- •Молекулярные механизмы опухолевого роста
- •Министерство образования и науки российской федерации
- •Содержание
- •Введение
- •Раздел I. Опухоли. Определение понятия.
- •Раздел II. Механизмы генетического контроля клеточного цикла. Индукция клеточного цикла
- •Стадии клеточного цикла и точки его проверки
- •Регуляция клеточного цикла. Роль циклинов и циклин-зависимых киназ
- •Некоторые стимулирующие и ингибирующие пути влияния на пролиферацию клеток с помощью активации или инактивации фосфорилирования рRb
- •Позиционные сигналы и пролиферация клеток
- •Позиционные сигналы и пролиферация клеток
- •Позиционные сигналы и пролиферация клеток
- •Протоонкогены. Онкогены. Онкосупрессоры. Определение понятий
- •Раздел IV. Происхождение и механизмы активации онкогенов
- •Хромосомные транслокации и связанные с ними онкогены лимфомы беркитта
- •Некоторые онкогены и онкосупрессоры
- •Раздел V. Механизмы обеспечения стабильности клеточного генома Общие положения
- •Антиканцерогенные механизмы
- •Антимутационные механизмы
- •Антицеллюлярные механизмы
- •Ген p53 и его роль в обеспечении стабильности генома при повреждениях днк
- •Повреждения днк
- •Раздел VI.
- •Физические канцерогенные агенты
- •Химический канцерогенез
- •Химический канцерогенез Экзогенные химические канцерогенные вещества
- •Кругооборот 3,4-бенз(а)пирена в окружающей среде и роль в развитии опухолей (по а.И. Гнатышаку, 1975)
- •Вирусный канцерогенез Опухолеродные рнк-содержащие вирусы
- •Вирусный канцерогенез Опухолеродные днк-содержащие вирусы
- •Вирусный канцерогенез
- •Прерывание вирусной днк в локусе е2 при интеграции вирусного генома в геном клетки
- •Вирусный канцерогенез Опухолеродные днк-содержащие вирусы
- •Активация транскрипции клеточных протоонкогенов
- •Выделяют 3 стадии канцерогенеза: инициацию, промоцию и прогрессию.
- •Канцерогенез. Промоция
- •Канцерогенез. Опухолевая прогрессия Общие положения
- •Опухолевая прогрессия. Роль молекул адгезии
- •Инвазия и метастазирование. Роль ангиогенеза.
- •Метастатический каскад
- •Раздел VIII. Опухолевые антигены и онкофетальные белки
- •Раздел iх. Взаимоотношения опухоли и организма
- •Раздел х. Иммунные механизмы противоопухолевой защиты
- •Основные характеристики систем защиты организма против опухолей
- •Роль макрофагов в противоопухолевой защите
- •Естественные киллеры
- •Перфорин-зависимый апоптоз
- •Гранзимы
- •Каспазы
- •Ядерные мишени
- •Перфориновая пора
- •Эндонуклеазы
- •Фрагментация днк
- •Апоптоз
- •Цитотоксические т-лимфоциты
- •Раздел XI.
