21. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФТОРА (ОФС 42-0117-09)

Количественное определение фтора в лекарственных средствах прово-

дят одним из трех методов: титриметрическим, спектрофотометрическим или

ионометрическим.

1. Титриметрический метод

Точную навеску испытуемого вещества, указанную в частной фарма-

копейной статье, сжигают в колбе с кислородом, поглощая продукты сжига-

ния 15 мл воды. Пробку, держатель образца и стенки колбы обмывают 40 мл

воды и в колбу вносят 0,6 мл 0,1 % раствора ализарина S. Прибавляют по ка-

плям 0,1 М раствор натрия гидроксида до красно-малинового окрашивания,

затем 2–3 капли 1,5 % раствора азотной кислоты до перехода окрашивания в

желтое, 3,5 мл буферного раствора рН 3,0 и титруют 0,005 М раствором то-

рия(IV) нитрата до розовой окраски.

1 мл 0,005 М раствора тория(IV) нитрата соответствует 0,380 мг фтора.

Примечания

1. Приготовление буферного раствора рН 3,0. Растворяют 2,0 г хлоруксусной кислоты в 20 мл воды и нейтрализуют 1 М раствором натрия гидроксида до слабо-розовой окраски по фенолфталеину. Затем прибавляют 2,0 г хлоруксусной кислоты и доводят объем раствора водой до 100 мл.

2. Приготовление 0,005 М раствора тория(IV) нитрата. 2,761 г тория(IV) нитрата [Th(NO3)4∙4H2O] растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 л, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Установка титра. Около 0,05 г (точная навеска) натрия фторида, предварительно высушенного при 150 ºС до постоянной массы, вносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. К 20,0 мл полученного раствора прибавляют 0,6 мл 0,1 % раствора ализарина S и затем по каплям 0,1 М раствор натрия гидроксида до перехода розовой окраски в желтую. Прибавляют 5 мл буферного раствора рН 3,0 и титруют раствором тория(IV) нитрата до перехода желтой окраски в розовую.

1 мл 0,005 М раствора тория (IV) нитрата соответствует 0,380 мг фтора.

2. Спектрофотометрический метод

Точную навеску испытуемого вещества, указанную в частной фарма-

копейной статье, сжигают как описано выше, раствор количественно перено-

сят в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют по 25 мл

0,01 % раствора арсеназо-1 и 0,005 М раствора тория(IV) нитрата, доводят

объем раствора водой до метки и перемешивают. Через 30 мин измеряют оп-

тическую плотность полученного раствора в максимуме поглощения при

длине волны 580 нм, относительно раствора сравнения, содержащего те же

количества реактивов, но без испытуемого препарата. Содержание фтора оп-

ределяют по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика. В мерные колбы вместимостью

100 мл вносят 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; и 8,0 мл стандартного раствора фтора и далее

поступают, как указано выше, начиная со слов «...прибавляют по 25 мл».

Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество мик-

рограммов фтора, а по оси ординат – средние значения оптической плотно-

сти.

Примечания

1. Приготовление 0,01 % раствора арсеназо-1. 0,01 г арсеназо-1 (тринатриевая соль 2-[(2-арсонофенил)азо]-1,8-дигидроксинафталин-3,6- дисульфокислоты, С16Н11О11N2S2AsNa3) растворяют в воде, доводят объем раствора водой до 100 мл и перемешивают.

2. Приготовление стандартного раствора фтора. 0,0552 г (точная навеска) натрия фторида растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 250 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

1 мл полученного раствора содержит 10 мкг фтора.

3. Ионометрический метод

Точную навеску испытуемого вещества, указанную в частной фарма-

копейной статье, сжигают, как описано выше, раствор количественно пере-

носят в полиэтиленовый стакан вместимостью 150 мл, обмывая держатель

образца и стенки колбы 50 мл воды, и перемешивают в течение

5 мин с помощью магнитной мешалки.

К объему полученного раствора, указанному в частной фармакопейной

статье, прибавляют равный объем буферного раствора, регулирующего об-

щую ионную силу (рН 5,0–5,5), и перемешивают, как указано выше.

Определение содержания фтор-ионов проводят с использованием гра-

дуировочного графика или методом стандартных добавок, как описано в об-

щей фармакопейной статье «Ионометрия». В качестве измерительного элек-

трода используют фторидселективный электрод, в качестве электрода срав-

нения – хлорсеребряный или каломельный электроды.

Стандартные растворы фтор-иона необходимых концентраций

(рF = 2, рF = 3 и т. д.) готовят путем разбавления основного стандартного

раствора фтор-иона 1900 мкг/мл (рF = 1).

Примечания

1. Приготовление буферного раствора, регулирующего общую ионную силу (рН 5,0–5,5). 58,0 г натрия хлорида и 4,0 г натрия эдетата помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в воде, прибавляют 57,0 мл уксусной кислоты ледяной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. С помощью 1 М раствора натрия гидроксида или хлористоводородной кислоты доводят рН полученного раствора до значения 5,0–5,5.

Указанные количества компонентов могут быть изменены в зависимости от испытания и состава испытуемого образца.

2. Приготовление основного стандартного раствора фтор-иона 1900 мкг/мл (рF = 1). 4,199 г натрия фторида помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Раствор хранят в полиэтиленовой или полипропиленовой емкости при комнатной температуре.

Срок годности – не более 3 мес.

22. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИНКА В ПРЕПАРАТАХ ИНСУЛИНА

(ОФС 42-0118-09)

Определение цинка в препаратах инсулина проводят методом атомно-

абсорбционной спектрометрии (ААС), измеряя поглощение излучения атом-

ного пара цинка при длине волны его абсорбции.

