Материально-техническое оснащение

1.Инструменты и оборудование: Планшеты, матрасы, питательные среды, буферные растворы для культур клеток. Серологические реакции. Наборы диагностикумов и диагностических сывороток для серодиагностики вирусных инфекций. Микроскоп.

2.Схемы и таблицы: «Строение вируса гепатита В», «Схема иммуноферментного анализа».

Контрольные вопросы

1. Назовите особенности строения вируса гепатита В. Перечислите антигены вируса гепатита В.

2. Перечислите механизмы и пути инфицирования человека вирусным гепатитом В.

3. Дайте характеристику основным стадиям патогенеза гепатита В: чувствительные клетки, механизм проникновения, основные этапы репродукции, выход вирусных частиц из пораженных клеток.

4. Перечислите клинические симптомы и осложнения гепатита В.

5. Какие методы диагностики используют для подтверждения клинического диагноза «Гепатит В»?

6. Перечислите основные мероприятия неспецифической профилактики гепатита В в стоматологических учреждениях.

7. Перечислите иммунобиологические препараты, используемые для специфической профилактики гепатита В.

Выполнение лабораторной работы

1. Изучить схему серологической диагностики вирусного гепатита В.

2. Изучить по демонстрационным таблицам схему строения вируса гепатита В.

3. Изучить по демонстрационным таблицам механизмы репродукции гепадновирусов в пораженных клетках.

4. Ознакомиться с демонстрационными тест-системами для диагностики вирусного гепатита В.

5. Оценить результаты ИФА при серодиагностике гепатита В.

6. Познакомиться с биологическими препаратами для диагностики, лечения и профилактики вирусного гепатита В.

7. Решение ситуационных задач.

8. Оформить протокол.

Правила оформления протокола

1. Ответить на контрольные вопросы.

2. Зарисовать по демонстрационной таблице схему строения вируса гепатита В.

3. Записать основные серологические маркеры гепатита В: аббревиатуры и полные названия.

4. Зарисовать графически по демонстрационным таблицам схемы серологической диагностики гепатита В.

5. Учесть демонстрационный ИФА при серодиагностике гепатита В: записать ингредиенты, схематично зарисовать результат реакции. Оценить результат.

6. Дать характеристику иммунобиологическим препаратам, применяемым для специфического лечения и профилактики вирусного гепатита В.

7. Записать интерпретацию результатов микробиологических исследований пациентов с герпетической инфекцией.

Дополнительный материал

Гепатит В. Вирус гепатита В включён в состав рода Orthohepadnavirus семейства Hepadnaviridae. Основные Аг частиц Дейна: поверхностный HbsAg и сердцевинный HbcAg. AT против HbsAg и HbcAg появляются в течение заболевания. Наличие AT против HbsAg прямо связано с невосприимчивостью к инфекции (постинфекционный или поствакцинальный иммунитет). HbsAg появляется в крови через 1,5 мес. После инфицирования; постоянно циркулирует в сыворотке инфицированных лиц, а его очищенные агрегаты входят в состав вакцины против вируса гепатита В. HbsAg включает два полипептидных фрагмента: preS-обладает выраженными иммуногенными свойствами (рекомбинантный продукт можно использовать для приготовления вакцинных препаратов); preS2 — полиглобулиновый рецептор, приводящий к адсорбции вируса на гепатоцитах. HbcAg сердцевинный представлен единственным антигенным типом; его обнаруживают только в сердцевине частиц Дейна. Аг маркирует репликацию вируса в гепатоцитах. Может быть обнаружен только при морфологическом исследовании биоптатов или аутопсийного материала печени. В крови в свободном виде его не определяют. HbeAg нe входит в состав частиц Дейна, но связан с ними, так как появляется в сыворотке в инкубационном периоде, сразу мосле появления HbsAg. Образование HbеAg транслируется РНК, содержащей участки сердцевинного Аг и его предшественника. После завершения трансляции образующаяся молекула HbeAg выводится из клетки. Функции HbeAg неизвестны; тем не менее HbeAg можно расценивать как наиболее чувствительный диагностический показатель активной инфекции. Обнаружение HbeAg у пациентов с хроническим гепатитом указывает на активацию процесса, что представляет высокую эпидемическую опасность. Аг может отсутствовать при инфекции, вызванной мутантным штаммом вируса. HbxAg — наименее изученный Аг. Предположительно опосредует злокачественную трансформацию клеток печени. Осложнения хронической формы гепатита В обусловлены хроническим воспалением и некротическими процессами в паренхиме печени; основные осложнения — цирроз и первичная карцинома печени. Показана чёткая связь между злокачественной трансформацией гепатоцитов и перенесённым вирусным гепатитом В. Принципы микробиологической диагностики гепатита В. Маркеры репликации вируса гепатита В — HbeAg, AT (IgM) к HbсAg, ДНК вируса и вирусная ДНК-полимераза, Для выявления HbsAg и HbeAg применяют ИФА и РНГА; исследования дополняют выявлением ДНК вируса гепатита В и вирусной ДНК-полимеразы. На наличие «свежей» инфекции указывают высокие титры HbsAg и IgM к HbsAg и HbeAg. У пациентов с клинически проявляющимся гепатитом В титр HbsAg сначала растёт, а затем (по мере развития иммунных реакций) снижается. AT к HbsAg можно выявить только через несколько недель, что объясняют их активным связыванием в иммунные комплексы. В течение этого периода (так называемого «окна») можно обнаружить лишь AT к HbeAg. Важный диагностический маркер инфицирования, особенно при отрицательных результатах выявления HbsAg.

IgM к HbcAg. Один из наиболее ранних сывороточных маркеров вирусного гепатита В. При хроническом гепатите маркируют репликацию вируса и активность процесса в печени. Их исчезновение является показателем либо санации организма от возбудителя, либо развития интегративной фазы инфекции. IgG к HbcAg. Сохраняются многие годы. Свидетельствуют об имеющейся или ранее перенесённой инфекции.

AT к HbeAg. Серологический маркер интеграции вируса. В комплексе с IgG HbeAg и HbsAg свидетельствуют о полном завершении инфекционного процесса.

AT к HbsAg. Протективные AT; также образуются после вакцинации. Применительно к хроническому вирусному гепатиту, могут свидетельствовать о завершении вирусной инфекции.

AT к preS1- и preS2-фрагментам HbsAg. Свидетельствуют о развитии протективного иммунитета при завершении инфекционного процесса.

Промежуточный контроль (коллоквиум).

При подготовке к коллоквиуму студенту необходимо выучить лекции, относящиеся к данному разделу и подготовиться по контрольным вопросам лабораторных занятий.

Тема лабораторной работы: Резидентная микрофлора полости рта. Особенности состава микробиоценозов основных биотопов ротовой полости.

ЦЕЛИ: знать представителей резидентных видов микроорганизмов ротовой полости и их биологические свойства; уметь оценивать результаты исследования микробиоценозов ротовой полости.