- •Министерство здравоохранения рф
- •Список сокращений
- •Частная микробиология
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Ознакомление с правилами взятия материала для микробиологического исследования
- •Методы диагностических микробиологических исследований Методы обнаружения возбудителя инфекции в материале от больного
- •Иммунохимические методы диагностики возбудителя или его антигенов в материале от больного
- •Биохимические и молекулярно-биологические методы диагностики
- •Серодиагностика и аллергодиагностика
- •Оценка результатов клинико-диагностических микробиологических исследований
- •Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций
- •Самостоятельная работа студентов
- •Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций.
- •Самостоятельная работа студентов
- •Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых гноеродными условно-патогенными грамотрицательными аэробными микроорганизмами.
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 2. Возбудители раневой анаэробной инфекции: анаэробной газовой инфекции, столбняка. Бактероиды.
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Микробиологическая диагностика анаэробной инфекции.
- •Самостоятельная работа студентов.
- •Микробиологическая диагностика столбняка.
- •Самостоятельная работа студентов.
- •4. Ознакомление с биопрепаратами, применяемыми для специфической профилактики и терапии столбняка:
- •Микробиологическая диагностика неклостридиальной анаэробной инфекции
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 3. Возбудители бактериальных зоонозных инфекций: чумы, туляремии, сибирской язвы
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Микробиологическая диагностика чумы.
- •Микроскопический метод
- •Бактериологический метод.
- •Биопроба
- •Самостоятельная работа студентов
- •Микробиологическая диагностика туляремии
- •Биологический и бактериологический метод.
- •Биопроба
- •Самостоятельная работа студентов
- •2. Серологический метод диагностики туляремии.
- •Микробиологическая диагностика сибирской язвы
- •Бактериологический метод.
- •Микроскопический метод.
- •Биопроба
- •Самостоятельная работа студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 4.Возбудители бактериальных зоонозных инфекций: бруцеллеза, лептоспироза, боррелиозов, листериоза
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Микробиологическая диагностика бруцеллеза
- •Бактериологический метод.
- •Биопроба
- •Самостоятельная работа студентов
- •Микробиологическая диагностика лептоспироза
- •Микроскопический метод.
- •Бактериологический метод.
- •Биопроба
- •Самостоятельная работа студентов
- •4. Знакомоство с биопрепаратами для профилактики и лечения лептоспироза.
- •Микробиологическая диагностика боррелиозов (возвратные тифы, болезнь Лайма)
- •Самостоятельная работа студентов
- •Микробиологическая диагностика листериоза
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 5. Микробиология бактериальных кишечных инфекций: сальмонеллы - возбудители брюшного тифа, паратифов и пищевых токсикоинфекций
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов Ознакомиться со схемой лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифов
- •Серологический метод
- •Самостоятельная работа студентов
- •1. Бактериологический метод – выделение гемокультуры:
- •2. Серологический метод диагностики тифо-паратифозных заболеваний.
- •Педиатрические аспекты темы
- •Микробиологическая диагностика сальмонеллезов
- •Серологический метод
- •Самостоятельная работа студентов
- •1. Учет посевов сальмонелл на среде Левина и Олькеницкого (демонстрация).
- •3. Идентификация выделенной культуры возбудителя:
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 6. Микробиология бактериальных кишечных инфекций: патогенные кишечные палочки, иерсинии, кампилобактерии, хеликобактерии
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Микробиологическая диагностика эшерихиозов
- •Серологический метод - ра, рнга, ифа с целью выявления антител к эшерихиям и их динамики (исследование парных сывороток) в процессе инфекции.
- •Самостоятельная работа студентов
- •Микробиологическая диагностика иерсиниозов
- •Самостоятельная работа студентов
- •Микробиологическая диагностика кампилобактериозов
- •Самостоятельная работа студентов
- •Микробиологическая диагностика геликобактериоза
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 7. Микробиология бактериальных кишечных инфекций: возбудители дизентерии, холеры. Пищевые интоксикации бактериальной природы
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Лабораторная диагностика бактериальной дизентерии.
