Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Фармакологическая оценка и использование лекарственных средств на основе производных ароксиалканкарбоновых кислот в ветеринарии и животноводстве. Моно
.pdf
При анализе использовали микроколонку (2 х 60 мм),
заполненную сорбентом «Нуклеосил-С18» (5 мкм). Элюент ‒ смесь метанола, ацетонитрила и хлороформа в соотношении 25 : 65 : 10. Скорость элюции – 100 мкл/мин.
Способ УФ-детекции – многоволновый (260–290 нм).
Подготовка пробы. К 100 мкл сыворотки добавляли 100 мкл метилового и 100 мкл этилового спирта для
коагуляции и осаждения белков. После встряхивания
(10 с) в пробу приливали 500 мкл гексана. Затем повторно встряхивали (60 с) и центрифугировали при 3000 тыс.
об/мин в течение 3 мин, после чего отбирали гексановый
слой и выпаривали его в токе азота или в вакууме. После
выпаривания экстракт перерастворяли в 30 мкл метилового спирта и наносили на микроколонку.
В качестве свидетелей витамина Е использовали калибровочные растворы стандартов α-токоферола (Sigma,
США). Содержание витамина Е (мг%) расчитывали по
величине амплитуды пиков, полученных на хроматограмме, в пересчете на стандарт.
Оценку дозозависимого эффекта биостила проводили
хемилюминесцентым методом по методике Г. И. Клебанова и др. (1999) по степени торможения ХЛ тестируемыми образцами сыворотки крови в системе Hb + Н2О2 + люминол.
Для оценки ПОА и АОА биостила в кюветы для хемилюминесцентного анализа (вместо сыворотки крови)
добавляли препарат в следующих концентрациях: 100,
75, 50, 25 и 10 %.
Указанные исследования проведены на базе лаборатории патофизиологии ГУ Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН (г. Новосибирск) совместно с Д.Д Цырендоржиевым, В. В. Курилиным.
Данные опыта по определению влияния биостила
и его компонентов на активность неферментной антиок-
141
сидазной защиты организма и уровень перекисного окис-
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
Группа
Малоновый диальдегид, мкм\л
АСД
фракция 2
Контроль
Биостил
ТОАОК
12
3
4
ления липидов представлены в табл. 38.
Таблица 38
Содержание МДА и α-токоферола в сыворотке крови мышей
Показатель Контроль
Малоновый
диальдегид,
1,22 ± 0,02 0,99 ± 0,03 0,96 ± 0,07* 0,96 ± 0,06*
мкм/л
Αльфатокоферол,
8,46 ± 0,023 9,62 ± 0,16* 11,22 ± 0,82*
мкм/л
* Р < 0,05; ** Р < 0,01 по сравнению с контролем.
АСД
фракция 2
ТОАОК Биостил
12,24 ± 0,69**
Рис. 5. Концентрация малонового диальдегида в сыворотке крове
белых мышей под влиянием биостила и его компонентов
Концентрация малонового диальдегида в сыворотке крови мышей контрольной группы была достоверно
выше, чем у мышей опытных групп, которым вводили
биостил и ТОАОК, на 21,32 % (Р < 0,05) в обоих случаях. Изменение концентрации малонового диальдегида
142
0
2
4
6
8
10
12
14
1234
А-токоферол, мкм/л
ТОАОК
биостил
АСД фракция 2
контроль
Группа
в сыворотке крови мышей после введения АСД фракции
2 было недостоверным. Указанная зависимость отражена
графически (рис. 5, 6).
Рис. 6 Содержание α-токоферола в сыворотке крови белых мышей
под влиянием биостила и его компонентов
Концентрация α-токоферола достоверно повышалась
по сравнению с контролем после введения биостила на
44,68 % (Р < 0,01), ТОАОК ‒ на 32,62 (Р < 0,05), АСД фракции 2 ‒ на 12,06 % (Р < 0,05). Относительно компонентного состава концентрация α-токоферола после введения
биостила была достоверно выше ‒ на 27,23 % (Р < 0,05),
чем у мышей после введения АСД фракции 2.
Полученные данные указывают на то, что биостил
и его компоненты оказывают влияние на перекисное
окисление липидов, способствуя снижению концентрации малонового диальдегида и повышению содержания
биооксиданта α-токоферола. Ингибирование процесса
перекисного окисления липидов ТОАОК, АСД фракции
2 усиливается при их сочетании в препарате.
143
0
2
4
6
8
10
12
14
0 7 14 21 мин
10
5
имп/ мин
Контроль 100%
75%
50%
25% 10%
Рис. 7. Дозозависимое антиоксидантное свойство биостила in vitro
Результаты исследования in vitro дозозависимого антиоксидантного эффекта биостила показали, что в тест
системе Hb + Н2О2 + люминол максимальное количество
хемилюминесцентных (ХЛ) импульсов составляет 13 · 105
(рис. 7). При добавлении 10 % биостила в эту систему
число ХЛ-импульсов снижалось в 6,8 раза, 50 % – до
0,9 · 105 имп/мин, а при 100 % – до 0,35 · 105 имп/мин, что
свидетельствует о том, что данный препарат обладает
прямым антиоксидантным действием.
