100000 Me в 1 мл для инъекций с учетом фактического содержания

витамина А разводят в хлороформе для наркоза таким образом, чтобы

получить раствор, содержащий 100 ME витамина А в 1 мл. Затем из

него готовят последовательные разведения с содержанием витамина А

от 5 до 50 ME в 1 мл с интервалом 5 ME. Из каждого разведения

отбирают по 0,4 мл раствора и проводят колориметрическую реакцию

так же, как при анализе испытуемого раствора. Для построения

калибровочного графика откладывают по оси ординат найденные

значения оптической плотности, а по оси абсцисс - соответствующие

им количества витамина А в 1 мл раствора в международных единицах.

При смене реактивов (особенно раствора сурьмы хлорида)

калибровочный график проверяют, используя для этого

свежеприготовленные хлороформные растворы препарата витамина А,

применяемого в качестве эталонного раствора.

2. Приготовление хлороформного раствора сурьмы хлорида,

содержащего 2% уксусного ангидрида: 230 г сурьмы треххлорной

помещают в колбу и растворяют в 1 л хлороформа для наркоза при

нагревании на водяной бане при температуре около 40 град. С. Колбу

закрывают притертой пробкой и оставляют на ночь. Прозрачную часть

раствора сливают в мерный цилиндр вместимостью 1 л, прибавляют 2%

(по объему) уксусного ангидрида, переносят в банку оранжевого

стекла, перемешивают и закрывают притертой пробкой. Раствор годен

для анализа через сутки после приготовления в течение 42 сут.

3. Определение содержания тиамина хлорида

и тиамина бромида (витамина B1)

Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или

количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок,

указанное в соответствующих частных статьях, количественно

переносят 30 миллилитрами раствора хлористоводородной кислоты

(0,01 моль/л) в мерную колбу вместимостью 100 мл, взбалтывают,

доводят объем раствора тем же растворителем до метки и фильтруют;

первые 10 мл отбрасывают. Из полученного раствора готовят с

использованием раствора хлористоводородной кислоты (0,01 моль/л)

раствор второго разведения так, чтобы содержание в нем витамина B1

(в пересчете на тиамина хлорид) было около 0,001 мг в 1 мл.

1 Мл полученного раствора помещают в делительную воронку с

притертой пробкой вместимостью 50 мл, во вторую делительную

воронку помещают 1 мл раствора стандартного образца тиамина

хлорида. В обе делительные воронки прибавляют по 4 мл

подкисленного раствора калия хлорида и по 3 мл окислительной

смеси; воронки одновременно встряхивают и оставляют стоять в

течение 1 мин, затем прибавляют по 15 мл изобутилового или

изоамилового спирта, или бутанола-1, одновременно энергично

встряхивают в течение 2 мин и дают разделиться слоям. Водный слой

удаляют, спиртовой фильтруют через бумажный фильтр с 1 г

безводного натрия сульфата. Полученные фильтраты переносят в

кювету флуориметра и измеряют флюоресценцию растворов при длине

волны около 436 нм. Установку прибора проводят по раствору

рабочего стандартного образца тиамина хлорида.

Содержание витамина B1 в пересчете на тиамина хлорид

(C12H17ClN4OS х HCl) в одном драже или одной таблетке в граммах

(X) вычисляют по формуле:

А1 х 0,001 х 100 х V3 х б А1 х V3 х б

Х = --------------------------- = ---------------------

A2 х а х V2 х 1000 А2 х а х V2 х 10000

где А1 - показание флуориметра испытуемого раствора; А2 -

показание флуориметра раствора рабочего стандартного образца

тиамина хлорида; 0,001 - содержание тиамина хлорида в 1 мл

раствора рабочего стандартного образца в миллиграммах; 100, V2, V3

- разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или

количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного

драже или одной таблетки, г; 1000 - пересчет в граммы.

Примечания. 1. Приготовление раствора рабочего стандартного

образца тиамина хлорида: 0,1000 г тиамина хлорида, предварительно

высушенного при температуре от 100 до 105 град. С в течение 2 ч,

растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 л, прибавляют 10

капель концентрированной хлористоводородной кислоты и доводят

объем раствора водой до метки (основной раствор). Раствор годен в

течение 1 мес при хранении в банке оранжевого стекла с притертой

пробкой при температуре от 5 до 10 град. С.

1 мл основного раствора помещают в мерную колбу вместимостью

100 мл и доводят объем раствора водой до метки.

1 мл раствора рабочего стандартного образца содержит 0,001 мг

тиамина хлорида.

Раствор годен в день приготовления.

2. Окислительная смесь: 0,01 г калия феррицианида растворяют в

1 мл воды и доводят объем раствора 15% раствором едкого натра до

25 мл. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

3. Изобутиловый спирт (ч. д. а.) или изоамиловый спирт (ч. д.

а.), или бутанол-1 (ч. д. а.) проверяют на отсутствие

флюоресценции. В случае наличия флюоресценции спирт перед

употреблением подвергают очистке следующим образом: к 1 л спирта

прибавляют от 15 до 20 г активированного угля, энергично

встряхивают в течение 30 мин, оставляют на сутки и отгоняют.

4. Приготовление подкисленного раствора калия хлорида: 125 г

калия хлорида растворяют в 400 мл воды в мерной колбе вместимостью

500 мл, прибавляют 4,5 мл концентрированной хлористоводородной

кислоты и доводят объем раствора водой до метки.

5. Коэффициент пересчета тиамина хлорида на тиамина

бромид-1,29.

4. Определение содержания рибофлавина (витамина В2)

Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или

количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок,

указанных в соответствующих частных статьях, взбалтывают в горячей

воде при подогревании на водяной бане, количественно переносят в

мерную колбу вместимостью 500 мл, охлаждают, доводят объем

раствора водой до метки и фильтруют; первые 10 мл отбрасывают. Из

полученного раствора готовят раствор второго разведения с таким

расчетом, чтобы содержание в нем рибофлавина было около 0,0004 мг

в 1 мл. В кюветы флуориметра помещают: в одну - 10 мл испытуемого

раствора, в другую - 10 мл раствора рабочего стандартного образца

рибофлавина и измеряют флюоресценцию при длине волны около 440 нм.

Параллельно в другие кюветы помещают: в одну - 10 мл испытуемого

раствора и в другую - 10 мл раствора рабочего стандартного образца

рибофлавина, в каждую прибавляют по 0,1 г натрия гидрокарбоната и

натрия гидросульфита, перемешивают и измеряют флюоресценцию

растворов.

Установку проводят по раствору рабочего стандартного образца

рибофлавина.

Содержание C17H2ON4O6 (рибофлавина) в одном драже или одной

таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле:

(А - А1) х 0,0004 х 500 х V3 х б

Х = -------------------------------- =

(В - В1) х а х V2 х 1000

(А - A1) х V3 х б

= --------------------------

(В - В1) х а х V2 х 5000

где А - показание флуориметра испытуемого раствора; А1 - то же

после гашения флюоресценции; В - показание флуориметра раствора

рабочего стандартного образца рибофлавина; В1 - то же после

гашения флюоресценции; 500; V2 и V3 - разведения в миллилитрах;