- •Серологический метод. Постановка ра, рнга с целью выявления антител к шигеллам и их динамики (исследование парных сывороток) в процессе инфекции.
- •Самостоятельная работа студентов
- •3. Идентификация выделенной культуры шигелл:
- •Микробиологическая диагностика холеры
- •Серологический метод: Постановка ра, рнга, теста иммобилизации вибрионов с целью выявления антител к холерному вибриону и их динамики (исследование парных сывороток) в процессе инфекции.
- •Самостоятельная работа студентов
- •Пищевые интоксикации бактериальной природы Лабораторная диагностика ботулизма
- •Самостоятельная работа студентов
- •Лабораторная диагностика пищевых интоксикаций стафилококковой этиологии
- •Пищевые интоксикации бактериальной этиологии способны также вызывать:
- •Педиатрические аспекты темы.
- •Тема 8. Возбудители бактериальных воздушно-капельных инфекций: дифтерии, коклюша, гемофильной и пневмококковой инфекции
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Лабораторная диагностика дифтерии
- •Серологический метод
- •Самостоятельная работа студентов
- •4. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения дифтерии.
- •Микробиологическая диагностика коклюша и паракоклюша
- •Серологический метод - ра и рск с парными сыворотками больных для констатации нарастания титра антител с целью ретроспективного подтверждения коклюша и диагностики его атипичных форм.
- •Самостоятельная работа студентов
- •4. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения коклюша:
- •Педиатрические аспекты темы
- •Микробиологическая диагностика гемофильной инфекции
- •Микробиологическая диагностика бактериальных пневмоний и острых респираторных заболеваний (орз)
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 9. Возбудители бактериальных воздушно-капельных бактериальных инфекций: туберкулеза, менингококовой инфекции и актиномикоза
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Лабораторная диагностика туберкулеза и микобактериозов
- •Самостоятельная работа студентов
- •4. Ознакомление с препаратами, применяемыми для диагностики, лечения и профилактики туберкулеза:
- •Микробиологическая диагностика проказы
- •Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции
- •Самостоятельная работа студентов
- •4. Биопрепараты для диагностики и профилактики менингококковой инфекции:
- •Микробиологическая диагностика актиномикоза
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 10. Возбудители бактериальных инфекций, передающихся половым путем: гонореи, сифилиса, бактериального вагиноза, урогенитального хламидиоза и микоплазмоза.
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Микробиологическая диагностика бактериальных инфекций, передающихся половым путем
- •Микробиологическая диагностика сифилиса
- •Самостоятельная работа студентов
- •2. Серологическая диагностика сифилиса.
- •3. Ознакомиться с препаратами для диагностики и лечения сифилиса:
- •Микробиологическая диагностика мягкого шанкра
- •Микробиологическая диагностика гонореи
- •Самостоятельная работа студентов
- •3. Изучить препараты для диагностики и лечения гонореи.
- •Микробиологическая диагностика урогенитального микоплазмоза
- •Лабораторная диагностика урогенитального хламидиоза
- •Самостоятельная работа студентов
- •Микробиологическая диагностика бактериального вагиноза
- •Самостоятельная работа студентов.
- •Тема 11. Возбудители риккетсиозов.
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Микробиологическая диагностика риккетсиозов
- •Микробиологическая диагностика эпидемического сыпного тифа.
- •Микробиологическая диагностика эндемического сыпного тифа.
- •Микробиологическая диагностика Ку-лихорадка.
- •Микробиологическая диагностика эрлихиозов
- •Микробиологическая диагностика бартонеллезов
- •Самостоятельная работа студентов
- •3. Серологический метод диагностики сыпного тифа:
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 12. Общая вирусология: морфология и ультраструктура вирусов, методы их культивирования. Экспресс-диагностика вирусных инфекций.
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций
- •Взятие и подготовка материала для вирусологической диагностики
- •Вирусологический метод
- •Выделение вирусов на культурах клеток
- •Выделение вирусов на развивающихся куриных эмбрионах
- •Выделение вирусов на экспериментальных животных.
