Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
гфXI_II.doc
Скачиваний:
22
Добавлен:
02.05.2015
Размер:
1.31 Mб
Скачать

0,01% Раствора трипсина. Растворы перемешивают и выдерживают 10

мин при комнатной температуре, затем в каждую колбу приливают по 3

мл раствора цинкона и доводят объем раствора водой до метки.

Полученные растворы перемешивают и через 1 ч измеряют оптическую

плотность, как указано выше.

Содержание цинка (X) в препарате в миллиграммах на 100 ЕД

инсулина вычисляют по формуле:

D1 х 0,001 х 50 х 2,5 х 50

Х = ----------------------------

D0 х 5 х 5

где D1 - оптическая плотность испытуемого раствора препарата; Dо -

оптическая плотность разбавленного раствора стандартного образца

цинка; 0,001 - содержание цинка в миллиграммах в 1 мл измеряемого

разбавленного раствора стандартного образца цинка; 2,5 -

количество препарата в миллилитрах, содержащего 100 ЕД инсулина

(при содержании инсулина 40 ЕД в 1 мл препарата).

Примечания. 1. Приготовление 0,01% раствора трипсина: 0,01 г

трипсина растворяют в растворе хлористоводородной кислоты (0,001

моль/л) в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем

раствора этим же раствором хлористоводородной кислоты до метки.

Раствор должен быть свежеприготовленным.

2. Приготовление раствора хлористоводородной кислоты (0,001

моль/л): 100 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,01 моль/л)

точно отмеривают из бюретки в мерную колбу вместимостью 1 л. Объем

раствора в колбе доводят водой до метки.

Срок годности раствора 6 мес.

Метод атомной абсорбции. Определение цинка в препаратах

инсулина проводят на атомно - абсорбционных спектрофотометрах при

длине волны 214 нм в соответствии с ГФ XI (вып. 1, с. 42).

Цинк в инсулине. Готовят раствор инсулина в хлористоводородной

кислоте (0,01 моль/л) с содержанием 1 мг инсулина в 1 мл и

проводят определение.

Цинк в растворе. 5 мл препарата помещают в мерную колбу

вместимостью 25 мл, доводят объем раствора водой до метки и

проводят определение.

Общий цинк в суспензиях: 2,5 мл хорошо перемешанной суспензии

помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 0,5 мл

хлористоводородной кислоты (0,1 моль/л), доводят объем раствора

водой до метки и проводят определение.

Цинк в надосадочной жидкости. Содержимое флакона (5 мл)

тщательно перемешивают, вносят в центрифужную пробирку и

центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 4000-6000 об/мин. В

мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,5 мл надосадочной

жидкости, доводят объем раствора водой до метки и проводят

определение.

Расчет содержания цинка в препаратах инсулина проводят по

градуировочной кривой.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНСЕРВАНТОВ В ГОРМОНАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТАХ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕНОЛА

Метод броматометрического титрования. 5 мл препарата помещают

в коническую колбу вместимостью 150 мл с притертой пробкой,

прибавляют раствор 0,25 г калия бромида в 25 мл воды. 15 мл

(точный объем) раствора калия бромата (0,1 моль/л), 2,5 мл

разведенной серной кислоты перемешивают, закрывают колбу пробкой и

оставляют в темном месте на 15 мин. После этого к смеси прибавляют

1 г калия йодида, перемешивают, снова оставляют на 5 мин и титруют

раствором натрия тиосульфата (0,1 моль/л) (индикатор - крахмал).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл раствора натрия тиосульфата (0,1 моль/л) соответствует

0,001568 г фенола.

Содержание фенола в препарате в процентах (X) вычисляют по

формуле:

(а - б) х 0,001569 х 100

Х = --------------------------

в

где а - количество раствора натрия тиосульфата (0,1 моль/л),

пошедшее на титрование в контрольном опыте, в миллилитрах, б -

количество раствора натрия тиосульфата (0,1 моль/л), пошедшее на

титрование испытуемого препарата, в миллилитрах, в - количество

препарата, взятого для анализа, в миллилитрах.

Метод газовой хроматографии. Используют газовый хроматограф с

пламенно - ионизационным детектором, хроматографическая колонка

100х0,3 см, заполненная сорбентом с 5% полиэтиленгликоля 6000 или

20 М на промытом кислотой и силанизированном носителе "Хроматон N"

с размером частиц 0,125-0,250 мм (возможно применение других

носителей типа "Хромосорб", "Инертон" тех же квалификаций).

