Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Фармакологическая оценка и использование лекарственных средств на основе производных ароксиалканкарбоновых кислот в ветеринарии и животноводстве. Моно
.pdf
введения препарата. В соответствии с периодами взятия
крови у опытных животных брали кровь у телят 1-й и 2-й
контрольной групп. В пробах определяли общепринятыми методами морфологические показатели крови: эритроциты, гемоглобин, лейкоциты.
Для оценки функционального состояния печени и почек исследовали биохимические показатели сыворотки
крови следующими методами: общий белок‒рефрактометрическим методом, мочевину – диацетилмонооксимовым, АсАТ, АлАТ – методом Райтмана-Френкеля. Для
исследований использовали наборы реактивов для биохимии «OLVEXS – Diagnosticum». Общий холестерин
определяли ферментативным методом с использованием
набора реагентов «НОВО» [Новохол (100)]. Статистическую обработку данных проводили в программе Microsoft
Excel, состоящей в пакете программ Microsoft Ofce 7.0.
На протяжении опыта у мышей опытных групп не
выявлено явлений интоксикации. Клиническое состояние, поведенческие реакции, показатели динамики массы тела не отличались от животных контрольной группы
(табл. 31, 32).
Показатели общего физиологического состояния
Группа
животных
1-я
2-я
Контроль-
ная
и динамической активности белых мышей
Аппетит
и поведенческие реакции
Соответствуют норме,
норковый рефлекс сохранен
Соответствуют норме,
норковый рефлекс сохранен
Соответствуют норме,
норковый рефлекс сохранен
131
Вертикальная двига-
тельная активность
6,98 ± 0,34
6,20 ± 0,25
6,15 ± 0,51
Таблица 31
Таблица 32
Динамика массы тела белых мышей
в условиях хроничеcкого опыта, г
Сутки после опыта
До опыта 12,02 ± 0,23 12,20 ± 0,42 11,00 ± 0,18
7 11,0 ± 0,36 12,40 ± 0,52 11,28 ± 0,21
15 12,69 ± 0,41 13,04 ± 0,19 11,91 ± 0,37
23 13,42 ± 0,11 12,7 ± 0,16 12,37 ± 0,43
31 15,13 ± 0,13 13,75 ± 0,56 12,09 ± 0,18
38 19,39 ± 0,12 17,64 ± 0,71 13,53 ± 0,23
60 22,33 ± 0,21 21,98 ± 0,33 18,66 ± 0,33
1-я 2-я 3-я
Группа
Результаты исследований антитоксической функции
печени белых мышей на основе медикаментозного сна
отражены в табл. 33.
Таблица 33
Продолжительность гексеналового сна у белых мышей
после введения биостила
Длительность сна, мин
через 1 ч
после
введения
67,53±2,45 48,1±1,23 62,0±1,12
67,5 ± 2,91
через 5 ч
после
введения
46,58 ± 0,42
46,23 ± 1,36
через 24 ч
после
введения
60,25 ± 1,07
61,53 ± 1,21
Группа
1-я 80
2-я 80
Кон-
трольная
Доза
гексе-
нала,
мг/кг
80
Метод
введения
Внутрибрюшинно
Внутрибрюшинно
Внутрибрюшинно
66,82 ± 3,61
По литературным данным, длительность гексеналового сна, равная 29,9–62,0 мин, оценивается как норма.
Исходя из этого, результаты, полученные в опыте, дают
основание характеризовать медикаментозный сон белых
мышей на фоне биостила как нормальный.
132
Гематологические показатели у опытных и контрольных крыс соответствовали физиологической норме с незначительными колебаниями. Отмечено повышение содержания эритроцитов и гемоглобина у крыс опытных
групп: эритроцитов ‒ на 20 % в 1-й группе и на 3 % во
2-й. В целом на 30-й день опыта содержание эритроцитов у крыс 1-й группы превышало этот показатель у крыс
контрольной группы на 7,14 %. Концентрация гемоглобина у крыс 1-й группы повысилась на 9,6 %, 2-й – на
9,11, у контрольных крыс – на 3,61 %. Активность АсАТ,
АлАТ в сыворотке крови опытных и контрольных крыс
колебалась в пределах физиологической нормы (Р<0,05).
