Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Фармакологическая оценка и использование лекарственных средств на основе производных ароксиалканкарбоновых кислот в ветеринарии и животноводстве. Моно
.pdf
ровления. Контрольным животным-аналогам проводили
лечение в соответствии с «Методическими указаниями
по диагностике, лечению, профилактике акушерско-гинекологических болезней и ветеринарному контролю
за воспроизводительной функцией коров» (МСХ СССР,
1985). Им применяли несколько схем лечения: левотетрасульфин; фурапен; йодопен внутриматочно, согласно инструкции по применению препарата.
Проведенные испытания показали, что терапевтическая эффективность оксилата при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров в среднем составляет 93,7 ± 2,37 % (90,3–96,2 %) и выше эффективности
средств традиционной терапии на 8,35 %.
Способ применения оксилата технологичен, не требует больших затрат рабочего времени, не связан с функциональным состоянием шейки матки и может использоваться при закрытом её канале.
3.2. Применение гинодиксина при послеродовом
гнойно-катаральном эндометрите и мастите у коров
3.2.1. Токсикологическая оценка гинодиксина
В состав препарата гинодиксин входят: производное ароксиалканкарбоновой кислоты (ТОАК); 1,4-диN-окись 2,3-бис (оксиметил) хиноксалин (диоксидин);
органические растворители и дистиллированная вода.
Препарат представляет собой стерильный прозрачный
раствор желто-зеленого цвета.
Острая токсичность. Опыты по определению острой
токсичности гинодиксина были проведены на 100 беспородных белых мышах массой 19–21 г и 24 белых беспородных крысах массой 120–140 г. Белые мыши были разделены на две группы по 50 голов. Животным 1-й группы
81
гинодиксин вводили в желудок в дозах 5,10,15, 20, 25,
30, 35, 40, 45, 50 мл/кг массы тела. На каждую дозу использовали 5 мышей. Белым мышам 2-й группы препарат
вводили внутрибрюшинно, по той же схеме, что и в желудок. На следующем этапе опыта использовали белых
крыс, которым препарат вводили внутрибрюшинно в дозах 3 и 5 мл и в желудок в тех же дозах, используя на
каждую дозу по 6 крыс. За животными вели ежедневные
клинические наблюдения в течение 10 дней (табл. 10).
Таблица 10
Острая токсичность гинодиксина для белых мышей
Внутрибрюшинное
Доза,
мл/кг
Число
павших
мышей
5 0 0 0 0 0 0
10 0 0 0 0 0 0
15 0 0 0 0 0 0
20 0 0 0 0 0 0
25 0 0 0 0 0 0
30 0 0 0 0 0 0
35 1 4 20 0 0 0
40 1 4 20 1 4 20
45 2 3 40 1 4 20
50 3 2 60 2 3 40
введение
Число
выживших
мышей
Смерт-
ность,
%
Введение в желудок
Число
павших
мышей
Число вы-
живших
мышей
Смерт-
ность,
%
При внутрибрюшинном введении гинодиксина в дозах 5–30 мл/кг массы тела (0,1–0,6 мл/гол.) у 15 % белых
мышей наблюдали изменения в клиническом состоянии,
которые характеризовались незначительным снижением
двигательной активности и нарушением координации
движений. Через 3,5–4 ч происходило полное восстановление нарушенных функций. Введение препарата в дозе
0,7–1,0 мл/гол. сопровождалось летальным исходом
82
в 20–60 % случаев. Мыши гибли через 8 ч после введения гинодиксина. На вскрытии павших мышей обнаружен венозный застой в печени, почках, селезенке, гиперемия слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.
У выживших мышей сразу после введения указанных доз
препарата (0,7–1,0 мл/гол.) наблюдали нарушения координации движений, гиподинамию, потерю тактильной
чувствительности. Восстановление нарушенных функций происходило через 3,5–8 ч.
При введении препарата в желудок изменения в клиническом состоянии животных отмечали при введении
его в дозе 0,8 мл (40 мл/кг). Через 30 мин после введения
у мышей наблюдали снижение двигательной активности,
понижение тактильной чувствительности, поверхностное дыхание. Нормализация в клиническом состоянии
наступала через 3–8 ч.
При диапозоне доз 0,8–1,0 мл (40–50 мл/кг) отмечали
гибель мышей. На вскрытии павших мышей обнаружен
венозный застой в печени, почках, селезенке, гиперемия
слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.
