Серологический метод - ра и рск с парными сыворотками больных для констатации нарастания титра антител с целью ретроспективного подтверждения коклюша и диагностики его атипичных форм.

Генодиагностика -ПЦР для обнаружения специфических фрагментов ДНК возбудителя коклюша.

Микроскопический методдля диагностики коклюша и паракоклюша не применяется. В качестве экспресс-метода можно использовать ИФМ.

Бактериологический методявляется основным в лабораторной диагностике коклюша и паракоклюша. Материал для исследования берут с помощью стерильного носоглоточного ватного тампона, у маленьких детей – тампоном на тонкой эластичной проволоке, а также методом «кашлевых пластинок» (в момент приступа кашля открытую чашку Петри с питательной средой подносят ко рту ребенка и держат в течение 6-8 кашлевых толчков). Для посева чаще всего используют казеиново-угольный агар (КУА), а также кровяной или картофельно-глицериновый кровяной агар (среда Борде-Жангу), содержащие пенициллин для подавления роста сопутствующей микрофлоры. Бордетеллы вырастают при температуре 37⁰ С через 48-72 часа в виде мелких (около 1 мм в диаметре), выпуклых, блестящих колоний, напоминая капельки ртути (рис. 17). Из колоний готовят мазки и окрашивают их по Граму. При наличии в препаратах мелких овоидных грамотрицательных палочек ставят реакцию агглютинации с коклюшной и паракоклюшной сыворотками и делают пересев для выделения чистой культуры. Чистую культуру идентифицируют на основании изучения комплекса биологических свойств (табл. 17).Bordetella pertussisне растет на простых питательных средах, не меняет цвета специальных сред. Серотипирование проводится с помощью РА на стекле с адсорбированным факторными сыворотками. Фактор (антиген) 7 является родовым, общим для всех бордетелл, фактор 1 специфичен дляBordetella pertussis, фактор 14 – дляBordetella parapertussisфактор 12 – дляBordetella bronchiseptica.

Рис. 17. Колонии Bordetella pertussis на КУА (выпуклые, блестящие в виде капелек ртути)

Таблица 17. Биологические свойства некоторых представителей рода Bordetella

Свойства	B. pertussis	B. parapertussis	B. bronchiseptica
Рост на МПА	-	+ (коричневая окраска)	+
Рост на МПА с тирозином	-	+ (коричневая окраска)	+
Подвижность	-	-	+
Цвет на кровяном МПА	-	Буро-коричневый	-
Цвет на КУА	-	Потемнение	-
Уреаза	-	+	+
Оксидаза	+	-	+
Утилизация цитрата	-	-	+
Родовой антиген	7	7	7
Видовой антиген	1	14	12

Обозначения: (+)- наличие признака, (-) – отсутствие признака.

Серодиагностика. Применяется РА и РСК (как правило, с парными сыворотками больных для констатации нарастания титра антител) с целью ретроспективного подтверждения диагноза и диагностики атипичных форм коклюша. Диагностический титр 1:20.

Генодиагностика.Разработана ПЦР для обнаружения ДНК возбудителя коклюша.

Самостоятельная работа студентов

1. Изучить морфологические и тинкториальные свойства возбудителя коклюша(Bordetella pertussis)в демонстра­ционных препаратах из чистой культуры

2. Бактериологический метод.Изучить культуральные свойства возбудителя коклюша культи­вируются на казеиново-угольном агаре КУА или на среде Борде-Жангу (картофельно-глицериновый МПА с кровью) - демонстрация. КолонииBordetella pertussisмелкие, выпуклые,блестящие в виде капелек ртути. При микроскопии обнаруживают мелкие овоидные грамотрицательные палочки. Изучение ферментативных и антигенных свойств палочки коклюша (демонстрация в соответствии с табл. 17).

3. Серологический метод.Учесть демонстрационные РА и РСК, поставленные с парными сыворотками крови детей (10 и 21 дни болезни) с диагнозом «подозрение на коклюш». Диагностический титр 1:20