Приготовление испытуемого раствора

1. Для раствора или суспензии препарата. В случае суспензии испы-

туемого препарата добавляют во флакон или картридж 6 М раствор хлори-

стоводородной кислоты в количестве 2 мкл (при активности инсулина

40 МЕ/мл) или 4 мкл (при активности 100 МЕ/мл) на 1 мл препарата, тща-

тельно перемешивают.

Объединяют содержимое 3 флаконов или не менее 3 картриджей, пе-

ремешивают и проводят разведение по одному из способов:

а) в соответствии с табл. 22.1:

Таблица 22.1 Разведения препарата в зависимости от его активности

б) объем препарата, соответствующий активности 200 МЕ, помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 0,01 М раство-

ром хлористоводородной кислоты до метки и перемешивают. При необходи-

мости выполняют следующее разведение до конечной концентрации цинка в пределах 0,4–1,6 мкг/мл или указанной в частной фармакопейной статье.

2. Для надосадочной жидкости. Тщательно перемешивают содержимое каждого флакона или картриджа до гомогенного состояния, объединяют с о-

держимое 3 флаконов или не менее 3 картриджей, отбирают 5–10 мл гомо-

генной суспензии, переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют в

течение 10 мин при 4000–6000 об/мин. Необходимое количество надосадоч-

ной жидкости для получения раствора с концентрацией цинка в пределах

0,2–1,6 мкг/мл помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объ-

ем раствора 0,01 М раствором хлористоводородной кислоты до метки и пе-

ремешивают.

3. Для субстанции. Приготовление испытуемого раствора субстанции инсулина проводят по способу 1 или 2:

1. Около 0,025 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную кол-

бу вместимостью 25 мл, избегая пенообразования, растворяют в 0,01 М рас-

творе хлористоводородной кислоты, доводят объем раствора той же кисло-

той до метки и перемешивают. К 1,0 мл полученного раствора прибавляют

2,0 мл (или другое количество, указанное в частной фармакопейной статье) 0,01 М раствора хлористоводородной кислоты и перемешивают.

2. Около 0,050 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную кол-

бу вместимостью 25 мл, избегая пенообразования, растворяют в 0,01 М рас-

творе хлористоводородной кислоты, доводят объем раствора той же кисло-

той до метки и перемешивают. Полученный раствор разводят 0,01 М раство-

ром хлористоводородной кислоты до концентрации цинка в пределах

0,4–1,6 мкг/мл и перемешивают.

Методика

Определение атомного поглощения проводят на атомно-

абсорбционном спектрофотометре в соответствии с инструкцией изготовите-

ля к прибору при длине волны 213,9 нм с использованием цинковой лампы с полым катодом и воздушно-ацетиленового пламени. В пламенный атомиза-

тор атомно-абсорбционного спектрофотометра вводят свежеприготовленный испытуемый раствор и регистрируют атомное поглощение. В качестве рас-

твора сравнения используют 0,01 М раствор хлористоводородной кислоты.

Концентрацию цинка в испытуемом растворе в мкг/мл определяют по калибровочного графику.

Построение калибровочного графика. В мерные колбы вместимостью

100 мл помещают разбавленный эталонный раствор цинк-иона (10 мкг/мл) в

количествах: 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0; 12,0 и 16,0 мл, доводят объемы растворов до метки 0,01 М раствором хлористоводородной кислоты и перемешивают

(получают растворы с содержанием цинка соответственно 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,2 и 1,6 мкг/мл). Выбор пределов концентраций цинка 0,2–1,0 мкг/мл или 0,4–1,6 мкг/мл зависит от содержания цинка в препарате и чувствитель-

ности атомно-абсорбционного спектрофотометра.

Измеряют величину атомного поглощения полученных растворов и строят график, откладывая на оси ординат значение атомного поглощения, а

на оси абсцисс концентрацию цинка в мкг/мл.

Перед каждым анализом проводят калибровку прибора. Прибор счита-

ется пригодным к работе, если относительное стандартное отклонение, рас-

считанное для 6 последовательных измерений калибровочного раствора с концентрацией 0,8 мкг/мл, составляет не более 1,4 %.

Приготовление эталонного раствора цинк-иона (1 мг/мл). Эталонный

раствор цинка готовят из цинка гранулированного (раствор А), цинка оксида

(раствор Б) или используют готовый стандартный раствор для ААС.

Хранят в течение срока годности в условиях, указанных на этикетке,

или не более 2 мес.

Раствор А. Около 0,5 г (точная навеска) цинка гранулированного по-

мещают в мерную колбу вместимостью 500 мл и растворяют в 5 мл 4 М рас-

твора хлористоводородной кислоты, доводят объем раствора водой до метки

и перемешивают.

Раствор Б. Около 0,6224 г (точная навеска) цинка оксида (х.ч.), предва-

рительно прокаленного до постоянной массы при 500 °С, помещают в мер-

ную колбу вместимостью 500 мл и растворяют в 5 мл 4 М раствора хлори-

стоводородной кислоты, доводят объем раствора водой до метки и переме-

шивают.

Примечание. Приготовление 4 М раствора хлористоводородной кислоты. Разводят 6 М раствор хлористоводородной кислоты водой в 1,5 раза: к 50 мл кислоты прибавляют 25 мл воды и перемешивают или в мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 16 мл хлористоводородной кислоты концентрированной (плотность 1,19) или 17 мл (плотность 1,18), доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Хранят при температуре не выше 30 °С.

При приготовлении растворов А и Б допускается использование 5 М раствора хлористоводородной кислоты вместо 4 М раствора.

Приготовление разбавленного эталонного раствора цинк-иона

(10 мкг/мл). 1,0 мл эталонного раствора цинк-иона (1 мг/мл) переносят в мер-

ную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и

перемешивают.

Раствор должен быть свежеприготовленным.