144
4.1.4. Профилактика желудочно-кишечных
и респираторных болезней телят постнатального
периода
Исследования по оценке профилактической эффективности биостила при желудочно-кишечных заболевания новорожденных телят проводили в ГУСП ОПХ
«Элитное» Новосибирской области. В опыте использовали телят 1–2-дневного возраста в количестве 36 голов,
которые были разделены по принципу аналогов на две
группы – опытную и контрольную.
Животным опытной группы применяли биостил на
фоне проводимых в хозяйстве ветеринарно-санитарных мероприятий, в дозе 0,05 мл/кг массы тела один раз
в день с утренней выпойкой молока в течение 10 дней.
Телята контрольной группы биостил не получали. До
опыта и через 5 дней после его окончания у 5 телят опытной и контрольной групп брали пробы крови для определения следующих показателей: количество лейкоцитов,
эритроцитов (в камере Горяева), гемоглобина (гемоглобин-цианидным методом с использованием реактива гемоглобин-цианид ГСО 6096–91), общего белка (рефрактометрическим методом), лизоцимная, бактерицидная
активность (нефелометрическим методом) по С. И. Плященко, В. Т. Сидорову (1979), фагоцитарная активность
по методике С. И. Плященко, В. Т. Сидорова (1985).
Телята опытной группы были активны, подвижны, отличались от телят контрольной группы хорошим
аппетитом. У телят опытной группы болезни желудочно-кишечного тракта наблюдались в 27,78 % случаев,
контрольной – 66,67; респираторного тракта – 11,11
и 16,67 % соответственно (табл. 39).
145
Таблица 39
Результаты применения биостила для профилактики
заболеваний новорожденных телят
Показатель
Количество телят в группе 18 18
Заболеваемость, %
патология желудочно-кишечного
тракта
респираторные болезни
патология опорно-двигательного
аппарата
Среднесуточный прирост массы
тела, г
Сохранность, % 100 100
опытная контрольная
27,77
11,11
Отсутствует
786,86 ± 19,05 639,14 ± 17,25
Группа
66,67
16,67
Отсутствует
В контрольной группе заболеваемость указанными
патологиями была выше на 38,87 и 5,56 % соответственно. Среднесуточный прирост массы тела у телят опытной группы превосходил таковой в контрольной группе
на 147,72 г.
Уровень гемоглобина у телят опытной группы после
лечения был выше на 6,22 %, чем у телят контрольной.
Количество эритроцитов увеличилось на 18,84 %, в контрольной группе – на 10,76 (табл. 40).
Через пять дней после окончания курса применения
биостила значение БАСК и фагоцитарной активности
достоверно повысилось на 49,02 и 27 % соответственно,
у телят контрольной группы ‒ на 14,21 и 5,34 %.
Таким образом, оральное применение биостила новорожденным телятам в течение 10 дней один раз в сутки
в дозе 0,05 мл/кг массы тела способствует сокращению
заболеваемости новорожденных телят желудочно-кишечными и респираторными болезнями, активизации факторов клеточной и гуморальной защиты организма, благоприятно влияет на рост и развитие телят.
146
Таблица 40
Гематологические показатели у телят профилакторного
периода до и после применения биостила
Показатель Опытная группа Контрольная группа
Гемоглобин, г/л
Эритроциты, 10
Лейкоциты, 10
Общий белок, г/л
ЛАСК, %
БАСК, %
Фагоцитарная
активность, %
Примечание. В числителе ‒ до лечения, в знаменателе – после
лечения.
*Р < 0,05; ** Р < 0,01.
12
9
95,65 ± 1,36
108,41 ± 1,25**
6,58 ± 0,22
7,82 ± 0,15*
4,35 ± 0,51
12,11 ± 0,75*
72,68 ± 4,98
75,38 ± 2,37
9,82 ± 0,56
11,25 ± 0,37
32,56 ± 1,15
48,52 ± 1,10*
36,71 ± 1,5
46,62 ± 1,21*
94,36 ± 1,49
102,05 ± 1,15**
6,41 ± 0,18
7,10 ± 0,16*
4,82 ± 0,12
9,25 ± 0,91*
69,93 ± 5,06
72,61 ± 3,54
8,97 ± 0,83
9,56 ± 0,28
34,42 ± 1,09
39,31 ± 1,20
38,20 ± 0,96
40,24 ± 1,12
Испытание профилактической эффективности биостила при постнатальных заболеваниях у телят в производственном опыте проводили в 6 хозяйствах Новосибирской области на 1090 телятах профилакторного периода
при 678 в контроле. Биостил применяли по схеме, описанной выше, телятам контрольных групп препарат не
применяли.
Применение биостила способствовало сокращению
заболеваемости телят патологией желудочно-кишечного
тракта в 2,4 раза, органов дыхания ‒ в 1,4 раза.