- •Экспресс-диагностика вирусных инфекций
- •Самостоятельная работа студентов
- •1. Изучение морфологии вирусов по электронограммам.
- •Тема 13. Общая вирусология: диагностика вирусных инфекций. Вирусологический метод исследования. Индикация и идентификация вирусов. Серологический метод диагностики вирусных инфекций.
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Методы выявления (индикация) и идентификации вирусов
- •Индикация вирусов
- •Идентификация вирусов
- •Учет вирусиндуцированных патологических изменений в чувствительных живых системах.
- •Серологический метод диагностики вирусных инфекций
- •Самостоятельная работа студентов
- •2. Индикация вирусов в клетках культуры ткани:
- •3. Выделение и индикация вирусов на ркэ.
- •4. Идентификация вирусов:
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Вопросы для самостоятельного изучения
- •Вирусологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций и гриппа
- •Самостоятельная работа студентов
- •Вирусологическая диагностика натуральной оспы
- •Вирусологическая диагностика герпеса
- •Вирусологическая диагностика кори
- •Вирусологическая диагностика краснухи.
- •Вирусологическая диагностика эпидемического паротита.
- •Самостоятельная работа студентов
- •Тема 15. Пикорнавирусы. Вирусы гепатитов. Ротавирусы
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Вопросы для самостоятельного изучения
- •Вирусологическая диагностика пикорнавирусных инфекций Энтеровирусные инфекции
- •Самостоятельная работа студентов
- •4. Изучить биопрепараты для профилактики, диагностики и лечения:
- •Лабораторная диагностика вирусных гепатитов
- •Гепатит а
- •Гепатит в
- •Другие гепатиты
- •Самостоятельная работа студентов
- •1. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов
- •Вирусологическая диагностика ротавирусных гастроэнтеритов.
- •Тема 16. Арбовирусы. Нейровирусы. Онкогенные вирусы. Медленные вирусные инфекции. Ретровирусы
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Вопросы для самостоятельного изучения
- •Вирусологическая диагностика нейровирусных инфекций Арбовирусные инфекции
- •Самостоятельная работа студентов
- •3. Изучить биопрепараты для профилактики, диагностики и лечения клещевого энцефалита:
- •Бешенство
- •Самостоятельная работа студентов
- •2. Изучить биопрепараты, используемые для специфической профилактики и лечения бешенства:
- •Лабораторная диагностика вич-инфекции
- •Самостоятельная работа студентов
- •Вирусологическая диагностика парвовирусных инфекций
- •Вирусологическая диагностика аренавирусных инфекций
- •Вирусологическая диагностика филовирусных инфекций (Марбургская лихорадка и лихорадка Эбола)
- •Тема 17. Патогенные грибы. Возбудители глубоких и субкутанных микозов, дерматомикозов, оппортунистических микозов
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Элементы общей микологии и принципы лабораторной диагностики микозов Биологические свойства грибов
- •Лабораторная диагностика микозов
- •Лабораторная диагностика отдельных микозов Лабораторная диагностика глубоких (системных) микозов
- •Криптокккоз
- •Североамериканский бластомикоз (болезнь Джилкрайста—Стокса)
- •Южноамериканский бластомикоз (паракокцидиоидоз)
- •Гистоплазмоз
- •Кокцидиомикоз
- •Лабораторная диагностика подкожных (субкутанных) микозов Споротрихоз
- •Хромомикоз
- •Лабораторная диагностика эпидермомикозов Рубромикоз (руброфития).
- •Эпидермофития паховая.
- •Эпидермофития стоп.
- •Трихомикозы Трихофития
- •Микроспория.
- •Фавус (парша).
- •Лабораторная диагностика поверхностных микозов
- •Лабораторная диагностика микозов, вызываемых условно-патогенными грибами (оппортунистические микозы)
- •Кандидоз (кандидамикоз)
- •Другие оппортунистические микозы
- •Аспергиллез
- •Пенициллиоз
- •Фикомикоз (мукороз)
- •Пневмоцистоз
- •Самостоятельная работ студентов Лабораторная диагностика эпидермомикозов.