Другие биохимические показатели (креатинин, мочевина) соответствовали физиологической норме, в течение
всего опыта изменялись с незначительными колебаниями
и имели тенденцию к снижению.
Данные таблицы указывают на то, что биостил в дозах, превышающих в 5 и 10 раз среднюю терапевтическую дозу для телят, не оказывает неблагоприятного
влияния на гематологические показатели, на функцию
печени и почек белых крыс. При гистологическом исследовании внутренних органов белых крыс (печень, почки,
легкие, сердце, селезенка, желудок, тонкий и толстый отделы кишечника) патоморфологических изменений не
выявлено.
У телят опытных групп не отмечено изменений в
клиническом состоянии. Гематологические исследования
показали, что морфологические и биохимические показатели сыворотки крови телят в период применения препарата и спустя 5 дней после окончания его применения
находились в пределах физиологической нормы. У опытных телят отмечено достоверное повышение содержания
уровня гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов. К концу
133
опыта у телят, получавших биостил, отмечали повышение уровня АсАТ и снижение АлАТ. Количество холестерина и мочевины у телят 1–3-й опытных групп, в отличие
от телят контрольной группы, к концу опыта достоверно
снижалось (табл. 34, 35).
Приведенные выше данные свидетельствуют об отсутствии отрицательного влияния препарата на морфологические и биохимические показатели крови лабораторных животных и крупного рогатого скота.
Раздражающее и сенсибилизирующее действие биостила. Исследование проводили на морских свинках-аль-
биносах массой 250–300 г путем накожной аппликации
препарата. С этой целью на боковой поверхности туловища животных выстригали участки площадью 6 см 2..
Препарат наносили в течение 14 дней на участок правой
боковой поверхности туловища 5 морских свинок в количестве 0,6 мл. С 15-го дня, с целью определения сенсибилизирующего влияния, препарат наносили на участок
левой боковой поверхности в течение 11 дней с последующим наблюдением за животными в течение 14 дней.
На 15-й день опыта исследовали капиллярную проницаемость кожи на участке после многократного нанесения
препарата методом Мак Клюра и Олдрича. С этой целью
в области участка правой боковой поверхности опытных
морских свинок после 15– кратного нанесения препарата
внутрикожно вводили 0,2 мл стерильного физиологического раствора с последующим учетом времени рассасывания внутрикожного волдыря. Аналогичные исследования проводили на группе контрольных свинок.
На основании проведенных исследований установили, что препарат не обладает раздражающим и сенсибилизирующим действием. У животных не было выявлено
патологических изменений на поверхности кожи. Физио-
134
логический раствор натрия хлорида на участках кожи
контрольных и опытных животных резорбировался в течение 56,60 ± 1,19 и 56,62 ± 1,27 мин соответственно.
Местно-раздражающее действие биостила на сли-
зистые оболочки (конъюнктиву). Исследования прово-
дили на 9 кроликах массой 2,0–2,3 кг. Препарат вводили
в конъюнктивальный мешок кроликов по 1–2 капли однократно в нативном состоянии, 10- и 20 %-й концентрации. В конъюнктивальный мешок второго глаза препарат
не закапывали и использовали его в качестве контроля.
За животными вели наблюдения в течение 5 дней после
закапывания препарата.
При клиническом осмотре глаз опытных кроликов
сразу после нанесения препарата отмечали гиперемию
конъюнктивы, признаки которой исчезали через 5–10 мин
после инстилляции препарата. Через 3 и 8 ч, а также в последующий период наблюдения конъюнктива имела бледно-розовый цвет, роговица и склера патологически не изменены, васкуляризация склеры соответствует норме.
На основании результатов исследований нами сделан
вывод об отсутствии раздражающего действия биостила
на конъюнктиву.