Температура колонки, узла ввода пробы, детектора 140, 200, 250

град. С соответственно. Скорость газа - носителя (азот) 20-50

мл/мин. Величина вводимой пробы (2-5 мкл) определяется

чувствительностью детектора.

Содержание фенола в препарате определяют методом абсолютной

калибровки или методом внутреннего стандарта, в качестве которого

используют бензиловый спирт (ГОСТ 8751-72, ч. д. а.).

При использовании метода внутреннего стандарта к препарату в

количестве около 2 г (точная навеска) прибавляют около 0,005 г

бензилового спирта (точная навеска), смесь перемешивают и

хроматографируют.

Содержание фенола в препарате в процентах (X) вычисляют по

формуле:

KS1P2 х 100

Х = ------------

S2P1

где S1 - площадь пика фенола; S2 - площадь пика бензилового

спирта; Р1 - навеска препарата в граммах; Р2 - навеска бензилового

спирта в граммах; К - калибровочный коэффициент.

Калибровочный коэффициент определяют на 3-4 калибровочных

смесях фенола и бензилового спирта.

Для метода абсолютной калибровки график строят по 4-5

калибровочным смесям с концентрацией фенола от 0,10 до 0,50%.

Примечание. 1. Определение калибровочного коэффициента (К):

фенол и бензиловый спирт, взятые в количествах около 0,125 г

(точные навески), помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл,

растворяют навески в 25-30 мл воды, доводят объем раствора водой

до метки и хроматографируют. Рассчитывают среднее значение

калибровочного коэффициента не менее чем из 3 определений по

формуле:

S2 x Рх

К = ---------,

S1 x P2

где Рх - навеска фенола в граммах.

2. Приготовление калибровочных смесей: 0,050; 0,100; 0,150;

0,200; 0,250 г фенола (точные навески) вносят соответственно в 5

мерных колб вместимостью 50 мл. Навески растворяют в 20 мл воды и

доводят объем раствора водой до метки. Срок годности растворов -

14 сут при хранении при температуре от 4 до 8 град. С.

3. Приготовление суспензий к анализу: во флакон с суспензией

вносят 1-2 капли хлористоводородной кислоты и встряхивают.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИПАГИНА

Метод газовой хроматографии. Используют газовый хроматограф с

пламенно - ионизационным детектором, хроматографическую колонку

50 х 0,3 см, заполненную сорбентом 5% неопентилгликольсукцината на

промытом кислотой и силанизированном носителе "Хроматон N" с

размером частиц 0,125-0,250 мм (возможно применение других

носителей типа "Хромосорб", "Инертон" тех же квалификаций).

Температура колонки, узла ввода пробы и детектора 170, 220, 240

град. С соответственно. Скорость газа - носителя (азот) 20-50

мл/мин. Пробу вводят непосредственно в хроматографическую колонку;

ее величина определяется чувствительностью детектора (2-5 мкл).

Содержание нипагина в препарате определяют методом абсолютной

калибровки или методом внутреннего стандарта, в качестве которого

используют нипазол (ТУ 6-09-4727-79).

При использовании метода внутреннего стандарта к препарату или

к подготовленной к анализу суспензии в количестве около 5 мл

(точная навеска) прибавляют 1 мл раствора внутреннего стандарта,

раствор тщательно перемешивают, отбирают пробу и хроматографируют.

Содержание нипагина в препарате в процентах (X) вычисляют по

формуле:

KS1 x P2

Х = --------- x 100,

S2 x P1

где S1 - площадь пика нипагина; S2 - площадь пика нипазола; Р1 -

навеска препарата в граммах; Р2 - навеска нипазола в граммах; К -

калибровочный коэффициент.

Калибровочный коэффициент определяют на 3-4 искусственных

смесях нипагина и нипазола с равными концентрациями компонентов.

Для метода абсолютной калибровки график строят по 4-5

искусственным смесям с концентрацией нипагина от 0,05 до 0,15%.

Примечания. 1. Определение калибровочного коэффициента:

нипагин и нипазол, взятые в количествах по 0,050 г (точные

навески), помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 5

мл спирта, растворяют и доводят объем раствора водой до метки и

хроматографируют. Рассчитывают среднее значение калибровочного

коэффициента не менее чем из 3 определений по формуле:

S2 x Рх

К = ---------,

S1 x P2

где Рх - навеска нипагина в граммах.

Раствор должен быть свежеприготовленным.