- •Лабораторная диагностика кандидозов.
- •Лабораторная диагностика глубоких микозов.
- •2. Серологический метод:
- •Педиатрические аспекты темы
- •Тема 18. Микробиологическая диагностика протозойных инфекций
- •Перечень конкретных учебно-целевых вопросов
- •Основные методы лабораторной диагностики протозойных инфекций
- •Малярия
- •Криптоспоридиоз
- •Токсоплазмоз
- •Трипаносомоз
- •Лейшманиоз
- •Лямблиоз
- •Трихомониаз
- •Амебиаз
- •Балантидиаз
- •Самостоятельная работ студентов
- •Педиатрические аспекты темы
- •Приложение 1
- •Правила взятия и доставки биологических материалов для
- •Микробиологических исследований
- •Взятие крови.
- •Взятие спинномозговой жидкости
- •Взятие мочи
- •Взятие желчи.
- •Взятие материала из дыхательных путей
- •Взятие материала из уха.
- •Взятие отделяемого из ран, язв, брюшной полости
- •Взятие материала из глаз.
- •Взятие материала из женских половых органов
- •Взятие материала при аутопсии
- •Взятие, условия хранения и доставки венозной крови для проведения ифа и пцр.
- •Правила взятия и доставки биологических материалов для вирусологических исследований
Серологический метод: Постановка ра, рнга, теста иммобилизации вибрионов с целью выявления антител к холерному вибриону и их динамики (исследование парных сывороток) в процессе инфекции.
Экспресс-методы:
прямая и непрямая РИФ, РНГА
с иммуноглобулиновыми эритроцитарными
диагностикумами,
реакция
иммобилизации вибрионов с противохолерными
сыворотками с целью обнаружения
холерного вибриона в исследуемом
материале.
Четвертый этап. (через 18-24 ч от начала анализа). Изучают и отбирают с помощью стереомикроскопа типичные для холерного вибриона колонии на всех плотных средах. Холерный вибрион образует прозрачные, круглые, диаметром 1-2 мм, гладкие, плоские, гомогенные, с ровными краями колонии, имеющие голубоватый оттенок и маслянистую консистенцию. На агаре TCBS колонии холерного вибриона ярко-желтые на зеленом фоне среды, на среде Монсура — полупрозрачные бесцветные с темным центром. Колонии проверяют на наличие оксидазы (холерные вибрионы оксидазоположительны), ставят РА на стекле с холерными сыворотками О-1, О-139 и RO, а также специфическую иммунофлюоресценцию.
Положительная РА или ИФМ в сочетании с типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами выделенной культуры позволяет выдать предварительный положительный ответ.
Пятый этап проводится через 24 —36 ч от начала исследования. На этом этапе изучают и отбирают характерные для холерного вибриона культуры на среде Ресселя, на которой холерный вибрион расщепляет сахарозу, что сопровождается покраснением среды в столбике без образования газа, но не ферментирует лактозу (отсутствие изменений скошенной части среды). Со среды Ресселя готовят мазки в окраске по Граму с целью обнаружения характерных по морфологическим свойствам вибрионов, проверяют наличие подвижности и оксидазы, ставят РА с холерными сыворотками (О-1, RO, Огава, Инаба, при отрицательном результате - с сывороткой О-139) и при наличии положительных результатов выдают ответ о выделении соответствующего холерного вибриона.
Окончательную идентификацию оксидазопопожительных культур проводят, используя сокращенную или полную схемы (табл. 15).