4.1.2. Фармакокинетика препарата биостил
Опыты проводились на телятах черно-пестрой голштинизированной породы. Для проведения эксперимента были набраны четыре группы телят по 3 головы в каждой. Телятам 1-й группы биостил вводили однократно
пероральным способом по 0,05 мл/кг массы; телятам 2-й
группы – перорально в той же дозе один раз в день в течение 10 дней; телятам 3-й группы – однократно подкожно по 0,05 мл/кг массы; телятам 4-й группы – подкожно
135
в той же дозе один раз в день в течение 5 дней. Для анализа использовали гепаринизированную кровь, которую
брали из яремной вены по 7–10 мл до введения биостила
и через 2, 6, 12, 24, 36, 48 ч после введения. Спектрофотометрический анализ проводили на спектрофотометре
СФ-46 при длине волны 197 нм. Для построения калибровочных кривых готовили разведения синтетического
ТОАОК в стабилизированной гепарином крови в концентрации 1 мг/мл. После растворения кровь фильтровали
через обычный бумажный фильтр, центрифугировали
при 3000 об/мин в течение 15 мин после предварительного осаждения трихлоруксусной кислотой.
На следующем этапе из раствора синтетического аналога фитогормона в крови готовили разведения в дистиллированной воде. Для этого в мерные колбы вместимостью 50 см 3 вносили соответственно 0,025; 0,05; 0,1; 0,2;
0,3; 0,4; 0,5 см 3 разведения (0,5; 1,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0;
8,0; 9,0; 10,0 мкг/мл), доводили объём до метки дистиллированной водой. В полученных растворах определяли
оптическую плотность и строили график.
Определение синтетического аналога фитогормона
в опытных образцах крови проводили после их предварительной обработки таким же способом, как и построении калибровочных кривых. Разведение готовили следующим образом: 1 см 3 крови помещали в колбу объёмом
50 см 3, доводили объём до метки и измеряли оптическую
плотность на СФ-46 при 197 нм. Раствором сравнения
служили пробы, не содержащие ТОАОК, которые обрабатывали аналогичным образом.
Чувствительность определения оценивали эмпирическим путем. Чувствительность составила 0,5 мкг/мл,
абсолютная чувствительность в пробах объёмом 100 мл –
50 мкг. Данные анализа приведены в табл. 36, 37.
136
Таблица 36
Содержание ТОАОК в крови после орального введения биостила
Период
исследования, ч
До введения 0 0
2 1,52 ± 0,25 1,68 ± 0,37
6 1,25 ± 0,12 1,37 ± 0,35
12 0,95 ± 0,02 1,05 ± 0,18
24 0,46 ± 0,03 0,52 ± 0,08
36 0,20 ± 0,02 0,22 ± 0,02
48 0 0
Содержание ТОАОК, мкг/мл
однократное
введение
ежедневное введение в
течение 10 дней
Полученные результаты указывают, что синтетический аналог фитогормона после однократного орального
введения определяется в крови через 2 ч после введения
в концентрации 1,52 мкг/мл. Через 6 ч концентрация ТОАОК снижается на 17,8 %, через 12 и 24 ч соответственно
на 27,5 и 69,74 % по сравнению с максимально определяемой. Через 36 ч трекрезан определяется в незначительном количестве (0,20 мкг/мл). Аналогичные закономерности в динамике концентрации синтетического аналога
фитогормона в крови обнаруживаются после многократного орального введения биостила.
Таблица 37
Содержание ТОАОК в крови
после подкожного введения биостила
Период иссле-
дования, ч
До введения 0 0
2 2,40 ± 0,18 2,56 ± 0,25
6 1,29 ± 0,12 1,37 ± 0,19
12 0,87 ± 0,13 0,88 ± 0,12
24 0,42 ± 0,03 0,53 ± 0,10
36 0,19 ± 0,06 0,16 ± 0,02
48 0 0
Содержание ТОАОК, мкг/мл
однократное
введение
ежедневное введение
в течение 10 дней
137
Данные, приведенные в табл. 37, показывают, что
синтетический аналог фитогормона после однократного
и многократного подкожного введения быстро всасывается в кровь и выделяется из организма в течение 36 ч.
Максимальная концентрация (2,40 мкг/мл) определяется
через 2 ч после введения и отличается более высокими
значениями, чем при оральном введении.
На основании полученных данных можно сделать вы-
вод о том, что биостил после однократного, многократного орального и подкожного введения в терапевтических
дозах быстро всасывается в кровь, обнаруживается в максимальной концентрации через 2 ч, кумулятивным эффектом не обладает и выводится из организма в течение 36 ч.
