Южноамериканский бластомикоз (паракокцидиоидоз)

Встречается только в странах Юж­ной Америки, возбудителем является двухфазный гриб Paracoccidioides brasiliensis, поражающий кожу, слизи­стую оболочку полости рта и носовой части глотки, внутренние органы, лимфатические узлы.Возбудитель заболевания обитает на растениях и в почве. Зараже­ние происходит аэрогенным путем или при проникновении гриба через слизистую оболочку полости рта в результате ее травмировании при чистке зубов веточкой растения.

Микроскопический метод – изучение нативных или окрашенных по Граму, Романовскому—Гимзе и другими методами мазков из гноя, мокроты, отделяемого свищей, биоптатов и т.д. Клетки гриба круглые или эллипсоидные, крупные (от 30 до 60 мкм), окруженные толстой оболочкой. Материнская клетка окру­жена мелкими (2—10 мкм) дочерними бластоконидиями, приобретая характерный вид короны или корабельного штурвала. В отли­чие от возбудителя бластомикоза место соединения дочерних кле­ток с материнской узкое. Окончательный диагноз устанавливают после выделения и идентификации возбудителя.

Микологический метод. Гриб медленно растет на питательных средах, образуя через 3-4 недели культивирования при 37⁰ С белые или кремовые колонии, в мазках из которых обнаруживают дрожжевые клетки, раз­мером 40-50 мкм, окруженные большим числом бластоконидий на узком основании (вид «корабельного штурвала»). При более длитель­ном культивировании появляются признаки мицелиального рос­та. Идентификация гриба проводится с помощью реакции иммунодиффузии с использованием диагностической иммунной сыворотки для определения типа экстраги­руемого экзоантигена.

Дрожжевая форма возникает при выращивании культуры гриба при 37⁰ С, колонии в этой форме гладкие или складчатые, сходные с колониями дрожжеподобных грибов. В мазках из колоний видны овальные и круглые клетки крупного размера, с единичными или множественными почками или без них, напоминая тканевые формы гриба.

Мицелиальная форма возникает при выращивании культуры при температуре до 25⁰ С, характеризуется ростом складчатых колоний, покрытых в центре беловато-сероватым, а затем - желтоватым пушком. Под микроскопом видны ветвящийся мицелий и овальные конидии, диаметром 3,0-3,5мкм, которые располагаются по бокам мицелиальных клеток.

Для лабораторной диагностики южноамериканского бластомикоза (паракокцидиоидоза) применяют также методы серологической и аллергической диагностики, биопробу, ПЦР.

Гистоплазмоз

Возбудитель гистоплазмоза - диморфный гриб Histoplasma capsulatum вызывает широко распространенный природно-очаговый микоз в регионах с теплым климатом. В России гистоплазмоз встречается в виде спорадических случаев.

Совершенная стадия гриба является аскомицетом и имеет название Emmonsietla capsulata. Возбудитель гистоплазмоза может иметь дрожжевую (пара­зитарная форма, встречается в организме человека и животных или развивается на соответствующих искусственных средах), а также мицелиальную форму, свойственную природным и лабораторным штаммам. Дрожжевая форма в тканях и патологическом материале имеет вид одноядерных клеток округлой или грушевидной формы, размером 2-4мкм, с клеточной оболочкой, капсулой и почкой на более узком конце клетки и ядром, которое вдвое меньше клетки. Характерным для тканевой формы является расположение внутри макрофагов, гигантских клеток и клеток ретикулоэндотелиальной системы; реже клетки гриба лежат свободно и напоминают тканевые формы лейшманий.

Гистоплазма обитает в почве, загрязненной пометом птиц и летучих мышей, а также в гнездах птиц. Заражение происхо­дит аэрогенным путем при вдыхании пыли со спорами гриба. Для гистоплазмоза типичны острая или хроническая пневмония, поражение кожных покровов и слизистых оболочек, внутренних органов, развитие анемии, перитонита, менингоэнцефалита и т.д. Гистоплазмы поражают мононуклеарные фагоциты с формированием очагов казеозного некроза, последующим фиброзом и кальцинацией.

Материалом для иссле­дования является отделяемое язвенных поражений кожи и слизистой оболочки, мокрота, кровь, моча, спинномозговая жид­кость, пунктаты костного мозга, подкожной клетчатки. Применяются следующие методы лабораторной диагностики.

Микроскопический метод - исследование мазков из патологического материала или гистологических срезов поз­воляет выявить овальные дрожжеподобные одиночные или почкующие­ся клетки гриба, размером 10—15 мкм (рис. 34), а также микроконидии, размером 3-5 мкм. Результаты микроскопического исследования должны быть подтверждены выделением чистой культуры гриба.

Рис. 34. Возбудитель гистоплазмоза (Histoplasma capsulatum) в исследуемом материале.

Микологический метод. Исследуемый материал засевают на среду Сабуро, или другие питательные среды для грибов, посевы инкубируют при температуре 25-30⁰ С и 37⁰ С в течение 3-6 недель. Гистоплазмы образуют блестящие беловатые или коричневатые дрожжеподобные коло­нии мягкой консистенции, которые состоят из округлых клеток диаметром 4 — 5 мкм с мелкими почками на тонких ножках. При более низкой температуре инкубирования возбудитель образует белый волокнистый мицелий, образованный в зрелых колониях бугорчатыми макроконидиями и/или мелкими каплевидными ко­нидиями. Выделенную культуру идентифицируют по морфологическим и культуральным признакам, а также по антигенной структуре (реакция иммунодиффузии с диагностической сывороткой к антигенам гриба).

На среде Сабуро при температуре 25-30⁰ С характерен рост аэробной мицелиальной формы в виде пушистых колоний, цвет которых варьирует от белого до корич­невого. Мицелий в этих колониях септированный, ветвистый, многоядерный, диаметром до 5мкм. Макроконидии крупные, круглые или грушевидные, диаметром 10-25мкм, с шиловидными выростами, располагаются на концах воздушных нитей мицелия. Имеются хламидоспоры. Микроконидии гладкостенные, округлые, грушевидные или сигарообразные, размером 2-6мкм.

Дрожжевая форма гистоплазмы относится к факультативным анаэробам или микроаэрофилам и вырастает на кровяных средах с глюкозой при температуре 35-37⁰ С и рН 7,2-7,6. Колонии дрожжевой формы мелкие, блестящие, выпуклые, иногда складчатые, плотной консистенции, окрашенные в белый, серый, желтый, коричневый цвет. Клетки гриба овальной формы, размером 1,5-3,5мкм, размножаются только почкованием; почки образуются на одном или на двух полюсах, иногда аполярно. Может образовываться псевдомице­лий: почкующиеся дрожжеподобные клетки располагаются цепочками и нитями.

Серологический метод - постановка РИФ, РА, РИД и РСК с сывороткой крови больного гистоплазмозом и антигенами возбудителя гистоплазмоза (гистоплазмином, полученным из гифов гриба, или антигенами дрожжевой формы гриба) с целью определения антител к Histoplasma capsulatum.

Аллергический метод - постановка внутрикожной аллергической пробы с гистоплазмином. Методы им­мунодиагностики имеют второстепенное значение в связи с наличием перекре­стных реакций и позднего появления положительного результата.

Биопроба - внутрибрюшинное заражение исследуемым материалом белых мышей или золотистых хомячков. Через 1 мес после заражения животных умерщвляют и внутренние органы исследуют микологическим методом с целью выделения и идентификации чистой культуры гриба

Генодиагностика. Разработаны методы ПЦР-диагностики гистоплазмоза.