавание звуков |
+ |
+ |
+ |
|
|
Покраснение, отек в месте вмешательства |
+ |
+ |
+ |
|
|
Повышенная саливация |
– |
– |
+ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
17
НЦРВХ СО РАМН
Рис. 2. Изменения мимики крысы в ответ на боль [22].
0 — изменения отсутствуют; 1 — умеренные изменения; 2 — выраженные изменения.
18
АдекватноеобезболиваниеАНЕСТЕЗИЯиседациялабораторныхживотных,какиправильныйуходзаними,являютсяобязанностьюисследователя.Существуют ингаляционный и инъекционный способы введения анестезирующего вещества.Инъекциюпроводятвнутривенно(в/в),интраперитонеально(и/п), внутримышечно(в/м)иподкожно(п/к).Способанестезиивыбираютисходя издоступностипрепаратовиособенностейисследования.Длямикрохирургического тренинга обычно используют разновидности инъекционного наркоза(табл.2).Угрызуновметаболизмнамногоинтенсивнее,чемучеловека,илекарственныевеществабыстреевыводятсяизорганизма,поэтому дозировки анестетиков значительно отличаются от таковых для человека. Многие вещества относятся к наркотическим, в связи с чем требуются специальные условия для их хранения и разрешение на применение.
|
|
|
|
|
Таблица 2 |
||
Инъекционные анестетики для применения у крыс |
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Препарат |
|
Доза |
Эффект |
Длительность |
|
Сон |
|
|
|
|
|
|
|||
(метод введения) |
мин |
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
НЦРВХ |
СО |
РАМН |
|||||
Ketamine/ |
75 |
мл/кг + |
Поверхностная |
20–30 |
120 |
|
|
Acepromasine |
2,5 мг/кг (и/п) |
анестезия |
|
||||
|
|
|
|
||||
Ketamine/ |
75 |
мл/кг + |
то же |
20–30 |
120 |
|
|
Diasepam |
5 мг/кг (и/п) |
|
|||||
|
|
|
|
|
|||
Ketamine/ |
75 |
мл/кг + |
Хирургическая |
20–30 |
|
120–240 |
|
Medetomidine |
0,5 мг/кг (и/п) |
анестезия |
|
||||
|
|
|
|
||||
Ketamine/ |
75 |
мл/кг + |
Поверхностная |
20–30 |
120 |
|
|
Midasolam |
5 мг/кг (и/п) |
анестезия |
|
||||
|
|
|
|
||||
Ketamine/ |
75–100 мг/кг + |
Хирургическая |
20–30 |
|
120–240 |
||
Xylasine |
10 |
мг/кг (и/п) |
анестезия |
|
|||
|
|
|
|
||||
Methohexital |
10–15 мг/кг (в/в) |
то же |
5 |
10 |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
Pentobarbitone |
40–50 мг/кг (и/п) |
Поверхностная |
15–60 |
|
120–240 |
||
анестезия |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
Propofol |
10 |
мг/кг (в/в) |
Хирургическая |
5 |
10 |
|
|
анестезия |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
Thiopentone |
30 |
мг/кг (в/в) |
то же |
10 |
15 |
|
|
50 |
мг/кг (и/п) |
|
|||||
|
|
|
|
|
|
||
Tiletamine/ |
40 |
мг/кг (и/п) |
Поверхностная |
15–25 |
|
60–120 |
|
Zolezepam |
анестезия |
|
|||||
|
|
|
|
|
|
||
Urethane* |
1,00 мг/кг (и/п) |
Хирургическая |
360–480 |
|
60–120 |
||
анестезия |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* Индуцирует опухоли, использовать только в безвозвратных экспериментах.
19
Лабораторные животные небольшие по размеру, поэтому объем вводимых растворов ограничен (табл. 3). При внутримышечных инъекциях – не более двух, при подкожных – до трех мест введения в день. Интраперитонеальное введение не должно быть частым из-за риска развития перитонита.
Таблица 3
Максимальные объемы препаратов для лабораторных животных при различных способах введения
Животные |
|
Доза (максимально вводимый объем), мл/кг |
|
|||||
per os |
|
п/к |
и/п |
в/м |
в/в |
|
в/в |
|
|
|
(быстро) |
(медленно) |
|||||
|
|
|
|
|
|
|||
Мыши |
10 (50) |
|
10 (40) |
20 (80) |
0,05* |
5 |
|
(25) |
|
(0,1)* |
|
||||||
Крысы |
10 (40) |
|
5 (10) |
10 (20) |
0,1* |
5 |
|
(20) |
|
(0,2)* |
|
||||||
Кролики |
10 (15) |
|
1 (2) |
5 (20) |
0,25 |
2 |
|
(10) |
|
(0,5) |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* Объем инъекции в одно место (мл).
