Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Приложение к ГЕНЕТИКЕ.doc
Скачиваний:
201
Добавлен:
23.02.2016
Размер:
915.97 Кб
Скачать

Объекты биохимических исследований:

  • моча;

  • пот;

  • плазма и сыворотка крови;

  • форменные элементы крови;

  • культуры клеток (фибробласты, лимфоциты).

При использовании просеивающего метода в биохимической диагностике выделяют уровни: первичный и уточняющий.

Цель первичной диагностики – выявление здоровых индивидов и отбор индивидов для последующей диагностики. На этом этапе используется моча и небольшое количество крови.

Программы первичной биохимической диагностики бывают массовыми и селективными.

Массовые просеивающие программы

Применяют в диагностике фенилкетонурии, врожденного гипотериоза, адреногенитального синдрома, врожденных аномалий развития нервной трубки и болезни Дауна. В основном их используют в пренатальной диагностике:

  • определение в сыворотке крови беременной женщины веществ (сывороточных маркеров матери) - скрининг -тесты на содержание:

АФП (альфа - фетопротеин), ХГЧ (хорионический гонадотропин), несвязанный

эстриол; ассоциированный с беременностью плазменный белок – А; сывороточный активин – А;

  • выделение клеток или ДНК плода из организма матери.

АФП – белок, вырабатываемый печенью плода, его концентрация меняется на разных сроках беременности (существуют нормативные показатели и показатели при различных нарушениях): при с.Дауна – понижена, при дефектах нервной трубки и брюшной стенки – повышена.

Селективные программы

1. Используются простые качественные реакции:

  • тест с FeCl3 на выявление фенилкетонурии – при наличии в моче фенилпировиноградной кислоты фильтровальная бумага окрашивается в зеленый цвет;

  • тест с динитрофенилгидразином для выявления кетокислот;

  • микробиологический ингибиторный тест Гатри – биохимические нарушения у новорожденных – аминокислот и углеводов: кровь новорожденного → диск фильтровальной бумаги → на агаровую культуру, которую выращивают на минимальной питательной среде, содержащей антиметаболит искомой аминокислоты (фенилаланина, лейцина, гистидина, фруктозы, галактозы и т.д.) –он должен тормозить рост микробов: при наличии в крови фенилаланина - разрушается антиметаболит и микробы растут.

2. Точные методы (можно обнаружить большие группы отклонений):

  • тонкослойная хроматография мочи и крови → наследственные нарушения обмена аминокислот, олигосахаридов, мукополисахаридов;

  • газовая хроматография → наследственные болезни обмена органических кислот;

  • электрофорез гемоглобинов → вся группа гемоглобинопатий.

В современных условиях многие этапы биохимической диагностики осуществляются приборами: аминоанализаторами.

Пример программы селективного скрининга на наследственные болезни обмена веществ с острым течением и летальным исходом (МГНЦ РАМН):

1 этап - 14 тестов (качественных и количественных) на:

  • белок;

  • кетокислоты;

  • цистин, гомоцистин;

  • креатинин;

  • ионы аммония и т.д.

2 этап – а) тонкослойная хроматография мочи и крови для выявления:

  • аминокислот;

  • фенольных кислот;

  • моно- и дисахаридов и др.соединений.

б) электрофорез мочи для выявления:

    • гликозамингликаны.

Показания для применения биохимических методов