Выделение вирусов на развивающихся куриных эмбрионах

Для культивирования вирусов используют 6-15-дневные ку­риные эмбрионы. Заражение осуществляют на хорион-аллантоисную оболочку (ХАО), в желточный мешок, полость амниона и аллантоиса.

При заражении на ХАО скорлупу обрабатывают спиртом, йодом и снова спир­том. Скорлупу прокалывают над воздушным мешком, а сбоку в скорлупе делают отверстие размером 7x2 мм. Не повреждая оболочку под скорлупой, короткой тонкой иглой шприца наносят на ХАО 0,1—0,2 мл вирусосодержащего материала. Заражение в полость аллантоиса осуществляют путем введения исследуе­мого материала шприцем на глу­бину 10—15 мм через боковое отверстие в скорлупе.

В полость амниона вирусосодержащий матери­ал вводят через отверстие на тупом конце яйца, при этом игла шприца должна быть направлена к телу эмбриона.

Дефекты скорлупы заливают стерильным парафином и эмбрионы помещают в термостат.

Выделение вирусов на экспериментальных животных.

Экспериментальные животные в вирусологии применяются для диагностики вирусных инфекций, получения иммунных противовирусных сывороток и компонентов крови (эритроцитов, лейкоцитов, плазмы и т.д.), моделирования вирусных инфекций с научными целями для изучения патогенеза, иммунитета, патоморфологии и т.д., а также для разработки способов специфической и неспецифической про­филактики и лечения вирусных инфекций.

В вирусологии в качестве экспериментальных животных наиболее часто используются белые мыши, морские свинки, кролики, хомячки, хлопковые крысы, обезьяны. Чувствительной моделью при ряде вирусных инфекций являются новорожденные грызуны.

Правила заражения и вскрытия экспериментальных животных при ви­русных и бактериальных инфекциях идентичны.

Экспресс-диагностика вирусных инфекций

Экспресс-диагностика вирусных инфек­ций применяется для выявления вирусов или их антигенов в различных видах клинического ма­териал с помощью методов, характеризующихся высокой специфич­ностью, чувствительностью, информативностью и быстротой исполнения.

Реакция иммунофлюоресценции (прямой и непрямой методы РИФ) применяется для выявления вируса в материале, полученном от больных, в инфицированных культу­рах клеток и в организме чувствительных животных.

Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ) отличается возможностью одновременной концентрации вируса и его идентификации с помощью специфической противовирусной сыворотки. Для этого вируссодержащий материал обрабатывают противовирусной сывороткой, затем добавляют фосфорно-вольфрамовую кисло­ту или уранилацетат, смесь наносят на пленку (под­ложку) и высушивают. При электронной микроскопии при положительном результате находят скопления вирусных частиц. ИЭМ применяют для выявления в исследуемом мате­риале полиовирусов, цитомегаловирусов, вирусов гепатита А и В, некультивируемых вирусов (аденовирусов в ткани миндалин, энтеро- и ротавирусов в фекалиях, вирусов оспы в ос­пенном детрите).

Встречный иммуноэлектрофорез обычно применяется для обнаружения в сыворотках крови больных вирусных антигенов (например, HBsAg у больных гепатитом В). Реакцию ставят на стеклянных пластинах в слое агаре, в котором вырезают два параллельных ряда лунок. Сыворотки крови, содержащие антигены по­мещают в лунки, расположенные ближе к катоду, а соответствующие противовирусные сыворотки (антитела) - в лунки, находящиеся ближе к аноду, после чего проводят электрофорез, при котором HBsAg, с отрицательным зарядом передвигается к аноду, а ан­титела — к катоду. Учет реакции осуществляется через 12-24 часа, положительные результаты реакции характеризуются образованием линий преципитации между определяемым антигеном (HBsAg) и специфическим антителом.

Реакция гемадсорбции на твердой основе (РгадТО). Лунки полистироловых планшетов обрабатывают иммуноглобулином или иммунной сывороткой (например, против ротавирусов), вносят в них исследуемый вируссодержащий материал, через 30-60 мин лунки промывают буферным раствором, после чего добавляют взвесь сенсибилизированных специфическим иммуноглобулином эритроцитов и спустя 30-60 мин производят учет по наличию гемагглютинации. Если в исследуемом материале содержится специфический вирусный антиген, он соединя­ется с антителами иммуноглобулина (или сыворотки), адсорбированными на поверхности лунок, а затем с иммуноглобулинами на поверхности эритроцитов, в ре­зультате чего происходит гемагглютинация. В опи­санной модификации реакция применяется для выявления антигенов ротавирусов и других вирусов в фекалиях больных.