Животноводческую продукцию после использования
биостила можно использовать без ограничений в связи
с тем, что входящие в состав препарата биостил компоненты – синтетический аналог фитогормона и антисептик-стимулятор Дорогова (АСД Ф-2), относятся к малотоксичным соединениям. Их использование животным
не требует введения сроков ограничения использования
продуктов животноводства в пищевых целях («Наставление по применению синтетического аналога фитогормона в ветеринарии № 13–5–2/198 от 11.11.1994 г.»; «Наставление по применению препарата АСД в ветеринарии
от 07.02.1997 г.»).
4.1.3. Влияние биостила и его компонентов
на активность неферментной антиоксидазной
защиты организма и уровень перекисного окисления
липидов
Интенсивность перекисного окисления липидов
(ПОЛ) определяется степенью изменения жирнокислотного состава липидов и концентрацией полиненасыще-
138
ных жирных кислот. Высокая интенсивность ПОЛ вызывает морфологические изменения в различных клеточных
элементах тканей организма, которые характеризуются
увеличением проницаемости и разрушением цитоплазматических, внутриклеточных мембран, митохондрий
и микросом. Снизить активность разрушающего процесса способны так называемые биологические ингибиторы-антиоксиданты. В организме эту функцию выполяют
токоферол (витамин Е), убихинон, убихроменол.
Механизм действия токоферола-биооксиданта заключается в его протективном действиии на сульфгидрильные группы ферментных белков и ингибиции образования диальдегидов при окислении липидов, содержащих
непредельные жирные кислоты.
Оценить уровень ПОЛ и биооксидантную активность организма, а также влияние некоторых факторов,
в том числе химических веществ и их композиций, на
вышеперечисленные показатели можно на основе определения концентрации малонового диальдегида (МДА)
и α-токоферола в сыворотке крови.
Исследования проводили на беспородных белых мышах массой 18–20 г. В опыте использовали 20 мышейаналогов, разделенных на 4 группы. Животные находились в одинаковых условиях кормления и содержания.
Мышам 1-й опытной группы вводили подкожно водный
раствор ТОАОК из расчета 5мг/кг массы тела по АДВ
в течение трех дней с повторением этой же схемы через
пять дней, животным 2-й опытной группы ‒ АСД фракцию 2 подкожно в дозе 0,06 мл/10 кг массы тела по приведенной выше схеме; белым мышам 3-й группы – биостил в терапевтической дозе (0,5 мл/10 кг массы тела)
в течение трех дней с повторением этой же схемы через
пять дней. Контрольным животным по аналогичной схеме вводили физиологический раствор.
139
После окончания опыта животных декапитировали
и получали сыворотку, в которой определяли уровень
концентрации вторичных, стабильных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и α-токоферола. Исследования проводили в лаборатории патофизиологии
Института клинической и экспериментальной медицины
Сибирского отделения Академии медицинских наук.
Уровень продуктов ПОЛ определяли по содержанию
в сыворотке крови малонового диальдегида, используя
метод Y. Yagi et al. (1976) по реакции с тиобарбитуровой
кислотой (ТБК). В работе использовали 2-Thiobarbituric
acid (М.в. 144,1, Sigma, США).
Подготовка пробы. Для исследования в центрифужную пробирку отбирали 0,5 мл сыворотки, затем к ней
добавляли 2,5 мл 0,67 % ТБК на 15 %-м растворе трихлоруксусной кислоты (ТХУ). После перемешивания пробирку помещали в кипящую водяную баню на 15 мин,
остужали при комнатной температуре и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 мин.
Образующийся окрашенный в розовый цвет триметиновый комплекс МДА с ТБК имеет максимум поглощения при 532 нм. Для вычленения неспецифического
компонента (ТБК-комплексы с аминокислотами, пигментами и др.) проводили спектрофотометрию пробы при
580 нм. Результаты просчитывали с учетом коэффициента миллимолярной экстинции – 155 моль-1 · см-1 (Staucliff
et al., 1969). Единица измерения – мкмоль/л.
Уровень антиоксиданта α-токоферола в сыворотке
крови проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Cuesta, Castro, 1986; Takeda et al.,
1996; Noll, 1996). В работе использовали оригинальный
микрометод анализа содержания α-токоферола с помощью ВЭЖХ на отечественном микроколоночном хроматографе «Милихром» (Микичур, Сафронов, 1988).
140
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]