147
4.1.5. Лечение желудочно-кишечных болезней у телят
постнатального периода
Исследования по оценке терапевтической эффективности биостила при желудочно-кишечных заболеваниях
новорожденных телят проводили в ГУСП ОПХ «Элитное» Новосибирской области. Биостил применяли телятам 3–7-дневного возраста с признаками желудочно-кишечных заболеваний (диарея, угнетение, пониженный
аппетит, субфебрильная температура тела) в количестве
40 голов, которые были разделены по принципу аналогов
на две группы – опытную и контрольную.
Животным опытной группы применяли биостил
в дозе 0,05 мл/кг массы тела подкожно в течение 3–5
дней и антибиотикотерапию. Антибиотики использовали согласно наставлению по их применению и с учетом
чувствительности к ним микрофлоры (энрофлон 5 %-й
раствор в дозе 0,1 мл/кг массы тела). Чувствительность
микрофлоры, выделенной при диарее новорожденных
телят, определяли методом дисков согласно «Методическим указаниям по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных», утвержденным ГУВ МСХ
СССР 30.10.71 г.
Животных контрольной группы подвергали монотерапии антибиотиками на фоне симтоматического лечения. До лечения и через 5 дней после проведенного курса
брали пробы крови и оценивали количество лейкоцитов,
эритроцитов (в камере Горяева), гемоглобина (гемоглобин-цианидным методом с использованием реактива
гемоглобин-цианид ГСО 6096–91), лейкоцитарную формулу и СОЭ (стандартными методами), фагоцитарную
активность по методике С. И. Плященко, В. Т. Сидорова
(1985).
148
Таблица 41
Результаты применения биостила для лечения
желудочно-кишечных болезней у новорожденных телят
Показатель
Количество телят в группе 20 20
Срок лечения, дней 3,2 ± 0,63 5,86 ± 0,73
Среднесуточный прирост массы
тела, г
Сохранность, % 100 95
опытная контрольная
633,54 ± 35,32 545,5 ± 21,38
Группа
Как показали исследования, телята опытной группы
выздоравливали в среднем на 2–3 дня раньше, чем контрольной. В течение опыта у телят был хороший аппетит, сохранность составила 100 %. В контрольной группе
один теленок пал на 3-й день болезни. Применение биостила позволило исключить влияние неблагоприятных
факторов на рост и развитие животных. Это подтверждается результатами контрольных взвешиваний. Среднесуточные приросты массы тела у телят опытной группы
были выше на 88,04 г (16,2 %), чем у телят контрольной
(табл. 41).
При анализе результатов гематологических исследований установлено, что у телят с симптоматикой желудочно-кишечного заболевания при лечении биостилом
в комплексе с антибиотиками динамика гематологических показателей несколько отличается от таковой у телят, которые подвергались монотерапии антибиотиками
(табл. 42).
Через 5 дней после окончания лечения у телят опытной группы наблюдается достоверное повышение уровня гемоглобина (на 15,99 %) и лейкоцитов (36,58 %) при
одновременном снижении количества сегментоядерных
нейтрофилов, повышении процентного содержания лимфоцитов и моноцитов. Фагоцитарная активность нейтро-
149
Таблица 42
Влияние биостила на гематологические показатели
больных телят
Показатель
Гемоглобин, г/л
Эритроциты, 1012л
Лейкоциты, 109л
СОЭ, мм/ч
Лейкоцитарная формула, %
базофилы 0 0
эозинофилы
миелоциты 0 0
юные нейтрофилы 0 0
палочкоядерные нейтрофилы
сегментоядерные нейтрофилы
лимфоциты
моноциты
Фагоцитарная активность, %
Примечание. В числителе ‒ до лечения, в знаменателе – после
лечения.
* Р < 0,05; ** Р < 0,01.
Опытная
группа
94,89 ± 1,06**
110,07 ± 2,85
6,05 ± 0,08
6,88 ± 0,13
8,2 ± 0,11*
11,2 ± 0,75
1,31 ± 0,08
1,2 ± 0,07
3 ± 0,7
4,2 ± 0,9
11,6 ± 1,2
8 ± 0,95
38,2 ± 1,03*
33,2 ± 1,11
44,2 ± 1,14*
49,4 ± 1,11
3 ± 0,56*
5,2 ± 0,21
28,52 ± 1,34
37,43 ± 1,16**
Контрольная
группа
96,84 ± 1,93
107,08 ± 1,12
6,8 ± 0,09
6,78 ± 0,17
7,6 ± 0,19
8,4 ± 0,91
1,28 ± 0,09
1,2 ± 0,09
13,6 ± 0,51
12,2 ± 0,78
39,8 ± 1,02
35,4 ± 1,10
42 ± 2,01
45,63 ± 2,13
3 ± 0,09
4,2 ± 0,06
24,23 ± 1,66
29,37 ± 1,17
2
2,2
филов у телят опытной группы достоверно повысилась
на 31,24 %. Во всех случаях динамика гематологических
показателей находилась в пределах физиологической
нормы. У телят контрольной группы подобные изменения в гематологическом профиле были менее выражены.
150
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]