2. Приготовление калибровочных смесей: 0,025; 0,040; 0,050;

0,060; 0,075 г нипагина (точные навески) вносят соответственно в 5

мерных колб вместимостью 50 мл. В каждую колбу прибавляют по 2,5

мл 95% спирта, растворяют навеску и доводят объем раствора водой

до метки.

Раствор должен быть свежеприготовленным.

3. Приготовление раствора внутреннего стандарта: около 0,125 г

нипазола (точная навеска) вносят в мерную колбу с притертой

пробкой вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл 95% спирта,

растворяют и доводят объем раствора 95% спиртом до метки.

Срок годности раствора 14 сут при хранении при температуре от

4 до 8 град. С.

4. Приготовление суспензий к анализу: во флакон с суспензией

вносят 1-2 капли хлористоводородной кислоты и встряхивают.

МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ВИТАМИНОВ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

1. Определение ретинола ацетата

и ретинола пальмитата (витамина А)

а) Точную навеску порошка растертых драже (не более 1 г) или 2

таблетки, покрытые оболочкой и растертые в порошок, количественно

переносят 15 миллилитрами предварительно свежепрокипяченной и

охлажденной до температуры 40 град. С воды в коническую колбу

вместимостью 100 мл, нагревают на водяной бане при температуре от

60 до 70 град. С при перемешивании в течение 5 мин, прибавляют 8

мл раствора аммиака и нагревают при той же температуре в течение

15 мин. Затем прибавляют 30 мл 95% спирта, 3 мл 50% раствора

едкого кали и нагревают в течение 30 мин на водяной бане с

обратным холодильником при температуре кипения смеси. Содержимое

колбы тотчас охлаждают до комнатной температуры, количественно

переносят 50 мл воды в делительную воронку и извлекают 150 мл

эфира для наркоза в течение 2 мин. В случае образования эмульсии

проводят дополнительное извлечение эфиром 3 раза по 25 мл.

Объединенные эфирные извлечения промывают сначала 30 мл воды,

затем 50 мл 4% раствора едкого кали и снова водой по 50 мл до

исчезновения щелочной реакции промывных вод (проба с

фенолфталеином). Промытые эфирные извлечения количественно

переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят объем

раствора эфиром до метки и перемешивают; 5 мл полученного раствора

помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл. Эфир отгоняют в

токе азота или под вакуумом на водяной бане при температуре не

выше 40 град. С. Остаток растворяют в пропаноле - 2 до получения

концентрации витамина А около 2 мкг (6 ME) в 1 мл.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора на

спектрофотометре при длинах волн 300, 310, 325, 334 нм в кювете с

толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют

пропанол - 2.

Отношение значения оптической плотности при длине волны 300 нм

к значению оптической плотности при длине волны 325 нм не должно

превышать 0,73.

Вычисляют оптическую плотность D325 (испр.) с поправкой на

сопутствующие витамину А примеси по следующему уравнению:

D325 (испр.) = 6,185 х D325 - 2,555 х D310 - 4,260 х D334,

где D325, D310 и D334 - оптические плотности испытуемого раствора

при соответствующих длинах волн.

Если D325 (испр.) не отличается от D325 больше чем на +/-5%,

то содержание витамина А в ME в одной таблетке или драже (X)

вычисляют по формуле:

D325 х 250 х V х 3330000 х б D325 х V х 915 х б

Х = ---------------------------- = --------------------

а х 5 х 100 х 1820 а

где D325 - оптическая плотность испытуемого раствора при длине

волны 325 нм; 250; 5 и V - разведения в миллилитрах; 3330000 -

количество витамина А в ME, соответствующее одному грамму 100%

ретинола; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток,

покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже в граммах; 1820

1%

удельный показатель поглощения (Е ) 100% ретинола в пропаноле -

1 см

2 при длине волны 325 нм.

Если D325 (испр.) отличается от D325 больше чем на +/- 5%,

содержание витамина А в ME в одном драже или таблетке вычисляют по

вышеприведенной формуле, подставляя вместо D325 величину

D325 (испр.).

б) При наличии в составе испытуемого препарата

альфа - токоферола ацетата (витамина Е) дополнительно проводят

гидрирование. Для этого промытые эфирные извлечения, полученные,

как указано выше, упаривают в токе азота или под вакуумом на

водяной бане при температуре не выше 40 град. С. Остаток тотчас

растворяют в пропаноле - 2 до получения концентрации ретинола

около 20 мкг (60 ME) в 1 мл (раствор А).

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

Оставленные комментарии видны всем.