ЛД
50 и ЛД16
с графиком ЛД
определяли графически. В соответствии
при внутрибрюшинном введении со-
50
ставила 47,5 мл/кг (по АДВ – 475,0 мг/кг), ЛД16 34 мл/кг
массы тела (по АДВ – 340,0 мг/кг). ЛД
вычислить не
84
удалось в связи с тем, что допустимая доза препарата для
белых мышей при введении в желудок и внутрибрюшинно составляет 1 мл. Указанная максимально допустимая
доза гинодиксина вызывала гибель мышей только в 40
и 60 % случаев соответственно.
Результатами исследований по определению острой
токсичности препарата для белых беспородных крыс
установлено, что введение препарата в дозах 3 и 5 мл
внутрибрюшинно и в желудок не сопровождается изме-
83
нениями клинического состояния и гибелью лабораторных животных.
Субхроническая, хроническая токсичность. В работе
по определению субхронической токсичности использовали белых мышей, которые, как показали предыдущие
опыты, были наиболее чувствительны к препарату. Опыт
проводили в течение 30 суток. Препарат вводили внутрибрюшинно 60 мышам массой тела 18–20 г по следующей
схеме: в 1–4-й день – 0,1 ЛД50, 5–8-й – 0,15 ЛД50, 9–12-й
– 0,225 ЛД50, 13–16-й – 0,338 ЛД50, 17–20-й – 0,507 ЛД50,
21–24-й – 0,76 ЛД50, 25–29–1,12 ЛД50.
Результаты исследований показали, что многократное внутрибрюшинное введение дозы, равной 0,1–1,12
ЛД50, не сопровождалось отклонениями в физиологическом состоянии и гибелью белых мышей, что указывает
на отсутствие кумулятивного эффекта гинодиксина.
Изучение хронической токсичности препарата проводились на лабораторных животных (белые крысы
в количестве 18 голов) и 10 здоровых коровах черно-пестрой породы на 3–5-й дни послеродового периода. Было
сформировано 3 группы белых крыс по 6 голов в каждой. Масса опытных и контрольных крыс в среднем составила 80–100 г: в 1-й опытной – 101 ± 5,53 г, 2-й опытной – 90,4 ± 4,26, контрольной – 98,8 ± 2,58 г.
Животным 1-й группы препарат вводили ежедневно
в течение 15 дней в желудок в дозе, превышающей рекомендованную (0,29 мл/кг массы тела) в 5 раз, животным
2-й группы – в 10 раз. Контрольной группе животных препарат не вводили. До опыта, а затем с периодичностью 10
и 20 дней проводили контрольные взвешивания животных. Через 2 ч, 24 ч, 5 и 10 дней после последнего введения
препарата у крыс 2-й группы и контрольной (в соответствующие периоды опыта) проводили гематологические
84
исследования с определением общепринятыми методами
гематологических показателей: эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов. Биохимические показатели сыворотки
крови определяли следующими методами: содержание
общего белка – рефрактометрическим методом, альбуминов – нефелометрическим, креатинин – цветной рекцией
Яффе, мочевины – диацетилмонооксимовым методом,
АсАТ, АлАТ – методом Райтмана-Френкеля.
Опытной группе коров (5 голов) препарат вводили
в максимальной терапевтической дозе – 150 мл на корову, ежедневно в течение 10 дней. Введение препарата
в большем количестве ограничивалось разрешающей
дозой препаратов, вводимых внутриматочно. Контрольным коровам-аналогам (5 голов) препарат не вводили.
Живая масса опытных и контрольных коров составила
в среднем 340–365 кг: в опытной группе – 351,2 ± 4,23,
контрольной – 355,4 ± 2,21.
За животными вели ежедневные клинические наблюдения. До введения препарата, через 2 ч, 24 ч и 5, 10 дней
после окончания введения у коров опытной и контрольной группы (в соответствующие периоды опыта) проводили лабораторные исследования крови с определением
общепринятыми методами гематологических показателей: эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов. Биохимическое исследование сыворотки крови коров проводили
с использованием спектроанализатора «Инфрапид-61».
