Материально-техническое оснащение

1.Инструменты и оборудование: Планшеты, матрасы, питательные среды, буферные растворы для культур клеток. Серологические реакции. Наборы диагностикумов и диагностических сывороток для серодиагностики вирусных инфекций. Микроскоп.

2.Схемы и таблицы: «Строение герпесвирусов», «Схема иммуноферментного анализа».

Контрольные вопросы

1. Дайте характеристику биологическим свойствам герпесвирусов. Какие известны разновидности герпесвирусов? Какого их значение в патологии человека?

2. Перечислите механизмы и пути инфицирования человека герпетической инфекцией.

3. Перечислите клинические симптомы герпетической инфекции полости рта.

4. Назовите основные методы диагностики герпетической инфекции.

5. Перечислите противовирусные препараты, используемые для лечения герпетической инфекции.

Выполнение лабораторной работы

1. Изучить по демонстрационным таблицам схемы микробиологической диагностики герпетической инфекции.

2. Изучить по демонстрационным таблицам схемы серологической диагностики герпетической инфекции.

3. Учесть результаты ИФА при серодиагностике герпетической инфекции.

4. Познакомиться с биологическими препаратами для лечения герпетической инфекции.

5. Решение ситуационных задач

6. Оформить протокол.

Правила оформления протокола

1. Ответить на контрольные вопросы.

2. Зарисовать по демонстрационной таблице схему строения герпесвируса.

3. Зарисовать графически по демонстрационным таблицам схемы серологической диагностики герпетических инфекций.

4. Учесть демонстрационную ИФА герпетической инфекции: записать ингредиенты, схематично зарисовать результат реакции. Оценить результат.

5. Дать характеристику иммунобиологическим препаратам, применяемым для специфического лечения герпетической инфекции.

6. Записать интерпретацию результатов микробиологических исследований пациентов с герпетической инфекцией.

Дополнительный материал

Герпесвирусы. Герпесвирусы вызывают острые и латентные инфекции, а также обладают определённым онкогенным потенциалом. Современная систематика разделяет семейство Herpesviridae на подсемейства Alphaherpesviruses, Betaherpesviruses и Gammaherpesviruses. Альфагерпесвирусы проявляют высокую цитопатическую активность и патогенны для большого числа хозяев. Патогенные для человека виды включены в состав родов Simplexvirus (вирусы герпеса 1-го и 2-го типа) и Varicelovirus (вирус герпеса 3-го типа). Бетагерпесвирусы проявляют менее выраженную цитопатичность и патогенны для более узкого круга хозяев. Патогенные для человека виды включены в состав родов Cytomegalovirus (вирус герпеса 5 типа) и Roseolovirus (вирусы герпеса 6А, 6В и 7 типов). Гаммагерпесвирусы также патогенны для небольшой группы хозяев и способны размножаться в лимфоидных клетках. Патогенные для человека виды включены в состав рода Lymphocryptovirus (вирус герпеса 4 типа).

Вирусы простого герпеса (ВПГ) — наиболее известные представители герпесвирусов, так как вызывают поражения практически у каждого человека. Резервуар вирусов простого герпеса — инфицированный человек. Заражение ВПГ 1-го типа происходит контактным путём, например при поцелуях или попадании капель слюны. Для развития первичной инфекции вируса простого герпеса необходим прямой контакт с отделяемым или содержимым пузырьков, так как вирусы лабильны к действию факторов внешней среды. Заражение ВПГ 2-го типа обычно происходит половым путём. Также возможно перинатальное заражение ВПГ 2-го типа при прохождении плода по родовым путям; заражения можно избежать проведением кесарева сечения. Внутриутробное заражение опасно развитием микроцефалии и органомегалий у плода, но внутриутробное инфицирование наблюдают редко. У вирусов простого герпеса выделяют типоспецифические Аг, представленные гликопротеинами суперкапсида, и группоспецифические Аг, образованные белками нуклеокапсида. Белки нуклеокапсида одинаковы у всех альфагерпесвирусов. Первично вирусы простого герпеса проникает через слизистые оболочки, но не через неповреждённую кожу, что обусловлено отсутствием специфических рецепторов на клетках ороговевающего эпителия. После проникновения в эпителий слизистых оболочек возбудитель активно в них размножается. Возбудитель взаимодействует со специфичными рецепторами, проникает в клетку и запускает литический, продуктивный тип клеточной инфекции. Инфицированные клетки погибают с образованием очагов некроза и местных воспалительных изменений в виде везикул. При латентной инфекции вирус простого герпеса мигрирует из первичного очага, проникает в чувствительные узлы: ВПГ 1-го типа— в тройничный, а ВПГ 2-го типа— в поясничный узлы, где латентно циркулируют. Рецидивы инфекций вируса простого герпеса (точнее клинические проявления заболевания) наблюдают часто, но далеко не у всех инфицированных лиц. Пусковые механизмы — переохлаждение, избыточная инсоляция, стрессовые ситуации и др.

Диагностика герпетических инфекций. Для выявления возбудителя инфекций вирусов простого герпеса используют вирусоскоспический, вирусологический, биологический и серологические методы. Материал для исследования — содержимое пузырьков, слюна, соскобы роговицы и др. При микроскопии мазков, окрашенных по Романовскому – Гимзе, выявляют многоядерные гигантские клетки (клетки Цанка) с тельцами включений (тельца Коудри). Для выделения вирусов простого герпеса используют культуры клеток и проводят посев исследуемого материала на куриные эмбрионы. В культурах клеток вирусы образуют бляшки (бляшки, образованные ВПГ 2-го типа крупнее) и дают характерный цитопатический эффект на куриных эмбрионах. Заражение лабораторных животных вирусом простого герпеса применяют редко. При заражении мозга белых мышей развивается специфический энцефалит; при заражении роговицы кроликов — герпетический кератит. Сывороточные AT к вирусам простого герпеса выявляют при РН, РСК или ИФА; однако ввиду значительной инфицированности населения обнаружение сывороточных AT не имеет существенной диагностической ценности. Большую ценность представляет выявление Аг вирусов в исследуемом материале методами РП и иммунодиффузии. Также используют РИФ с моноклональными AT.

Тема лабораторной работы: Вирусы парентерального гепатита В. Вирусологическая диагностика.

ЦЕЛИ: знать возбудителей, их морфологические и физиологические особенности, источники и механизмы заражения человека, вирусными гепатитом В; методы микробиологической диагностики, средства и методы лечения и профилактики; уметь обосновать выбор методов исследования, написать направление на исследование материала при подозрении на гепатит В, интерпретировать результаты исследований.