Материально-техническое оснащение

1.Инструменты и оборудование: Планшеты, матрасы, питательные среды, буферные растворы для культур клеток, серологические реакции, наборы диагностикумов и диагностических сывороток для серодиагностики вирусных инфекций, микроскоп.

2.Схемы и таблицы: «Форма и величина некоторых вирусов», «Типы симметрии вирусов», «Способы заражения куриных эмбрионов», «Типы культур клеток», «Цитопатическое действие вирусов на культуры клеток».

Контрольные вопросы

1. Чем вирусы отличаются от бактерий?

2. Из чего состоит вирион? Приведите примеры сложных вирусов.

3. Что понимают под дизъюнктивным способом размножения?

4. Какие известны способы выхода вирусных частиц из клеток? Примеры.

5. Какие существуют способы культивирования вирусов?

6. Что понимают под внутриклеточными включениями при вирусных инфекциях? Как и для чего их выявляют?

7. Назовите основные методы микробиологической диагностики вирусных инфекций.

8. Каковы особенности постановки серологических реакций при диагностике вирусных инфекций?

Выполнение лабораторной работы

1. Изучить под световым микроскопом демонстрационные препараты и зарисовать: а) внутриклеточные включения при бешенстве и натуральной оспе; б) препарат крупного вируса (окраска по Морозову); в) ЦПД вируса полиомиелита.

2. Познакомиться по таблицам с методикой заражения куриного эмбриона для получения культур вирусов.

3. Учесть РТГА при диагностике гриппа.

4. Учесть РН при серодиагностике полиомиелита.

5. Оформить протокол.

Правила оформления протокола

1. Ответы на контрольные вопросы.

2. Зарисовать: а) внутриклеточные включения при бешенстве и натуральной оспе; б) препарат крупного вируса (окраска по Морозову); в) ЦПД вируса полиомиелита.

3. Графически изобразить способы заражения куриного эмбриона для получения культур вирусов.

4.Учесть РТГА при серодиагностике гриппа: записать ингредиенты, отметить учетные признаки, определить титры антител.

5. Учесть РН при серодиагностике полиомиелита: записать ингредиенты, отметить учетные признаки, определить титры антител.

Дополнительный материал

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА). РТГА основана на способности AT связывать поверхностные рецепторы вирусов (гемагглютинины), лишая возможности агглютинировать эритроциты. Визуально этот эффект проявляется в «торможении» гемагглютинации («зонтики» и «пуговки»). РТГА применяют при диагностике вирусных инфекций для выявления специфических АТ (гемагглютининов) и идентификации различных вирусов по их гемагглютининам, проявляющим свойства АГ.

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ

№ п\п	Ингредиенты	Разведения сыворотки крови пациента:
		1\10	1\20	1\40	1\80	1\160		1\320
	Сыворотка крови пациента 1/5 (мл) Изотонический раствор NaCl (мл)	0,25 -	0,25 } 0,25	0,25 } 0,25	0,25 } 0,25	0,25 } 0,25		0,25 } 0,25
	Гриппозный диагностикум (мл)	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25		0,25
	комнатная температура 1 час
	Взвесь 1% куриных эритроцитов (мл)	0,5	0,5	0,5	0,5		0,5		0,5
	комнатная температура 45 минут

Примечание:  из последней пробирки 0,25мл выливают в дез. раствор.

Реакция нейтрализации (РН) по типу цветной пробы. РН основана на способности AT нейтрализовать цитопатическое действие вируса в отношении культуры клеток. РН применяют при диагностике вирусных инфекций для выявления специфических АТ (вируснейтрализующих) и идентификации различных вирусов, обладающих цитопатическим действием.

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ (ЦВЕТНАЯ ПРОБА)

№ п\п	Ингредиенты	Разведения сыворотки крови пациента:
		1\8	1\16	1\32	1\64	Контроль сыворотки		Контроль культуры клеток
	Сыворотка крови пациента 1/2 (мл) Изотонический раствор NaCl (мл)	0,25 -	0,25 } 0,25	0,25 } 0,25	0,25 } 0,25	-		-
	Сыворотка крови пациента 1/4 (мл)	-	-	-	-	0,25		-
В	Вирус 100 ТЦД50	0,25	0,25	0,25	0,25	-		-
	комнатная температура 1 час
	Культура клеток в дозе	0,25	0,25	0,25	0,25		0,25		0,25
	Среда 199	0,25	0,25	0,25	0,25		0,25		0,25
	Вазелиновое масло	0,5	0,5	0,5	0,5		0,5		0,5
	термостат 370С 7-9 дней

Примечание:  из последней пробирки 0,25мл выливают в дез. раствор. При оценке учитывают только 2 тона: красный и желтый

ТЦД – тканевая цитопатическая доза. Доза клеток – минимальное количество клеток, которое изменяет цвет среды с красного на желтый на 5-6 день.

Тема лабораторной работы: Возбудители гонореи и менингококковой инфекции.

ЦЕЛИ: знать возбудителей, их морфологические и физиологические особенности, факторы вирулентности, источники и механизмы заражения человека; методы микробиологической диагностики заболеваний, вызванных этими возбудителями; средства и методы лечения и профилактики указанных инфекций; уметь обосновать выбор методов исследования, материала, особенностей его забора и доставки в лабораторию, интерпретировать результаты исследований.