Бактериологический метод

1 день.Посевна ВСА и в среды накопления (маг­ниевую, селенитовую). Пересев из сред накопления через 6— 10 ч на ВСА. Культивирование сутки при 37⁰ С.

2 день. Пересев колоний черного цвета с ВСА на среду Олькеницкого (или Ресселя) для накопления чистой культуры.

3-й день. Учет характера роста на средах Ресселя или Олькеницкого, проверка чистоты выделенной культуры, пересев выделенной чистой культуры в сре­ды «пестрого» ряда, постановка ОРА с поливалентными и групповыми (А, В, С, Д, Е) адсорбированными сальмонеллезными сыворотками. При положительном результате с одной из групп сывороток, проводят РА с адсорбированными О-сыворотками, характерными для данной группы, а затем с монорецепторными Н-сыворотками (неспецифической и специфической фазами) для определения серогруппы и серовара сальмонеллы в соответствии со схемой Ка­уфмана-Уайта.

4-й день. Учет изменений в средах «пестрого» ряда. Формулировка ответа.

Серологический метод

Постановка РНГА с парными сыворотками крови больных, взятыми с интервалом в 7-10 дней и сальмонеллезными поливалентными и группо­выми (групп А, В, С, Д, Е) диагностикумами с целью выявления антител.

Биопроба. Материалом от больного производят пероральное заражение белых мы­шей, которые через 1-2 дня погибают от септицемии. При посеве крови из сердца и материала из внутренних органов выделяется культура сальмонелл.

Серологическое исследование - исследование с помощью РНГА парных сывороток крови больных, взятых с интервалом в 7-10 дней с сальмонеллезными поливалентными и группо­выми (группы А, В, С, Д, Е) диагностикумами. Диагностическое зна­чение имеет повышение титра антител в четыре и более раз.

Самостоятельная работа студентов

Изучить основные этапы бактериологического исследования метода диагностики сальмонеллёзов.

1. Учет посевов сальмонелл на среде Левина и Олькеницкого (демонстра­ция).

2. Контроль чистоты наделенной культуры сальмонелл (со среды Олькеницкого приготовлен мазок, окрашен его по Граму). Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные микропрепараты возбудителей сальмонеллёзов S.enterica spp. enterica ser. enteritidis, typhimurium, choleraesuis. Возбудители сальмонеллёзов — идентичные по морфоло­гии грамотрицательные палочки с закругленными концами.

3. Идентификация выделенной культуры возбудителя:

- по антигенным свойствам – учет ориентировочной реакции агглютинации на стекле с диагностическими монорецепторными сальмонеллезными агглютинирующими О- и Н сыворотками в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта;

- по биохимическим свойствам - определение биохимической активности изучаемой культуры по "пестрому" ряду Гисса или Пешкова (демонстрация). Обратить внимание на расщеп­ление глюкозы, отсутствие расщепления лактозы и сахарозы.

- по фаголизабельности (учет пробы с фагом - демонстрация)

4. Определение чувствительности выделенной культуры к ан­тибиотикам методом бумажных дисков (демонстрация).

Педиатрические аспекты темы

Постановка реакции типа Видаля при пищевых токсикоинфекциях имеет важное диагностическое значение у детей раннего возраста, т.к. процент положительных гемокультур и выделения возбудителя из испражнений невысок. Диагностическим титром яв­ляется положительная реакция с разведением сыворотки 1:100.

После изучения темы студент должен знать: таксономию, морфологические и биологические свойства возбудителей брюшного тифа, паратифов и сальмонеллезов, а также патогенез, эпидемиологию, основные клинические проявления и иммунитет; основные методы диагностики, специфической профилактики и лечения этих инфекций.

Изучив тему, студент должен уметь: уметь ставить РА на стекле и реакцию Видаля при брюшном тифе, оценивать результаты микробиологических анализов при бруцеллезе, лептоспирозе, боррелиозе, листериозе.

Тема 6. Микробиология бактериальных кишечных инфекций: патогенные кишечные палочки, иерсинии, кампилобактерии, хеликобактерии

Цель занятия: изучение биологических свойств основных возбудителей бактериальных кишечных инфекций - патогенных кишечных палочек, иерсиний, кампилобактерий, геликобактерий, методов их лабораторной диагностики, профилактики и лечения.