Таблица 11
Динамика массы тела опытных крыс, г
Срок исследования
До опыта 101 ± 5,53 90,4 ± 4,26 98,8 ± 2,58
На 10-й день опыта 120 ± 5,02 108,8 ± 3,07 114 ± 4,3
На 20-й день опыта 137 ± 5,17 127 ± 5,15 128 ± 4,37
1-я 2-я контрольная
85
Группа
Таблица 12
5,58 ± 0,49
6,0 ± 0,35
5,8 ± 0,45
5,4 ± 0,17
105,81 ± 9,6
104,5 ± 8,91
104,12 ± 6,23
104,7 ± 9,8
5,8 ± 0,44
5,78 ± 0,31
6,2 ± 0,89
5,74 ± 0,66
65,2 ± 5,64
72,53 ± 5,8
75,23 ± 4,2
78,51 ± 2,33
2,71 ± 0,22
2,63 ± 0,2
2,96 ± 0,09
2,93 ± 0,21
1,40 ± 0,13
1,47 ± 0,14
1,40 ± 0,21
1,47 ± 0,08
62,03 ± 8,52
61,66 ± 3,01
58,97 ± 7,58
59,14 ± 5,97
1,51 ± 0,05
1,53 ± 0,04
1,53 ± 0,05
1,50 ± 0,04
9,36 ± 0,89
8,16 ± 0,45
8,95 ± 0,31
7,25 ± 0,54
Динамика гематологических показателей у коров в условиях хронического опыта
После окончания введения препарата
через 2 ч через 24 ч через 5 дней через 10 дней
Показатель До введения
5,98 ± 0,13
6,02 ± 0,14
6,03 ± 0,24
12
1 2 3 4 5 6
Эритроциты, 10
5,60 ± 0,28
5,25 ± 0,21
5,75 ± 0,19
106,0 ± 10,12
105,5 ± 5,5
104,5 ± 2,51
5,51 ± 0,58
6,38 ± 0,92
105,5 ± 10,2
6,5 ± ,21
6,25 ± 0,54
103,8 ± 10,09
6,37 ± 0,78
5,57 ± 0,73
104,6 ± 5,62
9
Гемоглобин, г/л
Лейкоциты, 10
77,7 ± 6,82
74,21 ± 9,63
74,0 ± 9,51
69,61 ± 5,43
68,4 ± 8,50
74,23 ± 3,32
Общий белок, г/л
86
2,7 ± 0,2
2,63 ± 0,14
2,51 ± 0,25
Кальций, ммоль/л
2,99 ± 0,27
3,01 ± 0,27
2,96 ± 0,25
1,37 ± 0,08
1,29 ± 0,16
1,39 ± 0,29
1,95 ± 0,23
1,45 ± 0,19
1,38 ± 0,04
Фосфор неорганический,
ммоль/л
59,33 ± 8,5
1,51 ± 0,07
62,34 ± 5,89
60,23 ± 3,5
1,51 ± 0,07
58,61 ± 2,35
1,51 ± 0,06
60,94 ± 6,52
59,21 ± 7,06
2
Щелочной резерв, об.%
СО
Витамин А, мкмоль/л
1,56 ± 0,05
1,52 ± 0,04
1,51 ± 0,04
6,96 ± 0,29
6,0 ± 0,29
8,88 ± 0,71
Витамин Е, мкмоль/л
6,0 ± 0,63
5,28 ± 0,33
6,24 ± 0,35
Окончание табл. 12
1 2 3 4 5 6
43,61 ± 3,52
44,66 ± 3,01
42,8 ± 2,65
43,50 ± 5,22
45,2 ± 2,81
43,48 ± 3,03
44,7 ± 1,86
40,80 ± 2,33
41,79 ± 2,88
43,17 ± 2,06
Альбумины, %
14,07 ± 1,23
13,92 ± 1,02
14,47 ± 2,23
13,89 ± 2,56
15,06 ± 2,01
14,71 ± 1,56
14,71 ± 1,04
15,02 ± 1,25
15,17 ± 1,62
14,82 ± 1,17
Альфа-глобулины, %
15,96 ± 2,55
15,35 ± 1,56
17,23 ± 3,02
15,04 ± 1,91
16,09 ± 2,03
14,62 ± 1,86
14,00 ± 2,13
16,52 ± 1,96
16,80 ± 2,13
14,41 ± 1,82
Бета-глобулины, %
26,03 ± 3,09
25,88 ± 2,92
25,67 ± 2,56
25,94 ± 3,45
24,71 ± 2,09
25,36 ± 1,06
25,23 ± 3,66
24,86 ± 1,23
24,71 ± 3,25
25,50 ± 1,51
Гамма-глобулины, %
На протяжении опыта
у лабораторных крыс не
выявлено явлений интоксикации. Клиническое состояние, поведенческие реакции, показатели динамики
массы тела соответствовали таковым у контрольных
животных (табл. 11).
Гематологические показатели у опытных и контрольных крыс соответствовали физиологической
норме. У опытных коров
также не отмечено изменений в клиническом состоянии (табл. 12).
Результаты опытов
свидетельствуют об отсутствии отрицательного влияния препарата на морфологические и биохимические
показатели крови лабораторных животных и крупного рогатого скота. При
гистологическом исследовании внутренних органов
белых крыс (печень, почки,
легкие, сердце, селезенка,
желудок, тонкий и толстый
отделы кишечника) патоморфологических измене-
Примечание. В числителе – опытная группа, в знаменателе – контрольная.
ний не выявлено.