Таблица 15. Дифференциация холерных вибрионов
-
Тесты
V.cholerae
asiaticae
V.cholerae
el-tor
НАГ
Агглютинация О-сывороткой
+
+
-
Агглютинация сыворотками Инаба и Огава
+
+
-
Лизис фагами:
Холерный фаг С (фаг IV)
Фаг Эль-Тор
+
-
-
+
+
+
Агглютинация куриных эритроцитов
-
+
+
Гемолиз эритроцитов барана
-
+
+
Рост на среде с полимиксином
-
+
+
Гексаминовый тест
-
+
+
Реакция Фогес-Проскауэра
(образование ацетилметилкарбинола)
-
+
+
Сокращенная схема предполагает постановку развернутой РА с сыворотками Инаба и Огава, пробы с диагностическими холерными фагами, определение ферментативной группы по Хейбергу. Полная схема дополнительно включает тесты для дифференциации биоваров холерного вибриона (классического и Эль-Тор), в частности, определение гемагглютинирующих и гемолитических свойств, чувствительности к полимиксину, способности давать положительную реакцию Фогес-Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола - ацетоина из глюкозы). Ацетоин определяют добавлением в культуру, выращенную на глюкозо-фосфатном бульоне Кларка, 5% α-нафтола и 40%-го гидроксида калия; при встряхивании пробирок среда окрашивается в розовый или рубиново-красный цвет.
Для ускоренной биохимической идентификации холерных вибрионов и их дифференциации от холероподобных и нехолероподобных вибрионов используют систему индикаторных бумажных дисков (СИБ), в состав которой входят тесты на оксидазу, индол, ферментацию лактозы, глюкозы, сахарозы, маннозы, арабинозы, маннита, инозита, аргинина, лизина и орнитина.
Шестой этап (выполняется через 36-48 ч от начала анализа) - окончательная идентификация выделенных культур, определение их чувствительности к антибиотикам, формулировка окончательного ответа о выделении холерного вибриона с указанием биовара, серогруппы (серовара) и эпидемической значимости по косвенным биологическим признакам (гемолитической активности, группе Хейберга и др.). Типичные культуры Vibrio cholerae представляют собой грамотрицательные изогнутые в виде запятой или прямые полиморфные активно подвижные палочки, обладающие оксидазой, разлагающие глюкозу с образованием кислоты без газа, декарбоксилирующие лизин и орнитин, но не ферментирующие аргинин, принадлежащие к 1-й (реже 2-й) группе Хейберга, агглютинирующиеся холерными сыворотками и лизирующиеся диагностическими фагами. Если выделенная культура не агглютинируется сыворотками к О1 и О139, ее относят к группе НАГ-вибрионов, а при наличии соответствующих сывороток определяют ее принадлежность к другой серогруппе. Токсигенные штаммы холерных вибрионов серогрупп О и О139 обычно не лизируют бараньи эритроциты, относятся к 1-й группе Хейберга (ферментируют маннозу и сахарозу, но не арабинозу), лизируются определенными фагами в комплексном методе с применением ХДФ.
Вирулентность холерных вибрионов определяют в специализированных лабораториях путем внутрикишечного заражения кроликов-сосунков, а также методами генодиагностики (ПЦР или ДНК-ДНК-гибридизация с целью определения гена, ответственного за выработку токсина).
Серодиагностика является дополнительным методом лабораторной диагностики холеры. Исследуют парные сыворотки крови больных, взятые с интервалом в 6-8 дней, с целью выявления агглютининов с помощью РА (диагностический титр 1:40 и выше), антитоксинов с помощью РНГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим диагностикумом (диагностический титр - 1: 160) и вибриоцидных антител с помощью реакции иммобилизации вибрионов (диагностический титр1:1000). Учитывается также нарастание титра антител (не менее чем в 4 раза) в процессе инфекции.
Экспресс-диагностика - прямая и непрямая РИФ с использованием специфических О-холерных сывороток серогрупп 01 и 0139, меченых изотиоцианатом флюоресцеина; РНГА со специфическими иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами. Ставят также реакцию иммобилизации вибрионов с теми же сыворотками (2 капли материала наносят на предметное стекло, в одну из них вносят каплю сыворотки О1 или О139 в разведении 1: 100, в другую каплю ФР - контроль). Готовят препараты «раздавленной» капли, которые исследуют с помощью темнопольного, фазово-контрастного или обычного микроскопа с опущенным конденсором при увеличении 400 - 600. Положительная реакция характеризуется потерей подвижности вибрионов и их склеиванием.