НЦРВХВ случае операционной кровопотериКРОВОПСОТЕРЯили приРАМНзаборе крови на анализ следует руководствоваться параметрами, приведенными в табл. 4. При кровопотере 5 % от ОЦК животному на восстановление требуется 1 нед, 10 % – 2 нед.
|
|
|
|
|
|
|
|
Таблица 4 |
|
Приблизительный расчет объема кровопотери |
|
||||||
|
|
для лабораторных животных |
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Животные |
|
Общий объем |
|
Объем кровопотери, мл |
|
|||
(масса) |
|
крови, мл |
5 % |
|
10 % |
15 % |
|
20 % |
Мыши (25 г) |
|
1,8 |
0,1 |
|
0,2 |
0,3 |
|
0,4 |
Крысы (250 г) |
|
16 |
0,8 |
|
1,6 |
2,4 |
|
3,2 |
Кролики (4 кг) |
|
224 |
11 |
|
22 |
34 |
|
45 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Планируя эксперимент, следуетЭВТАНАЗИЯвыбрать гуманное его окончание. Эксперимент с использованием лабораторного животного должен быть завершен эвтаназией. В соответствии с классификацией AVMA (American Veterinary MedicalAssociation)выделяютприемлемые,условноприемлемые и неприемлемые методы эвтаназии.
20
аПриемлемые) барбитуратыметоды(большинство: видов животных); б) CO газ (большинство видов животных);
в) ингаляционная2 анестезия (большинство видов животных); г) микроволновое излучение, (мыши, крысы); д) трикаинметансульфат (рыбы, амфибии); е) эфир, угарный газ (опасно для персонала).
аУсловно) переломприемлемыешейногометодыотдела :позвоночника (птицы, мелкие грызуны, кролики);
б) декапитация (птицы, грызуны); в) повреждение спинного мозга;
г) различные фармакологические и физические методы. аНеприем) хлоралгидратемые мет, хлороформды: , цианид; б) декомпрессия; в) блокаторы нейромышечной передачи;
г) различные фармакологические и физические методы; д) генерированный сухим льдом СО2.
НЦРВХ СО РАМН
ОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ
Работа в лабораторииС ЛАБОРАТОРНЫМИсопряжена со следующимиЖИВОТНЫМИрисками: 1) аллергия (аллергены: моча, перхоть, шерсть и др.); 2) укусы (крысы, мыши), удары (кролики), царапины;
3) инфекционные заболевания (зоонозы: Hantavirus, Lymphocytic cho riomeningitis virus
); -
4) распространение заболевания среди лабораторных животных (по этому в виварии соблюдается карантинный режим: специальная одежда, сменнаяобувь,ограниченныйдоступкживотным,исследуемыеживотные не контактируют с выращиваемыми и между собой);
5) уколиглой(введениетоксичныхвеществ,патогенаилиопухолевых клеток по неосторожности); ном6)). вдыхание паров ядовитых веществ (формалин является канцероге-
Приработесживотнымивлабораториинеобходимособлюдатьследующиеправилаповедения.Обязательнымявляетсяношениечистойзащитнойодежды:лабораторныйхалат,колпак,маска,перчатки,сменнаяобувь. Находясь в лаборатории, не следует касаться рта и глаз. Запрещается есть, питьиноситьконтактные линзы. Особую осторожность нужнопроявлять при работе с иглами! Обращаться с животными деликатно и осторожно,
21
при необходимости использовать ограничительные приспособления или седацию. Помещение должно хорошо проветриваться, особенно при работе с ингаляционными анестетиками и формалином. Двери лаборатории необходимо всегда держать закрытыми и ограничивать вход в комнату к животным. После выхода из лаборатории следует вымыть руки и лицо.
НЦРВХ СО РАМН
22
Глава 2
ОРГАНИЗАЦИЯ МИКРОХИРУРГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ
Восновуорганизациисовременныхмикрохирургическихлабораторий
вбольшинстве развитых стран положено согласие этического комитета учреждениясрегистрациейвдепартаментезащитыживотных, допускающеготренингиэкспериментынадживотными(понашимданным,вРоссии такогосогласиянетребуется).Лабораториюобычновозглавляетквалифицированныйхирург(нейрохирург),имеющиймикрохирургическийопыти стажработы,еедеятельностькоординируетсяхирургическимотделением больницы или кафедрой хирургии университета. Одной из существенных особенностейНЦРВХорганизациилабораторииСОявляетсяРАМНпредоставлениесвободногодоступадругимклиническимилиобразовательнымучреждениямдля проведения микрохирургического тренинга. При этом устанавливается круглосуточный график работы (включая выходные дни), что позволяет болеегибкосочетатьтренировочныйкурссредиразличныхспециалистов иоптимизироватьиспользованиемикроскопов.Координирующийадминистраторсоставляетпрограммуирасписаниетренировокдляпрактикантов. Так, ординаторы, которые освоили базовые микрохирургические навыки, но не имеющие разрешения для проведения операций в клинике, могут продолжать обучение по более свободному графику [58, 60, 91].