- •Антитела к опухолевому аг
- •Трансформированная клетка
- •Фиксация антител с химиопрепаратом на мембране опухолевой клетки
- •Эндоцитоз Ig с химиопрепаратом
- •Антитела к альфа-фетопротеину
- •Химиопрепарат
- •Трансформированная клетка
- •Фиксация антител с химиопрепаратом на мембране опухолевой клетки
- •Эндоцитоз Ig с химиопрепаратом
- •Рецепторы к фактору роста
- •Лиганд к фактору роста
- •Химиопрепарат
- •Трансформированная клетка
- •Фиксация лиганда с химиопрепаратом на рецепторах фактора роста
- •Эндоцитоз лиганда с химиопрепаратом
- •Антитела к альфа-фетопротеину
- •Трансформированная клетка
- •Фиксация антител с антисмысловым олигонуклеотидом на мембране
- •Эндоцитоз Ig с антисмысловым олигонуклеотидом
- •МРнк - смысловой нуклеотид для синтеза онкобелка
- •Присоединение к мРнк антисмыслового нуклеотида, делающее невозможной трансляцию
- •Мононуклеарная фракция периферической крови больного
- •Культура дендритных клеток (апк)
- •Опухолевый аг
- •Дендритные клетки, нагруженные опухолевым аг дендритных клеток (апк)
- •Дендритная клетка, презентирующая опухолевый аг в комплексе с mhc-1
- •Перфорин
- •Опухолевая клетка
- •Раздел хiii. Контрольные вопросы
- •Раздел XIV. Вопросы тестового контроля по теме: Молекулярные механизмы канцерогенеза
- •Эталоны ответов
- •Раздел XV. Список литературы учебники
- •Дополнительная литература
Перфорин-зависимый апоптоз
Т-киллер Экзоцитоз Клетка-мишень
Гранзимы
Каспазы
Ядерные мишени
Перфориновая пора
Эндонуклеазы
Фрагментация днк
Апоптоз
Механизм осуществления перфорин-зависимой цитотоксичности
Имеются два основных пути реализации клеточной цитотоксичности: перфорин-зависимый и Fas-зависимый.
Цитотоксические Т-лимфоциты (CД 8+) проявляют свою цитотоксичность, задействуя оба механизма; NK-клетки (CД 56) используют исключительно перфорин-зависимый механизм.
Перфорин-зависимый механизм реализуется после распознавания антигена клетки-мишени Т-клеточным рецептором, что приводит к запуску и пространственной организации последующих процессов, включающих:
создание прочного контакта Т-киллеров и клеток-мишеней при участии вспомогательных молекул адгезии, прежде всего, LFA (связанных с функцией лимфоцитов) и ICAM-1 (экспрессируемых клетками-мишенями);
реорганизацию цитоплазматических гранул и компонентов цитоскелета (актина и тубулина) Т-лимфоцитов;
экзоцитоз содержимого гранул в зону межклеточного контакта;
активацию (при обязательном участии ионов кальция) освободившегося из гранул перфорина;
полимеризацию молекул перфорина (около 20 молекул), формирующих пору в мембране клетки-мишени;
проникновение в клетку-мишень через образовавшуюся пору белков - гранзимов, представляющих собой сериновые протеазы;
непосредственную активацию гранзимами каспаз;
запуск сигнального пути, приводящего к развитию апоптоза.
Таким образом, специфическая особенность развития перфорин-зависимого апоптоза - не типичное для этого процесса первичное повреждение мембраны клеток-мишеней.
Цитотоксические т-лимфоциты
(Р.М. Хаитов с соавт., 2000)
Антигенспецифическая цитотоксичность обеспечивается дифференцированной субпопуляцией CD8+ Т α β - лимфоцитов: ЦТЛ. Рецептор этих лимфоцитов распознает антиген в комплексе с молекулами MHC-1 на мембране клеток-мишеней, что является необходимым условием для киллерной атаки ЦТЛ.
Главное защитное предназначение ЦТЛ - санация организма от внутриклеточных инфекций.
Неиммунные зрелые ЦТЛ 8+ имеют только программу для биосинтеза эффекторных молекул (цитотоксинов), которая начинает реализовываться после вовлечения их в иммунный ответ. Для этого лимфоциту недостаточно только связать распознаваемый антиген в комплексе с молекулой МНС на той или иной клетке. Требуются также и молекулы костимуляции. Если опухоль растет не из профессиональных антигенпредставляющих клеток, то этих молекул костимуляции на опухолевых клетках нет. И за фактом распознавания лимфоцитом (в тех случаях, когда есть что распознавать) не следует иммунный ответ, пока профессиональные антигенпредставляющие клетки не процессируют опухольспецифичные антигены. Обычно условия для этого отсутствуют.
В том случае, когда ЦТЛ 8+ вовлекаются в иммунный ответ в них происходит синтез de novo определенных веществ, которые в виде функционально неактивных молекул-предшественников накапливаются в гранулах. Эти гранулы сориентированы в связи с TCR, чем обеспечивается возможность строго локального киллерного удара по клетки-мишени.