87
Сенсибилизирующее и местноразражающее дей-
ствие гинодиксина. Изучение сенсибилизирующего влия-
ния препарата проводили на морских свинках-альбиносах
массой 250–300 г путем накожной аппликации препарата
в разведении 1 : 2. С этой целью на боковой поверхности туловища животных выстригали участки площадью
6 см 2. Препарат наносили в течение 14 дней на участок
правой боковой поверхности туловища 5 морских свинок
в количестве 0,5 мл. С 15-го дня, с целью определения сенсибилизирующего влияния, препарат наносили на участок левой боковой поверхности (участок разрешающего
нанесения) в течение 11 дней с последующим наблюдением за животными в течение 14 дней. При этом учитывали
сроки появления и выраженность воспалительной реакции. На 15-й день опыта исследовали капиллярную проницаемость кожи на участке после многократного нанесения препарата методом Мак Клюра и Олдрича. С этой
целью в области участка правой боковой поверхности
опытных морских свинок после 15-кратного нанесения
препарата внутрикожно вводили 0,2 мл стерильного физиологического раствора с последующим учетом времени рассасывания внутрикожного волдыря. Аналогичные
исследования проводили на группе контрольных свинок.
Исследования по определению местного раздражающего действия гинодиксина на конъюнктиву проводили
на лабораторных животных (кроликах) и 5 здоровых коровах черно-пестрой породы через 10 дней после отела.
Препарат вводили в конъюнктивальный мешок кроликов
по 1–2 капли однократно. В конъюнктивальный мешок
второго глаза препарат не закапывали и использовали
его в качестве контроля. За животными вели наблюдения
в течение 5 дней.
Для оценки действия препарата на слизистую оболочку влагалища препарат вводили по 100 мл однократно
88
пяти опытным коровам. Трем животным-аналогам вводили стерильный физиологический раствор в количестве
100 мл. Оценку местного влияния проводили на основании клинических наблюдений в течение трех дней после
введения препарата, а также на основании исследования
мазков слизистой оболочки влагалища, взятых через 48 ч
после введения препарата.
Действие препарата на ткани молочной железы оценивали на основании лабораторных исследований молока и изучения морфологической структуры паренхимы
вымени после интрацистернального введения препарата. Опыты проводили на трех лактирующих коровах
черно-пестрой породы, которые по разным причинам
(заболевание конечностей неинфекционного характера, генетически обусловленная низкая продуктивность)
были подвергнуты выбраковке с последующим забоем.
Перед опытом проводили клиническое исследование вымени и лабораторные исследования молока с целью исключения мастита. В переднюю левую долю вымени после доения вводили 10 мл гинодиксина. Правая передняя
доля служила контролем. Молоко исследовали через 6, 24
и 48 ч после введения препарата. В молоке определяли
внешний вид, запах, цвет; ставили реакцию с 10 %-м раствором мастидина, пробу отстаивания. После убоя животных брали кусочки паренхимы вымени, фиксировали
в жидкости Карнуа. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином и просматривали в световом микроскопе МБИ-15.
Результаты определения раздражающего и сенсибилизирующего действия гинодиксина представлены
в табл. 13.
При клиническом осмотре глаз опытных кроликов
через 3 ч после закапывания выявлена незначительная
гиперемия конъюнктивы. Через 8 ч конъюнктива имела
89
бледно-розовый цвет, склера глаза без участков гиперемии. Через 3 дня после закапывания патологических изменений не выявлено.
При осмотре слизистой оболочки влагалища коров
через 3, 8, 12 ч и через 3 дня после введения препарата
макроскопических изменений не обнаружено. Слизистая
оболочка розового цвета, с умеренной складчатостью,
без очагов гиперемии. Влагалищные выделения прозрачные, без запаха или с запахом, свойственным препарату.
Таблица 13
Раздражающее и сенсибилизирующее действия гинодиксина
Контрольная
56,2
55,9
группа
57,0
57,0
56,5
56,6
Показатель
Время рассасывания солевого волдыря, мин.
Наличие воспалительных изменений на
участке разрешающего
нанесения
Опытная группа
Номер животного
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
56,3
57,0
56,6
57,0
Отсутствуют
При изучении цитологического состава мазков слизистой оболочки влагалища через 24 и 48 ч после введения
препарата значительных изменений в клеточном составе
по сравнению с мазками контрольных животных не отмечено. В клеточном составе преобладали нейтрофилы,
в основном без признаков дегенерации, эпителиальные
клетки. Микрофлора обнаруживалась в незначительном
количестве, эритроциты отсутствовали.
Состояние доли вымени соответствовало физиологической норме. Внешний вид молока не изменялся, проба
с 10 %-м раствором димастина и проба отстаивания через
6, 24, 48 ч отрицательные.
90
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]