Организуемая лаборатория по возможности должна располагаться отдельно от лечебных корпусов и находиться вблизи зданий, где могут содержаться животные. В лаборатории предусмотрены операционная и комната для конференций. Последняя имеет профессиональную библиотеку (с видеоматериалами, книгами и статьями по микрохирургии), оборудованную компьютером и литературным поисковиком. Операционная комната(площадьюнеменее20м2),расположеннаявосвещенном,хорошо проветриваемом помещении, оснащается микроскопами. Операционные стулья,желательнофиксированныекполу,располагаютсятакимобразом, чтобы два человека (стажер и тренер) находились напротив друг друга. Операционныйстулдолженрегулироватьсяповысоте,иметьподлокотники
23
и быть удобным. Необходимо наличие раковины с водопроводом и лотка для промывки использованных инструментов. Специальное стерилизационное оборудование может потребоваться при других исследованиях, но при тренинге нецелесообразно, так как соблюдение правил асептики и антисептики не обязательно (рис. 3).
НЦРВХ СО РАМН
Рис. 3. Общий вид лаборатории микронейрохирургии Yasargil в Китае
(Пекин, 2005 г.).
24
Глава 3 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
Профессиональное владение микрохирургической техникой – обязательное, но не единственное условие современной микрохирургии. Для эффективного проведения микрохирургических вмешательств необходимо наличие специального оборудования (операционного микроскопа, микроинструментов,шовногоматериала)исоблюдениерядатехнических условий. Многое зависит от качества микроинструментов. В данной главе нами представлены принципиальные типы нейрохирургического микроинструментария и описаны его основные качества.
НЦРВХСтажердолженОПЕРАЦИОННЫЙуметьнастраиватьСОмикроскопМИКРОСКОПиРАМНуверенноуправлятьим. Принципиальное устройство микроскопа схоже с использовавшимся в
школе на уроках биологии, но имеет некоторые отличия (рис. 4).
а |
б |
в |
|
Рис. 4. Современные микроскопы. |
|
а — лабораторный микроскоп Zeiss STEMI DV4; б — операционный микроскоп Leica; в — операционный микроскоп Zeiss Pentero 900. 1 — окуляры; 2 — объектив; 3 — регулятор степени увеличения; 4 — регулятор высоты (фокусного расстояния); 5 — регулятор освещения; 6 — рабочая «голова»; 7 — изгибающаяся «рука»; 8 — основание; 9 — встроенный компьютер.
25
Операционныймикроскоплибожесткофиксирован,либоимеетоснование – тяжелую платформу, придающую ему устойчивость и позволяющую избегать колебаний. У современных микроскопов там же находятся встроенный компьютер с программным обеспечением и дублирующая системаконтроля.Рабочая«голова»микроскопавключаетвсебяобъектив с линзой, направленный на операционное поле, окуляры – основной для хирурга и дополнительный для ассистента, ручки с кнопками-манипуля- торами (рис. 5). Возможна также установка манипулятора, зажимаемого губами. Некоторые модели микроскопов оснащены переносной педалью с кнопками-манипуляторами.
НЦРВХа СОб РАМНв
ис. 5. Настройка и управление микроскопом.
а — Zeiss OPMI 1; б — Zeiss Pentero; в — ножная педаль. 1 — регулятор увеличения линз окуляров (отдельно для левого и правого глаза); 2 — регулятор межзрачкового расстояния;
В современные3 — регулятор степоперационныени увеличения;микроскопы4 — егулятор фокусвмонтированого расстоянияэлектриче. -
ский мотор, обеспечивающий автоматические движения вверх и вниз, контролируемые при помощи ножной педали (рис. 5, ) или манипулятора, зажимаемого губами. Кроме того, можно установить дополнительную систему линз и окуляров для ассистента. Трехмерное пространственное изображение объекта формируется за счет его получения отдельно в каждом окуляре (рис. 6). Освещение операционного поля осуществляется коаксиальночерезлинзуобъективаотисточникасвета,вмонтированного в микроскоп. Это абсолютно необходимо для оперирования на глубоких структурах.
Несмотрянасложностьконструкциипоследнихмоделеймикроскопов, принципы работы с ними остаются прежними: 1) регулировка степени увеличения;2) регулировкафокусногорасстояния(ранниемоделиимеют ручную регулировку, современные – лазерную автокоррекцию).
– один из важных параметров. Указанное на рамкеФо усноелинзырасст, онояниедолжнолинзысоответствовать доступному операционному
26