Цитотоксины гранул ЦТЛ как минимум представлены двумя белками: перфорином и гранзимами (сериновыми протеазами), организующими сигнал на апоптоз для клетки-мишени.
Собственно механизм киллинга при участии ЦТЛ состоит в том, что связывая своим TCR антиген на поверхности клетки-мишени, ЦТЛ в области этой связи быстро формируют межклеточный интерфейс - локальную зону контакта с последующим выбрасыванием содержимого гранул.
В отличие от NK, ЦТЛ обладают еще одним механизмом индукции апоптоза клеток-мишеней, опосрдуемым регуляторным (Fas-зависимым) механизмом. Это связано со способностью активированных ЦТЛ (CD8+) экспрессировать на своей поверхности Fas-лиганд (Fas-L).
При осуществлении киллинга не повреждаются ни сами ЦТЛ, ни здоровые клетки тканей организма. ЦТЛ разрушают только пораженные клетки, на которых экспрессированы антигены вирусов или других внутриклеточных патогенов.
В ряде случаев опухолевые клетки проявляют сильную иммуносупрессорную активность, продуцируя некоторые цитокины. Наиболее известный из них - TGF-β.
Антитела к опухольспецифичным антигенам в большинстве случаев рост опухолей не угнетают. Напротив, они вызывают модуляцию антигенов на поверхности клетки.
СХЕМА РАЗВИТИЯFAS - ЗАВИСИМОГО АПОПТОЗА
Cell Signaling & Neuroscience. Sigma 2000/2001
Fas - рецептор (CD-95, АРО-1) локализуется на клетках различных типов спонтанно (на гепатоцитах, кортикальных тимоцитах и т.д.) или после активации (зрелые лимфоциты). Он относится к большому семейству рецепторов фактора роста нервов, которое включает также рецепторы фактора некроза опухоли (ФНО) - TNFR1, мембранные молекулыCD40 и СD30 и др. МмFas- рецептора 36 кД. Для него пока не установлено других функций, кроме передачи сигнала к развитию апоптоза с помощью цитоплазматического домена смерти, которым он обладает (аналогичным доменом обладает иTNFR1). Естественным лигандом Fas - рецептора и источником сигнализации, приводящей к развитию апоптоза, является Fas - лиганд (Fas -L) - молекула с Мм 46 кД, гомологичная ФНО,CD40Lи ряду других молекул, служащих лигандами для семейства рецепторов фактора роста нервов. На мембране Fas - лиганд представлен преимущественно тримерной формой. В случаеFas- зависимого апоптоза связывание Fas - лиганда с тримерным Fas - рецептором приводит к конформационным изменениям в цитоплазматическом домене смерти Fas - рецептора, что создает возможность его связывания с аналогичным доменом адапторной молекулыFADD(Fas-associateddeathdomain), а затем - с таким же доменом белкаRIP(Receptorinteractingprotein;на схеме отсутствует). Образующийся комплекс связывает прокаспазу 8 и активирует ее при участии протеазыFLICE(FADD-likeIL-1-convertingenzime;на схеме отсутствует). При этом гетеродимеры прокаспазы 8 (р11 и р18) объединяются в тетрамер. Активированная каспаза 8 активирует (расщепляет) девять последующих прокаспаз, т.е. запускает каспазный каскад, в котором принимает участие и каспаза 3, ведущий к апоптозу. Аналогичные события происходят и при действии ФНО через рецепторTNFR1. Только в этом случае с доменом смерти рецептора взаимодействует адапторный белокTRADD(TNFR-associateddeathdomain), с которым связываютсяFADDиRIP.
Fas- индуцированный апоптоз может быть блокирован на нескольких уровнях. Во-первых, на уровне активации прокаспазы 8 с помощью особого клеточного белкаFLIP(FLICE-inhibitoryprotein), который, как следует из его названия, инактивируетFLICEи, тем самым - блокирует активацию прокаспазы 8. Апоптоз может быть заблокирован при участии антиапоптотического белкаBcl-2 на этапе превращения прокаспазы 3 в каспазу 3. Наконец, он может быть заблокирован и белком вирусного происхождения, т. н. модификатором цитокинового ответа (CytokineresponsemodifierA-CrmA).